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家蚕过敏原Profilin的表达、纯化、免疫学鉴定及其生物信息学分析被引量：1: 2017年; 目的:克隆表达家蚕(Bombyx mori)Profilin蛋白,鉴定其免疫原性并进行B细胞抗原表位预测和构建分子进化树。方法:从NCBI上获取家蚕Profilin蛋白的基因序列,合成该基因并构建到pet-28a表达载体上,重组质粒转化至E.coli BL21,IPTG诱导基因表达,通过亲和层析获取高纯度蛋白;用Western blot方法对重组蛋白进行过敏原性鉴定;通过DNAStar软件分析其潜在的B细胞抗原表位;应用MEGA5.05进行序列比对,并构建分子进化树。结果:成功表达出重组蛋白,且重组蛋白与家蚕过敏患者血清有一定的Ig E结合。结论:成功克隆表达出具有免疫原性的Profilin蛋白,并成功预测出其B细胞抗原表位和构建出分子进化树。; 胡维梁志林王良录钟慧玲刘志刚; 关键词：家蚕

家蚕新过敏原HSP7O蛋白克隆表达及哮喘模型的建立: 养蚕在中国已有5000年历史,养蚕业在中国规模庞大,参与人员众多,家蚕的广泛养殖以及随之而来的蚕丝用品的大量使用导致家蚕过敏时有发生。家蚕过敏临床表现以过敏性哮喘为主,伴有过敏性鼻炎、结膜炎和过敏性皮炎。本研究结合蛋白组...; 胡维; 关键词：家蚕 HSP70蛋白哮喘模型; 文献传递

粉尘螨过敏原Der f15的表达、纯化和生物信息学分析被引量：1: 2015年; 目的表达纯化出粉尘螨过敏原Der f15蛋白,并预测其三维结构及B细胞抗原表位。方法利用实验室已有的Der f15质粒转化到大肠杆菌Rosetta,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,通过亲和层析纯化蛋白,经免疫印迹法（Western-blot）分析Der f15免疫原性,用生物信息学方法分析Der f15的三维结构及B细胞抗原表位。结果高效表达出Der f15蛋白。SDS-PAGE结果显示：表达的产物分子量约107ku。经亲和层析成功纯化蛋白,纯化蛋白以尘螨过敏患者血清为一抗进行Western-blot,结果显示：Der f15重组蛋白能与患者血清IgE发生特异性结合,而阴性对照没有反应条带出现,表明Der f15具有良好的抗原性。对B细胞抗原表位的预测表明,Der f15蛋白的第20-35、121-131、340-359及485-500是潜在B细胞抗原表位。结论粉尘螨Der f15表达、纯化和生物信息学分析研究有助于了解Der f15蛋白的分子生物学特性,为粉尘螨过敏反应性疾病的特异性诊断和疫苗治疗奠定理论基础。; 胡维詹政科刘玉琳喻海琼杨小猛刘晓宇; 关键词：粉尘螨免疫印迹法

家蚕过敏原细胞视黄酸结合蛋白(CRABP)的克隆表达及生物学分析: 2016年; 目的研究家蚕细胞视黄酸结合蛋白(CRABP)的原核克隆表达及生物学意义。方法家蚕总RNA提取;根据ref|NM-001043899|设计引物;RT-PCR扩增;PET-28a质粒目的基因表达载体的构建,转化大肠杆菌BL21(DE3);Western bolt检测重组CRABP;采用MEGA5工具包和clustalw2进行同源性分析;采用ProtParam Tools预测CRABP的理化性质;采用PSIPRED和SWISS-MODEL预测其蛋白质结构。利用Preprod、IEDB和DNAStar对CRABP蛋白T、B细胞抗原表位进行预测。结果克隆出家蚕CRABP基因开放阅读框399bp,编码132个氨基酸。CRABP工程菌(DE3)经IPTG诱导高效表达CRABP重组的可溶性蛋白,分子量约18kDa。重组CRABP能够与家蚕过敏患者血清IgE结合。测序证明克隆的家蚕CRABP蛋白与黑脉金斑蝶细胞视黄酸结合蛋白(gb|EHJ79039.1|)同源性为94%。系统进化树结果显示家蚕与小菜蛾亲缘关系比较近。理化性质预测显示CRABP蛋白质较稳定。二级结构及三级结构预测结果显示CRABP的结构主要以β折叠组成。T细胞抗原表位预测得到4个肽序列(4-12、20-29、51-59、80-88)。B细胞抗原表位预测得到4个肽序列(1-16、40-55、67-82、105-120)。结论克隆并表达的家蚕CRABP蛋白具有良好的变应原性,为进一步研究家蚕过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。; 梁志林王辉胡维刘志刚刘晓宇; 关键词：家蚕原核表达生物信息学分析

家蚕过敏原CSP5克隆表达、纯化鉴定及分析被引量：2: 2016年; 克隆家蚕过敏原CSP5（chemosensory protein 5 precursor）基因，表达、纯化该蛋白，鉴定其免疫活性，并进行生物信息学分析。人工合成家蚕化学感受蛋白5前体CSP5基因，将其连接至pMD18-T克隆载体，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后进行纯化，用western blotting和ELISA鉴定其免疫学特性，并采用生物信息学方法预测CSP5蛋白的理化性质、三级结构、潜在B细胞抗原表位。本研究成功克隆了纯度较高的重组CSP5蛋白，测序鉴定蛋白分子质量约为14．25kD。重组过敏原CSP5能与家蚕过敏患者血清IgE发生特异性结合。生物信息学方法推导其潜在B细胞抗原表位为17～22、35～36、51～55、70～74、106～110、112～115。获得的重组蛋白CSP5具有与天然蛋白相似的免疫学活性，为以标准化抗原作为临床特异性诊断和治疗以及由家蚕引起的过敏性疾病的进一步研究奠定了基础。; 马一禾胡维梁志林王辉刘志刚; 关键词：家蚕表达纯化 WESTERN BLOTTING

家蚕蚕蛹过敏原CPH30的表达、纯化、免疫学鉴定及B细胞抗原表位预测被引量：4: 2016年; 【目的】克隆、表达纯化出家蚕Bombyx mori蚕蛹过敏原蛋白CPH30(cuticular protein hypothetical 30 precursor),并对其进行免疫学鉴定及B细胞抗原表位预测。【方法】通过蛋白组学方法分析CPH30蛋白的潜在过敏原性,人工化学合成该蛋白基因,将基因连接到p ET-28a载体上,重组质粒转化至大肠杆菌Escherichia coli BL21,IPTG诱导基因表达。通过镍亲和层析获取高纯度蛋白,用Western blot方法对蛋白进行免疫学鉴定。通过DNAStar软件分析其潜在的B细胞表位。【结果】成功构建出CPH30基因的表达载体;表达纯化出CPH30蛋白,SDS-PAGE电泳结果显示分子量为25 k Da左右;Western blot结果显示,CPH30蛋白与家蚕过敏患者血清具有Ig E结合性,证明CPH30具有免疫原性;利用DNAStar软件成功分析出氨基酸序列第57-69和150-158位为潜在的B细胞表位。【结论】成功克隆表达出CPH30蛋白,并成功鉴定出其免疫原性,为家蚕蚕蛹过敏反应性疾病的特异性诊断和疫苗治疗奠定理论基础。; 胡维梁志林王良录刘志刚; 关键词：家蚕免疫学鉴定 B细胞表位免疫原性

家蚕过敏原通过调控单核细胞的死亡诱导过敏反应的发生: <正>目的 :表达、纯化和鉴定新的家蚕过敏原,并明确其诱发过敏反应的免疫学机制。方法 :利用2-D电泳和质谱偶联分离鉴定潜在的家蚕过敏原,通过临床血清学检测及小鼠哮喘模型的建立,明确其是否为过敏原。利用过敏原体外刺激上皮...; 王辉胡维刘志刚; 关键词：家蚕单核细胞凋亡; 文献传递

家蚕过敏原通过调控单核细胞的死亡诱导过敏反应的发生: 目的：表达、纯化和鉴定新的家蚕过敏原，并明确其诱发过敏反应的免疫学机制。方法：利用2-D电泳和质谱偶联分离鉴定潜在的家蚕过敏原，通过临床血清学检测及小鼠哮喘模型的建立，明确其是否为过敏原。利用过敏原体外刺激上皮细胞、巨噬...; 王辉胡维刘志刚; 关键词：家蚕单核细胞凋亡

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胡维

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