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人金属硫蛋白MT-2a的原核表达、纯化及其抗血清的制备被引量：6: 2006年; 目的:在大肠杆菌中表达人金属硫蛋白(MT)-2a与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,并制备兔抗MT-2a抗血清。方法:人MT表达菌株BL21/GST-MT-2a经IPTG诱导、超声裂解及GlutathioneSepharose4B亲和层析纯化后,以可溶性融合蛋白GST-MT-2a免疫新西兰大白兔,制备抗血清。用双向凝胶免疫扩散和ELISA检测抗血清的效价,用Westernblot检测抗血清的特异性。结果:经诱导表达及亲和层析纯化,每L菌液可获得可溶性融合蛋白GST-MT-2a38mg。以此融合蛋白免疫新西兰大白兔制备的抗血清,双向免疫扩散效价>1∶256,ELISA效价>1×10-7。Westernblot检测证明抗血清的特异性良好。结论:人MT-2a在大肠杆菌中得到高效表达,以纯化的GST-MT-2a可溶性融合蛋白免疫家兔得到高效价、高特异性的抗血清,为进一步研究MT-2a蛋白的生物学功能提供了重要的制剂。; 周敏杨芳贺智敏刘孝荣陈主初孙麟孙宇; 关键词：金属硫蛋白原核表达融合蛋白抗血清

NF-κB介导的EBV-LMP1在Rat-1细胞转化和成瘤中的作用被引量：10: 2007年; 背景与目的:EB病毒潜伏性膜蛋白1(latent membrane protein1,LMP1)是病毒基因组编码的致瘤蛋白。本研究拟探讨LMP1在细胞转化和致瘤过程中的作用机制。方法:采用基因重组方法构建LMP1和显性负突变IκBα逆转录病毒质粒pLNSX-LMP1和pBabe-IκBα,分别与含有转录因子NF-κB启动子的荧光素酶表达质粒共转染293细胞,单光子检测仪测定LMP1对NF-κB的活化作用及IκBα对NF-κB的抑制作用;同时将2种重组病毒载体分别导入PA317细胞包装,获取2种逆转录病毒(retrovirus,RV),单独(RV-LMP1)或先后(先RV-LMP1后RV-IκBα)感染体外培养的Rat1细胞,检测转导细胞的集落形成能力及裸鼠成瘤能力。结果:当pBabe-IκBα与pLNSX-LMP1以1∶1共转染,IκBα能使LMP1活化NF-κB的作用降低75%;当以3∶1共转染,LMP1的活化作用几乎全部被抑制。IκBα能明显抑制RV-LMP1感染细胞的恶性表型:平皿克隆形成数从368±7和287±17分别降至59±6和8±2(n=3,P<0.001);软琼脂集落形成数从477±13和347±10分别降至61±15和95±7(n=3,P<0.001);裸鼠成瘤能力显著降低,瘤体积自(1.61+0.23)cm3降至(0.20±0.08)cm3(n=5,P<0.001)。结论:EB病毒LMP1促Rat1细胞恶性转化作用主要依赖NF-κB的活化。; 张志伟贺智敏周敏张琼余艳辉陈主初; 关键词：NF-ΚB IΚBΑ 细胞转化

舌癌耐药细胞系的建立及耐药相关基因鉴定: 目的:建立平阳霉素诱导的舌癌多药耐药细胞系,探讨舌癌多药耐药机制。方法:采用抗癌药平阳霉素(pingyangmycin,PYM,又称博莱霉素A5)低浓度递增结合大剂量间歇法体外诱导舌癌细胞系(Tca8113)一年余,通过...; 郑国沛周敏余艳辉彭波王成昆谷依学欧阳咏梅贺智敏; 关键词：舌癌多药耐药 CDNA芯片; 文献传递

阻断肾素——血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ及其受体表达的影响: 目的:观察STZ糖尿病大鼠肾脏AngⅡ及其AT1受体(ATR)表达的改变,以及阻断RAS对其影响,以探讨阻断肾素-血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏保护作用的作用机理.方法:雄性SD大鼠分成正常对照组(NC)和糖尿病组,糖尿...; 钟惠菊张冬梅周敏; 文献传递

EBV-LMP1促CNE2细胞迁移的作用机制被引量：13: 2006年; 目的:探讨EBV-LMP1对鼻咽癌细胞CNE2迁移表型的影响及作用机制。方法:用RV-LNSX,RV-LMP1和RV-LMP1TRADD逆转录病毒分别感染CNE2细胞,G418筛选后,观察和检测转基因细胞的形态学特点,在基质中的运动迁移能力以及E-钙黏蛋白(E-Cadherin)表达的变化;用pLNSX,pLNSX-LMP1和pLNSX-LMP1TRADD质粒分别与E-Cadherin报告基因共转染293细胞,检测LMP1对E-Cadherin启动子活性的影响。结果:与CNE2和CNE2-LNSX细胞相比,CNE2-LMP1在培养过程中由扁平、鹅卵状上皮细胞形态逐渐演变为细胞间接触消失的长梭状纤维细胞形态,相对迁移明显增大(n=3,P<0.05),且E-Cadherin表达明显下调或缺失;随着共转染野生型LMP1(pLNSX-LMP1)剂量的增加(0.2,0.6,1.0μg),对E-Cadherin启动子转录活化的抑制率增加,呈明显浓度依赖性;LMP1TRADD不改变CNE2细胞形态学及迁移表型,对E-Cadherin启动子的转录活性及蛋白表达亦无明显影响。结论:抑制E-Cadherin启动子活化可能是EBV-LMP1下调E-Cadherin蛋白表达、促CNE2细胞迁移的机制之一,位于LMP1羧基端的TRADD可能是其促迁移的主要活性部位。; 张志伟贺智敏周敏丁渭余艳辉陈主初; 关键词：EB病毒细胞转化 E-钙黏蛋白迁移

严重急性呼吸综合征冠状病毒2变异体对全球疫情防控的影响分析: 2022年; 由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒肺炎(COVID-19,简称新冠肺炎)的出现,对国际公众健康构成了严重威胁,伴随COVID-19大流行而来的是SARS-CoV-2基因组的不断突变,尤其是受关注的变异体(variants of concern,VOCs)给全球COVID-19疫情防控带来了挑战。本文综述了SARS-CoV-2的突变情况和现阶段主要流行的VOCs的特征,总结了现有及潜在的COVID-19预防、诊断和治疗手段,并通过分析SARS-CoV-2变异体对全球COVID-19疫情防控措施的影响,提出合理的建议,以期为今后可能爆发的大范围流行病的防控提供理论依据。; 胡尔雅周敏曾雯辉周敏严紫东马健; 关键词：突变变异体疫情防控

人HER2胞外区基因重组及重组蛋白的纯化被引量：1: 2006年; 为在体外纯化可溶性HER 2胞外区蛋白并提高其原核表达产量,将多聚酶链式反应(PCR)方法获得的HER 2基因胞外段编码区重组至pGEX-6P-1质粒,转化大肠杆菌BL 21,采用不同的诱导条件分析融合蛋白的表达及其溶解性,不溶的包涵体经变性复性,与裂解液上清分别经G lu tath ione Sepharose 4B亲合纯化融合蛋白。结果发现,重组蛋白在原核细胞中以可溶和不可溶两种表达形式存在,但以不溶的包涵体形式为主。低温(30℃)、较高的细菌密度(A 600=1.8)和适当的培养基添加剂能有利于可溶性融合蛋白的表达。G lu tath ione Sepharose 4B亲合纯化细菌裂解液上清和复性后的融合蛋白,其产量为1.23 m g/L菌液,最大限度地获得了可溶性的HER 2蛋白胞外段,为HER 2特异性抗体的制备及其功能研究打下了良好的基础。; 刘孝荣贺智敏杨芳余艳辉吕辉周敏陈主初; 关键词：人表皮生长因子受体2 基因重组蛋白纯化

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周敏