李红
- 作品数：11 被引量：32H指数：3
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 人乳腺癌组织中Tbx3基因表达变化及其意义被引量：7
- 2005年
- 目的 探讨Tbx3基因在乳腺癌发生发展过程中的作用。方法 收取新鲜乳腺癌和癌旁乳腺组织各44例,以Tripure试剂提取细胞总RNA,以RT PCR法检测两种组织中Tbx3基因的表达水平,并比较其表达状况与乳腺癌相关临床病理因素之间的关系。结果 Tbx3基因在乳腺癌组织中的表达显著强于癌旁乳腺组织(P<0 01),与患者的年龄、肿瘤大小无关,但随着临床分期的进展、出现腋窝淋巴结转移、肿瘤浸润程度增加和组织学级别的增高,该基因的表达明显增强。结论 高表达的Tbx3基因可能在乳腺癌发生发展过程中起促进作用,并可能是乳腺癌进展中关键性转变的标志性基因之一。
- 邓军刘友生黄涛生葛晓冬陈锐王晓东王长松李红
- 关键词：乳腺肿瘤
- 世居藏族患者乙肝病毒基因型及其临床特点分析
- HBV基因分型能准确地反映原型病毒株之间的自然异质性。有许多研究表明，HBV基因型呈地理区域性分布，不同基因型致病性不同，因此，HBV基因分型对于HBV的基础研究、分子流行病学调查、临床诊治过程中出现的基因变异、对抗病毒...
- 谢本维郑必海李红谭昭霞汪中涛
- 关键词：乙肝病毒病毒基因型流行病学
- 文献传递
- 用杆状病毒-昆虫细胞系统表达、纯化重组的人源化氨基末端LBP被引量：1
- 2004年
- 根据已有的资料显示LBP与LPS的结合位点位于其氨基末端的第 91～ 1 0 0个氨基酸残基。在体外构建含有人LBP与LPS结合活性部分的穿梭质粒pBacmidtLBP ,并且带上 6×his的标签 ,用此穿梭质粒转染sf2 1昆虫细胞 ,获得重组病毒。然后用重组病毒液感染对数生长期的sf2 1昆虫细胞 ,72h后收获含有这种截断型人源化氨基末端LBP (NH LBP)的培养上清。用金属亲和树脂纯化后 ,采用SDS PAGE电泳以及Western Blot鉴定所得到的纯化物。成功获得相对分子质量约为 30 0 0 0的NH LBP。为进一步研究LBP在介导LPS活化靶细胞中的作用机制奠定了基础。
- 王长松刘友生葛晓冬李红陈燕平
- 关键词：LBP昆虫细胞人源化穿梭质粒重组病毒
- 人源噬菌体抗体库的构建及抗人NH-LBP抗体的筛选与鉴定被引量：15
- 2005年
- 目的: 构建人源噬菌体抗体库并制备抗人脂多糖结合蛋白氨基端片段 (NH- LBP)的单克隆抗体 (mAb)。方法:以噬菌体展示系统(pComb3H/VCSM13)建立人源噬菌体抗体库(Fab), 并以昆虫细胞sf21在无血清培养基 (SF 900Ⅱ )中,通过BAC- TO- BAC杆状病毒表达系统来表达NH -LBP。再以NH -LBP为抗原, 从人源噬菌体抗体库中筛选可产生抗NH- LBPmAb的菌株并进行鉴定。结果: 昆虫细胞sf21可表达人源NH- LBP, 经亲和纯化柱芯 (TALON)有效纯化后, 获得约8mg的NH- LBP。成功地建立人源噬菌体抗体库, 库容达5. 0×108 CFU。经 8轮筛选后, 抗体库被富集 1. 85×104 倍。经ELISA法鉴定, 获得 3株可产生抗NH -LBPmAb的菌株(核酸序列及氨基酸序列见GenBank中的: AY337713,AY337714 )。结论: 以昆虫细胞sf21表达NH LBP及以其为抗原制备噬菌体mAb是可行的。本研究为进一步建立抗NH- LBP的二硫键稳定的Fv抗体 ( disulfidestabilizedFvfrag ments, dsFv), 研究人体内LBP的变化规律和过度炎症反应的防治奠定了基础。
- 葛晓冬刘友生王晓东王长松邓军李红
- 关键词：人源噬菌体抗体库昆虫细胞
- 抗氨基端脂多糖结合蛋白单链抗体的生物学活性研究
- 2005年
- 目的观察制备的抗NHLBP单链抗体的体内外生物学活性`。方法采用流式细胞术观察抗NHLBP单链抗体阻断LPS与U937细胞的结合能力;采用ELISA法检测抗体干预后不同时相点的烧伤合并内毒素血症小鼠血浆中炎性细胞因子TNFα、IL6含量的变化;同时观察小鼠部分内脏器官的病理形态学改变。结果经抗NHLBP单链抗体干预后,U937细胞表面的荧光强度明显下降。烧伤合并内毒素血症小鼠经scFv抗体干预后,与模型组相比肝、肺组织的炎性改变明显减轻、浸润的炎细胞减少;肾组织的炎性改变不明显;小鼠血浆中TNFα浓度在烧伤合并内毒素处理后即显著增高,模型组与对照组相比,差异有显著性(P<0.01,P<0.05),干预组与相应时相点的模型组相比,在最初3h内差异有显著性(P<0.05)。IL6含量在建模3h以后与对照组相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05);干预后IL6的含量下降比较明显。结论抗人源化氨基端脂多糖结合蛋白的单链抗体对内毒素血症有一定的保护作用;进一步明确了LBP在内毒素生物学效应中的作用。
- 章容王长松刘友生李红
- 关键词：单链抗体内毒素血症生物学活性
- 人源氨基末端脂多糖结合蛋白的真核表达及其噬菌体抗体的筛选与鉴定
- 目的制备人源氨基末端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)及其人源化单克隆抗体。方法以昆虫 sf21细胞在无血清培养基(SF-900Ⅱ)中通过 BAC-TO-BAC 杆状病毒表达系统来表达 NH-LBP,并以噬菌体展示系统 (p...
- 葛晓冬刘友生王晓东邓军王长松李红
- 文献传递
- 抗氨基末端脂多糖结合蛋白基因工程抗体库的构建及体外表达筛选被引量：2
- 2005年
- 目的构建人源化的单链可变区抗体库,运用体外表达技术翻译并筛选特异性的抗NHLBP抗体。方法分离健康人外周血单核细胞,抽提总RNA设计引物,扩增抗体轻重链的可变区,通过一段柔性片段将其连接成单链抗体库;应用体外表达技术翻译抗体库,并筛选出与NHLBP高度结合的单链抗体片段。结果扩增的单链抗体可变区片段分别为340bp和325bp,经连接后约为750bp。经过体外表达得到了约27000的抗体片段,经过5轮筛选进化,得到了可与NHLBP高度结合的抗体。结论已成功构建了人源化的单链抗体库;通过体外表达技术筛选到可与NHLBP高度结合的抗体。
- 王长松刘友生李红葛晓冬邓军陈燕平
- 关键词：体外表达脂多糖结合蛋白抗体库外周血单核细胞可变区
- 人survivin基因重组腺病毒载体的构建及其在DCs中的表达被引量：4
- 2005年
- 目的 构建含有人survivin基因的重组腺病毒载体,为转染树突状细胞构建DC疫苗和基因治疗奠定基础。方法 自行设计一对分别含有KpnⅠ和XholⅠ酶切位点的survivin基因上下游引物,以质粒pCITE/survivin为模板,通过PCR扩增获得survivin基因全部序列。片段回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV ,获得重组质粒pAdTrack CMV survivin。通过KpnⅠ和XholⅠ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pAdTrack survivin转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy 1的BJ5 183菌。同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒用脂质体介导转染2 93细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。同时将病毒上清转染树突状细胞,通过观察绿色荧光蛋白的表达以及Westernblot分析观察survivin蛋白表达。结果 成功构建了含有人survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为1 65×10 8PFU/ml。在19×10 3 频段附近可见survivin蛋白表达为16 5×10 3 。结论 该重组腺病毒载体的构建及成功转染到树突状细胞内表达,为下一步研究人survivin作为靶抗原及基因治疗奠定了基础。
- 李红刘友生王长松葛晓东
- 关键词：腺病毒载体基因疗法SURVIVIN基因树突状细胞
- 人Survivin基因重组腺病毒载体的构建及其表达
- 2005年
- 目的 构建含有人Survivin基因的重组腺病毒载体,为转染树突状细胞(DC)构建DC疫苗和基因治疗奠定基础。方法 自行设计一对分别含有KpnⅠ和XholⅠ酶切位点的Survivin基因上下游引物,以质粒pCITE/Survivin为模板,通过PCR扩增获得Survivin基因全序列。片段回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV,获得重组质粒pAdTrack CMV Survivin。通过KpnⅠ和XholⅠ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pAdTrack Survivin转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy 1 的BJ5183菌。同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒,用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。同时将病毒上清转染成纤维细胞,通过观察GFP的表达以及Western blot分析观察Survivin蛋白表达。结果 成功构建了含有人Survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为1 65×108pfu/L。Western blot检测可见16 5kD的Survivin蛋白表达。结论 该重组腺病毒载体的构建及成功转染到成纤维细胞内表达为下一步以人Survivin作为靶抗原的基因治疗奠定了基础。
- 李红刘友生王长松葛晓东
- 关键词：腺病毒载体基因疗法树突细胞
- 病情提示单在神经外科重症监护室危重患者转运交接中的应用
- 李红
