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人胚胎脑组织蛋白提取物诱导人胎盘间充质干细胞向神经细胞的分化被引量：1: 2014年; 背景:选择合适的诱导方法诱导人胎盘间充质干细胞分化为神经元样细胞是临床治疗神经损伤的关键。目的:在人胎盘间充质干细胞中加入商品化的人胚胎脑组织蛋白提取物,观察其诱导分化为神经元样细胞的可行性。方法:采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞,传至第3代,将人早期胚胎脑组织蛋白提取物加入诱导培养基培养6 d,加入浓度为20 nmol/L全反式维甲酸和500μg/L音猬因子培养3 d,换新的培养液,包含体积分数为10%胎牛血清,10μg/L脑源性神经营养因子,20μg/L神经胶质细胞源性神经营养因子,50μg/L胰岛素样生长因子Ⅱ型继续培养3 d。结果与结论:胎盘组织经酶消化后获得贴壁细胞,传至第2代细胞形态为梭形,成漩涡样生长,传至第3代细胞形态较均一。诱导后细胞经免疫细胞化学法检测均表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43;ELISA法检测细胞培养上清脑源性神经营养因子、神经营养因子3、神经营养因子4为阳性表达;RT-PCR检测细胞微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43均为阳性表达。结果表明人胚胎脑组织蛋白提取物使人胎盘间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。; 马丽君范恒马晓娜魏军李玉奎; 关键词：间质干细胞干细胞人胎盘间充质干细胞

REG3α基因促进胰岛内皮细胞分泌胰岛素: 2012年; 目的探讨小鼠胰岛再生衍生因子3α(REG3α)对胰岛β细胞功能代偿作用。方法建立小鼠部分(90%)胰腺切除模型,分别于术前、术后12和24 h检测血糖,术后48 h收集小鼠剩余胰腺组织,经全基因组芯片分析、q-PCR验证REG3α表达;然后构建REG3α过表达质粒,转染MS1细胞系,48 h后ELISA检测细胞上清培养液胰岛素分泌量的变化,并通过q-PCR检测转染后MS1中PDX1、INSULIN2 mRNA表达水平。结果小鼠部分胰腺切除后REG3α发生高表达。转染REG3α过表达质粒组胰岛素分泌量显著高于未转染组(转染REG3α组879±2 ng/L,未转染组686±5 ng/L,P<0.01);转染REG3α过表达质粒组胰岛素分泌量显著高于转染空载体pcDNA3.1组(转染REG3α组879±2 ng/L,转染空载体组671±5 ng/L,P<0.01)。转染REG3α过表达质粒后MS1中的PDX1、INSULIN2mRNA表达水平明显高于未转染组及转染空载体pcDNA3.1组(P<0.01)。结论 REG3α促进内皮细胞表达和分泌胰岛素可能具有对胰岛β细胞功能代偿作用。; 滕兆刚范恒王立斌李玉奎魏军; 关键词：胰岛素转染

人乳腺肿瘤干细胞分离培养及鉴定被引量：4: 2012年; 目的:体外分离、培养乳腺肿瘤干细胞,并鉴定其生物学特性。方法:收集临床术后乳腺癌患者的肿瘤组织,经机械剪切联合酶消化法获得肿瘤细胞并培养,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原,MTT比色法检测细胞生长曲线,实时定量PCR(qPCR)鉴定细胞Sox2、Nanog等基因表达,免疫荧光检测细胞特异性蛋白Bcl-2、孕激素受体(PR)的表达。结果:所获得的细胞呈克隆球样形态生长,鉴定结果发现其具有CD44+/CD24-表型,该细胞高表达Sox2、Nanog基因,且Bcl-2、PR蛋白均阳性表达。结论:人乳腺肿瘤组织中存在具有自我更新和增殖能力、表达CD44+/CD24-的乳腺肿瘤干细胞,并能在体外长期培养。; 王立斌何亚琴吴立刚陈冬梅范恒贾伟; 关键词：乳腺肿瘤干细胞

C-fos诱导生长因子在胰腺再生中的重要作用被引量：1: 2012年; 目的探讨c-fos诱导生长因子(Figf)对小鼠胰腺再生的影响。方法建立小鼠胰腺损伤模型,于术前、术后12h、24h检测血糖,48h后收集剩余胰腺组织。经全基因组芯片分析、Q-PCR验证Figf发生高表达。构建Figf过表达质粒,转染胰岛内皮细胞(MS 1),36h后ELISA检测上清培养液胰岛素分泌量的变化,Q-PCR检测转染后MS 1中Pdx1、Insulin1mRNA表达水平。结果小鼠胰腺再生过程Figf mRNA表达上调。与未转染组、转染PcDNA 3.1组比较,转染Figf过表达质粒组胰岛素分泌量明显升高[未转染组(116.89±6.09)(P<0.01);转染PcDNA 3.1组(114.24±4.60)(P<0.01)],转染Figf过表达质粒组Pdx1、Insulin1mRNA表达水平均明显升高(P<0.01)。结论 MS 1中过表达Figf可使Pdx1、Insulin1mRNA表达水平升高,增加胰岛素的分泌。Figf可能在胰岛β细胞再生中发挥着重要作用,是小鼠胰腺再生的关键基因。; 滕兆刚魏军范恒李玉奎王立斌; 关键词：胰岛素胰腺再生

pri-mir-302/367重组慢病毒载体的构建及其下游调节基因的鉴定: 2013年; 目的:构建可诱导表达pri-mir-302/367的慢病毒载体,并研究miR-302/367家族基因miR-302a/b/c/d和miR-367及其下游调节基因OCT4、SOX2和NANOG在HeLa细胞中的诱导性表达。方法:以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增pri-mir-302/367基因。经双酶切后连接入pLV-TRE质粒,构建pLV-TRE-302慢病毒重组体,酶切及测序予以鉴定。将重组质粒和辅助质粒共同转染293 FT细胞,并测定病毒滴度。用病毒转染HeLa细胞,强力霉素(doxycline,DOX)诱导后,通过real-time PCR测定miR-302/367家族基因及其下游调节基因的表达。实验分为诱导组(DOX+)、非诱导组(DOX-)和空白组(blank)。结果:酶切及测序证实重组慢病毒载体pri-mir-302/367构建成功,病毒滴度为5×106TU/ml;DOX诱导72 h后,real-time PCR结果显示诱导组高于非诱导组和空白组(P<0.05,其中miR-302a:P DOX+vs.DOX-=0.032,P DOX+vs.blank=0.048;miR-302b:P DOX+vs.DOX-=0.001,P DOX+vs.blank=0.001;miR-302c:P DOX+vs.DOX-=0.000,P DOX+vs.blank=0.000;miR-302d:P DOX+vs.DOX-=0.002,P DOX+vs.blank=0.047;miR-367:P DOX+vs.DOX-=0.001,PDOX+vs.blank=0.001;OCT4:P DOX+vs.DOX-=0.000,P DOX+vs.blank=0.001;SOX2:P DOX+vs.DOX-=0.000,P DOX+vs.blank=0.000;NANOG:P DOX+vs.DOX-=0.000,PDOX+vs.blank=0.000),而非诱导组与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05,其中miR-302a:P blank vs.DOX-=0.057;miR-302b:P blank vs.DOX-=0.832;miR-302c:P blank vs.DOX-=0.445;miR-302d:P blank vs.DOX-=0.979;miR-367:P blank vs.DOX-=0.161;OCT4:P blank vs.DOX-=0.051;SOX2:P blank vs.DOX-=0.060;NANOG:P blank vs.DOX-=0.078)。结论:成功构建了携带人miR-302/367可控性慢病毒载体,为后续的重编程研究奠定了实验基础。; 张耀林马海滨陈冬梅范恒李玉奎; 关键词：HELA细胞

Sox4基因的促胰岛内皮细胞分泌胰岛素作用: 2014年; 目的:探讨Sox4基因对胰岛β细胞功能代偿作用。方法:构建Sox4过表达载体,包装病毒感染MS1细胞系,q PCR检测感染后MS1中胰腺发育及分化相关基因Maf A、Pax、PDX-1和Insulin m RN A的表达水平,Western blotting检测Sox4以及Insulin蛋白的表达水平。结果:过表达Sox4慢病毒感染MS1细胞后Maf A、Pax4、Insulin m RNA表达水平显著高。结论:Sox4促进内皮细胞表达和分泌胰岛素可能具有对胰岛β细胞功能代偿作用。; 刘淑丹陈冬梅范恒李玉奎; 关键词：胰岛素

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范恒

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