杨华丽
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
- 供职机构：福建农林大学园艺学院更多>>
- 发文基金：福建省科技重大专项国家科技支撑计划星火计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- (Prunussalicina)WRKY 33的克隆与表达分析
- 2016年
- WRKY类转录因子是植物防御反应信号转导的重要组成部分,本研究为了探讨WRKY33基因的功能,以嫩叶为材料,采用RT-PCR和RACE技术相结合的方法,克隆得到WRKY33全长c DNA(命名为Ps WRKY33),对其进行生物信息学分析。以基因组DNA为模板,对该基因的ORF区域进行PCR扩增,获得WRKY33的g DNA全长。采用荧光定量PCR技术检测该基因在水杨酸处理下的表达模式。试验结果表明:Ps WRKY33 c DNA全长为2 113 bp,开放阅读框长为1 770 bp,编码589个氨基酸;Ps WRKY33蛋白含有两个WRKY保守结构域,与Pm WRKY33蛋白同源性最高。Ps WRKY33基因组全长为2 844 bp,存在3个内含子和4个外显子。荧光定量结果表明:Ps WRKY33在1 mmol/L水杨酸处理后,30 h表达量最高,呈先上升后下降的趋势。研究结果为深入研究WRKY33基因与水杨酸诱导植物抗病性的关系提供一定的参考价值。
- 蔡韡韡曾志芳佘文琴刘涛杨华丽吕恃衡潘东明陈桂信
- 采后‘琯溪蜜柚’果实柠檬酸合成酶基因的克隆与表达分析被引量：1
- 2017年
- 为研究柠檬酸合成酶基因与‘琯溪蜜柚’果实"返酸"的关系,以不同贮藏期‘琯溪蜜柚’果实汁胞为材料,克隆了1个柠檬酸合成酶基因,将其命名为CmCS,其含有1 416 bp开放阅读框,编码具有471个氨基酸的蛋白。生物信息学分析表明,CmCS推导的氨基酸序列与甜橙、川桑等植物的相似度皆大于90%,为稳定的亲水蛋白,亚细胞定位预测其定位于线粒体。结果表明,‘琯溪蜜柚’贮藏期间伴随着有机酸含量逐渐增加,CmCS基因表达量整体先升高后降低,推测其对‘琯溪蜜柚’果实采后有机酸代谢具有一定调控作用。
- 徐世荣杨华丽李小婷张智伟潘东明
- 关键词：采后克隆
- 夜来香SAMT基因的分离与原核表达被引量：3
- 2015年
- 为探究夜来香(Cestrum nocturnum)花香基因SAMT在花香代谢中的调控作用,以花瓣为材料,采用RTPCR和RACE技术相结合,克隆夜来香SAMT基因的全长c DNA。结果表明:该c DNA的序列长度为1 493 bp,编码365个氨基酸,其中包含1 098 bp ORF、130 bp 5′UTR和265 bp 3′UTR,将其命名为Cn SAMT;生物信息学分析结果表明:该基因所编码的氨基酸序列与烟草、番茄的同源性分别为98%和98%,属于甲基转移酶-7家族;原核表达结果表明:Cn SAMT的蛋白表达产物约为42 ku,与软件预测的结果大致相同。采用染色体步移技术,克隆夜来香Cn SAMT的5′端调控序列,结果表明:该序列长度为993 bp,且该序列除了含有TATA-box、CAAT-box等启动子核心元件外,还含有光、生长素、脱落酸、热胁迫、缺氧胁迫等外界环境条件响应的顺式作用元件。
- 杨华丽吕恃衡蔡韡韡郑鸿昌潘东明李子真陈桂信
- 关键词：夜来香原核表达
- ■NPR1同源基因全长cDNA的分离与表达分析被引量：3
- 2019年
- NPR1是水杨酸诱导抗病基因表达的重要调控因子之一,主要作用于水杨酸信号转导途径的上、下游。采用稀释池PCR法,筛选■(Prunus salicina var. cordata)叶片全长均一化cDNA文库,分离■叶片NPR1同源基因的全长cDNA;用不同浓度的水杨酸喷施一年生■嫁接苗嫩叶,采用荧光定量PCR技术检测所获得的NPR1同源基因的表达量差异。试验结果表明,共获得了4个NPR1同源基因的全长cDNA,分别命名为PsNPR1、PsNPR3.1、PsNPR3.2和PsNPR3.3,其长度分别为2 442、1 827、2 244和2 615 bp,其ORF长度分别为1 788、1 770、1 767和1 782 bp,分别编码596、590、589和594个氨基酸的蛋白质;氨基酸序列比对结果表明,■这4个NPR1同源基因的编码区均含有BTB/POZ和ANK两个保守域及核定位信号(NLS);PsNPR1与拟南芥的AtNPR1和At NPR2聚为一簇,PsNPR3.1、PsNPR3.2和PsNPR3.3与拟南芥的AtNPR3和At NPR4聚为另一簇。PsNPR1在喷施1.0 mmol·L^(-1)水杨酸的叶片中表达量最高;PsNPR1、PsNPR3.1、PsNPR3.2在响应1.0 mmol·L^(-1)水杨酸诱导过程中表达量持续上升,30h表达量最高,之后呈下降趋势,因此,水杨酸诱导抗病基因高表达的最佳处理浓度为1.0 mmol·L^(-1),最佳响应时间为30 h。
- 蔡韡韡曾志芳魏春杨华丽杨华丽佘文琴
- 关键词：水杨酸NPR1
- WRKY同源基因的分离与表达分析被引量：1
- 2017年
- 以(Prunus salicina Lindli.var cordataJ.Y.Zhang et al.)为试验材料,采用稀释池PCR法,筛选叶片全长均一化cDNA文库,获得了WRKY同源基因的12个全长cDNA分别命名为PsWRKY7、PsWRKY14、PsWRKY20、PsWRKY21、PsWRKY22、PsWRKY29、PsWRKY31、PsWRKY32、PsWRKY33、PsWRKY40、PsWRKY46和PsWRKY75,长度分别为1 517、1 798、2 098、1 177、1 242、1 396、2 135、1 760、2 113、1 047、1 258和700bp,ORF长度分别为1 095、1 572、1 764、1 068、1 071、1 002、1 944、1 602、1 770、963、1 077和672bp,分别编码364、523、587、355、357、333、647、533、589、320、358、223个氨基酸。荧光定量结果显示,12个WRKY同源基因在1.0mmol/L水杨酸处理后,所获得的PsWRKY表达量均显著上调,表明WRKY基因可能是水杨酸诱导防御反应的重要调控因子。
- 蔡韡韡刘涛杨华丽许颖妍徐意瑾潘东明陈桂信
- 关键词：WRKY基因荧光定量PCR
- 中国水仙FOMT2基因及启动子的克隆与分析被引量：1
- 2018年
- 为探究花色基因FOMT2在中国水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)类黄酮代谢途径中的功能作用,以期明确小分子化合物甲基化修饰在水仙类黄酮代谢中的作用,本研究以多花水仙"金盏银台"(Narcissus tazetta var.chinensis‘jinzhanyintai’)不同时期的花器官为材料,提取总RNA,采用RACE与RT-PCR结合的方法,克隆得到NtFOMT2基因的cDNA全长。结果表明:NtFOMT2基因的cDNA全长为1 404 bp,其中5′UTR长度为33 bp,3′UTR长度为279 bp,开放阅读框为1 092 bp,共编码363个氨基酸。定量PCR分析结果表明,NtFOMT2基因表达水平在水仙花器官的不同时期差异很大,其表达模式表现为Ⅱ>Ⅰ>Ⅲ>Ⅳ。此外,为分析水仙花色素基因的调节因素,以基因组DNA为模板,采用染色体步移法,成功克隆并分析NtFOMT2基因的5’端调控序列。结果表明,NtFOMT2基因启动子序列除包含起始转录位点(transcription start site,TSS)TATA-box、CAAT增强子外,还包含多个顺式作用元件,如ACE、ATCT-motif、G-box、Sp1等多个光响应元件。此外,该启动子序列还含有MYB参与抗旱诱导的结合位点MBS元件、MYB转录因子结合位点等。
- 张蒙潘腾飞余磊余磊杨华丽
- 关键词：中国水仙基因克隆启动子类黄酮
- 夜来香LIS基因的克隆与表达分析被引量：3
- 2017年
- 为了研究夜来香生物钟和花香代谢机制,本研究以夜来香花瓣为材料,利用PCR技术,从中获得了夜来香LIS基因的全长cDNA,并命名为CnLIS。生物信息学分析结果表明:该cDNA序列全长为1 800 bp,编码560个氨基酸,其中ORF为1 683 bp,5'UTR为56 bp,3'UTR为61 bp;该序列编码的氨基酸序列与软枣猕猴桃、温州蜜柑LIS基因的同源性分别为55%、50%,属于类异戊二烯合成C1超级家族。实时荧光定量PCR分析结果表明,0~12 h CnLIS表达水平较低,16 h后表达量明显上调,20 h表达量达最大,随后表达量急剧下降,其表达量随花瓣开放与闭合呈节律性变化。推测CnLIS可能参与夜来香香气形成,调控花香形成过程,同时,该基因的表达可能受生物钟基因所调控。
- 吕恃衡杨华丽吕科良蔡韡韡刘涛朱梦珠潘东明陈桂信
- 关键词：夜来香基因克隆生物信息学实时荧光定量PCR
- ‘红肉蜜柚’CmMYB330基因的分离与表达分析被引量：6
- 2017年
- 【目的】分析‘红肉蜜柚’果实汁胞粒化相关的MYB转录因子基因特征与表达模式,探讨MYB转录因子在蜜柚汁胞木质素代谢过程中的作用机制,为研究蜜柚汁胞粒化发生机制提供借鉴。【方法】以‘红肉蜜柚’果实汁胞为试材,参考甜橙MYB全基因组分析,利用生物信息学分析和PCR技术克隆Cm MYB330的编码区序列及其5’端调控序列,并对序列进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术对Cm MYB330在‘红肉蜜柚’果实汁胞不同发育时期和不同部位的表达情况进行分析。利用农杆菌介导法将Cm MYB330与GFP的融合表达载体注射转化到烟草叶片中进行亚细胞定位分析。利用酵母双杂交系统对Cm MYB330进行转录激活活性分析。【结果】Cm MYB330的编码区序列长度为942 bp,编码313个氨基酸,预测为核定位蛋白,为典型的R2R3 MYB转录因子。Cm MYB330与甜橙Cs1g19400.1、Am MYB330等亲缘关系近,都属于R2R3 MYB第4亚组。Cm MYB330的5’端调控序列为起始密码子上游-1 748 bp序列,预测该序列含有TATA-box、CAAT-box 2个启动子核心元件,3个MBS,1个AC-I,1个5UTR Py-rich stretch,还有大量激素(如赤霉素、乙烯、水杨酸等)响应元件。Cm MYB330表达量在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中有起伏,但总体呈现上升趋势,表达量在花后208 d达到最大,之后开始下降。在转化p-super1300-Cm MYB330-GFP的烟草叶片细胞核中检测到绿色荧光信号,与预测结果一致,说明Cm MYB330定位在细胞核中。在Y2H Gold酵母中,Cm MYB330表现为没有转录激活活性。【结论】克隆了‘红肉蜜柚’MYB转录因子Cm MYB330编码区序列及其5’端调控序列,Cm MYB330属于R2R3 MYB第4亚组,与汁胞粒化相关,为核定位蛋白,同时分析了其在‘红肉蜜柚’果实汁胞发育过程中的表达水平,总体呈上升趋势。为进一步研究Cm MYB330与蜜柚汁胞粒化的关系奠定了基础。
- 杨华丽蔡韡韡吕恃衡徐世荣余磊潘腾飞潘东明
- 关键词：转录因子
