陆海涛
- 作品数：8 被引量：26H指数：3
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- 兔骨膜细胞和髓核细胞体外共培养向成骨分化的研究
- 目的:探讨兔髓核细胞向成骨细胞转分化的潜能以及髓核细胞与骨膜细胞共培养向成骨细胞分化的生物学特性.方法:以兔髓核组织和骨膜组织为材料,采用Ⅱ型胶原酶消化法和组织块贴壁法分离细胞,完全培养基培养,分离和纯化骨膜细胞和髓核细...
- 张峻玮袁峰陆海涛
- 骨膜细胞与髓核细胞共培养向成骨方向的分化被引量：2
- 2015年
- 背景:骨膜细胞已被应用于骨缺损及修复,但其可否在成骨诱导环境中与髓核细胞共培养向成骨分化,并应用于椎间隙骨性融合的相关研究报道较少。目的:分离培养髓核细胞与骨膜细胞,观察特定环境下髓核细胞的成骨潜能,以及加入骨膜细胞与其共培养后的成骨能力。方法:Ⅱ型胶原酶消化离心贴壁法分离兔髓核细胞;组织贴壁培养法分离兔骨膜细胞。采用细胞表面抗原CD90、CD105免疫荧光染色法鉴定骨膜细胞,甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学鉴定髓核细胞。实验分为两组:成骨诱导环境单独培养的髓核细胞为对照组,加入骨膜细胞与髓核细胞共培养为实验组。CCK8法检测细胞增殖,分别行碱性磷酸酶、茜素红染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色进行成骨鉴定,Western blot检测两组细胞成骨诱导后骨桥蛋白的表达。结果与结论:骨膜细胞表面抗原CD90、CD105呈阳性,髓核细胞甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原染色阳性;1,3,5,7,9 d各时间点实验组髓核细胞增殖活性显著高于对照组;诱导2周后2组细胞碱性磷酸酶染色、茜素红染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色均为阳性,但实验组阳性表达高于对照组(P<0.05);实验组骨桥蛋白表达强于对照组。髓核细胞具有成骨分化的潜能,但体外的增殖能力较低,加入骨膜细胞后,共培养细胞增殖分化能力提高。成骨诱导下骨膜细胞与髓核细胞共培养具有良好相容性,细胞相互黏附,并具有强于单独诱导髓核细胞的成骨能力。
- 杨宇明袁峰陆海涛张峻伟盛晓磊李智多
- 关键词：骨细胞髓核细胞骨膜细胞共培养分化
- 葛根素上调microRNA影响椎间盘退变的机制研究
- 目的：本研究为了探讨葛根素、microRNAs、MMPs影响椎间盘退变的作用及分子机制.方法：体外分离培养人退变的椎间盘髓核细胞,将其传代至第三代进行试验,将试验分为两个部分：1.将实验分为三组：MicroRNA146b...
- 陆海涛袁峰张峻玮李威
- 关键词：葛根素MICRORNA椎间盘退变
- 低氧环境下共培养的骨膜细胞和髓核细胞骨向分化能力的研究被引量：5
- 2016年
- [目的]探讨低氧环境对体外共培养的骨膜细胞、髓核细胞骨向分化能力的影响。[方法]采用组织块法分离兔骨膜细胞,胰酶、胶原酶消化法获取髓核细胞,传至3代进行共培养实验,实验分为2组:正常氧组(20%O2)、低氧组(5%O2),共培养后用CCK-8检测细胞增殖情况,用AKP试剂盒、BCA试剂盒检测碱性磷酸酶活性,RT-PCR检测骨钙素、Ⅰ型胶原、RUNX2以及HIF-1a mRNA的表达,免疫组化试剂盒检测Ι型胶原的表达,茜素红染色检测钙盐沉积或钙结节。[结果]骨膜细胞和髓核细胞在体外成功分离和培养,共培养后保持了较高的增殖率,经过成骨诱导培养后成功诱导为成骨细胞,细胞增殖曲线为"S"型,两组在1、3、5、7、9 d的光吸收值(OD)比较差异有统计学意义(P<0.05);低氧组的骨钙素、Ⅰ型胶原、RUNX2以及HIF-1a mRNA表达水平高于常氧组(P<0.05),碱性磷酸酶(ALP)活性高于常氧组(P<0.05),细胞成骨染色(茜素红染色、免疫组化)结果显示低氧组较常氧组表达增多。[结论]低氧条件下体外共培养的骨膜细胞和髓核细胞经成骨诱导后向成骨细胞分化的能力更强。
- 陆海涛袁峰张峻玮杨宇明
- 关键词：低氧骨膜细胞髓核细胞共培养成骨分化
- 兔骨膜细胞分离培养的方法改进被引量：2
- 2016年
- 背景:近年来,骨膜作为细胞治疗的种子细胞来源,因其自身的优越性而备受关注。目的:探讨兔骨膜细胞分离培养的最佳方法及其生物学特性。方法:无菌条件下取出兔胫骨内侧面骨膜,以Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法分离培养兔骨膜细胞,置于DMEM/F12完全培养基培养。倒置显微镜观察细胞形态;CCK-8法检测骨膜细胞增殖活性,绘制细胞生长曲线图;流式细胞仪检测细胞表型CD90、CD105;成骨诱导培养基诱导骨膜细胞成骨分化,2周后茜素红染色检测钙结节沉积;成脂诱导培养基诱导骨膜细胞成脂分化,2周后油红O染色检测脂滴颗粒。结果与结论:(1)Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法原代培养耗时短,提高了组织块成活率;Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法获得的骨膜细胞纯度较高,增殖能力强,呈梭形旋涡状或平形状生长,茜素红染色、油红O染色证实骨膜细胞具有多向分化潜能;(2)结果表明,Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法能够在较短时间内获得高纯度的骨膜细胞,且增殖能力强,细胞具有多向分化能力。
- 张峻玮陆海涛袁峰杨宇明
- 关键词：骨膜细胞分离胶原酶类骨细胞骨膜细胞
- 低氧培养对骨膜细胞成软骨分化的影响被引量：6
- 2016年
- 目的 体外分离培养骨膜细胞,探讨低氧对其成软骨分化的影响.方法 采用兔胫骨骨膜为材料分离骨膜细胞,完全培养基培养,倒置显微镜观察细胞形态;成软骨诱导培养基诱导分化,根据培养环境氧浓度分为实验组（低氧组,3％O2）及对照组（常氧组,20％O2）;诱导2周后甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖的合成;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测成软骨相关基因Ⅱ型胶原α1（Col2α1）、性别决定区Y框蛋白9（Sox9）、蛋白聚糖（Aggrecan）以及低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达变化.结果 原代培养骨膜细胞生长良好,呈梭形旋涡状或平形状生长;诱导后实验组甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色均强于对照组;成软骨指标Col2α1（1.00±0.17）、Sox9（0.77±0.13）、Aggrecan（1.12 ±0.10）及HIF-1α（1.45±0.28） mRNA表达水平高于对照组（0.64 ±0.12、0.38±0.01、0.68±0.03、0.89±0.20）,呈一致的上调趋势（P＜0.05）.结论 骨膜细胞体外生长良好,低氧具有明显促进骨膜细胞分化为软骨细胞的作用.
- 张峻玮陆海涛杨宇明袁峰郭开今邓斌
- 关键词：低氧骨膜细胞成软骨分化低氧诱导因子-1Α
- 葛根素上调microRNA影响椎间盘退变的机制研究
- 目的:本研究为了探讨葛根素、microRNAs、MMPs影响椎间盘退变的作用及分子机制.方法:体外分离培养人退变的椎间盘髓核细胞,将其传代至第三代进行试验,将试验分为两个部分:1.将实验分为三组:MicroRNA146b...
- 陆海涛袁峰张峻玮李威
- 短节段与长节段固定融合修复退变性脊柱侧凸的Meta分析被引量：13
- 2016年
- 背景:目前退变性脊柱侧凸治疗的主要目的是解除患者症状,手术矫正侧凸畸形恢复脊柱的平衡及功能,但目前修复方式的选择存在一定的争议。目的:系统评价短节段与长节段固定融合修复退变性脊柱侧凸的效果及安全性。方法:通过CNKI、CBM、VIP、万方数据库等中文数据库,Pubmed、EMbase、Cochrane library等外文数据库,收集2015年5月前国内外已公开发表的关于短节段与长节段固定融合修复退变性脊柱侧凸的试验。采用Rev Man 5.3.4软件对纳入文献进行统计分析。结果与结论:共计纳入11篇文献,共533例患者。其中短节段组272例,长节段261例。Meta分析结果显示:两种固定方法相比,脊柱Cobb角的改善(P<0.000 01)、脊柱前凸角的改善(P<0.000 01)方面,长节段组的疗效明显优于短节段组。冠状面失衡的矫正(P=0.06)、侧向滑脱矫正(P=0.24)方面两组差异无显著性意义。在日本骨科协会评分(P=0.93)、目测类比评分(P=0.22)以及Oswestry功能障碍指数(P=0.13)的改善方面,两组差异无显著性意义。在术后并发症(P=0.0006)以及术后再手术率方面(P=0.03),长节段组高于短节段组,两组在临近节段病变的发生率上差异无显著性意义(P=0.81)。提示长节段固定融合在纠正脊柱畸形方面优于短节段固定融合,但修复后并发症及再手术率高于短节段固定融合,在选择固定融合方案时应综合考虑。
- 陆海涛袁峰杨宇明张峻玮李智多盛晓磊
- 关键词：脊柱侧凸META分析骨科植入物退变性脊柱侧凸退变性腰椎侧凸
