张旭亮
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
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- Hsp90促进PCV2在猪肾细胞系PK-15中的复制
- 引言猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等症状的重要病原体,严重影响猪体健康、干扰实验研究,并给各国养猪业造成了巨大的经济损失。一些病毒...
- 刘捷张旭亮马畅尤金炜董敏陈莉恽时锋
- 文献传递
- 两株小鼠诺如病毒的分离与鉴定被引量：2
- 2016年
- 目的了解江苏地区常用实验小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的感染情况及进化特征。方法在江苏地区抽取三个实验动物中心的实验小鼠,采集直肠及内容物样本,应用RT-PCR方法检测MNV ORF2特异性基因(547bp,MNV nt5104-5650)。阳性样本经RAW264.7细胞分离病毒,对MNV分离株的VP1基因进行扩增,将其连接在p EASY-Blunt载体上,转化至大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞,通过Kanamycin抗性筛选,挑取菌落进行PCR鉴定,鉴定为阳性的克隆送检测定其VP1基因序列,构建系统发生进化树。结果共检测小鼠直肠内容物30份,检出MNV阳性样本4份,包括ICR小鼠(2/8)、BALB/c小鼠(1/12)和C57BL/6J小鼠(1/10),感染率为13.3%;RAW264.7细胞接毒盲传三代,两只ICR小鼠样品接种的细胞产生明显细胞病变(CPE),表现为细胞圆缩聚集,大部分脱落死亡,而C57BL/6J和BALB/c小鼠样本接种RAW264.7细胞无CPE;应用VP1特异引物经RT-PCR检测,表现CPE的细胞样本出现特异条带,测序结果显示分离到的2株MNVVP1核酸序列均为1626bp,与引物设计参考毒株S7-P2(Gen Bank登录号:AB435514)VP1基因大小相同,进化树图表显示检测到的2株MNV属同一独立小分支与参考株BJ10-2062、CR4最为相近。结论此次抽检的实验小鼠MNV感染率为13.3%(4/30),考虑可能在同一设施内传播。常用实验小鼠携带病毒的生物学意义有待进一步研究。
- 马畅张旭亮刘捷恽时锋
- 关键词：诺如病毒小鼠病毒分离
- 鼠诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达、纯化及多克隆抗体制备
- 本发明公开了鼠诺如病毒VP1蛋白病毒样颗粒表达、纯化及多克隆抗体制备，本发明首次对鼠诺如病毒的结构蛋白VP1基因进行密码子优化，并利用杆状病毒表达系统表达蛋白，并使表达的蛋白形成病毒样颗粒，该抗原能够模拟活病毒的衣壳蛋白...
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- 文献传递
- 眼眶静脉采血及尾静脉注射给药对大鼠肝细胞内NF-κB的影响被引量：1
- 2016年
- 目的研究常规动物实验操作对大鼠肝细胞内核转录因子Kappa B(简称NF-κB)的影响。方法采用雄性SD大鼠,分别进行眼眶静脉采血、尾静脉注射操作,每天记录大鼠体质量和饲料消耗数据,连续处理14 d后,测定各组大鼠肝细胞内NF-κB p65的mRNA表达量和蛋白水平,并与对照组进行比较,分析这些操作的影响。结果与对照组相比,眼眶静脉采血及尾静脉注射实验组大鼠体增重和饲料能耗比均有降低,且差异极显著(P<0.01);实验组大鼠肝细胞中NF-κB p65和蛋白的表达水平较对照组都有升高,且差异极显著(P<0.01);实验组中眼眶静脉采血组NF-κB p65和蛋白的表达水平高于尾静脉注射组,差异极显著(P<0.01)。结论本研究中涉及的常规实验操作均引起大鼠的显著应激反应致福利受损,可导致肝细胞内NF-κB表达水平提高,表明了NF-κB参与了大鼠福利损伤的过程。
- 尤金炜董敏梁磊许龙祥马畅张旭亮方天恽时锋
- 关键词：NF-ΚB
- 旋毛虫烯醇化酶基因的克隆、原核表达及真核表达质粒的构建
- 目的 为了探究烯醇化酶对旋毛虫的感染是否具有免疫保护作用.方法 根据GenBank中发表的旋毛虫肌幼虫ENO基因序列(AF363629.1)设计引物,以旋毛虫肌幼虫总RNA为模板,通过RT-PCR扩增出了肌幼虫的Tsen...
- 张旭亮尤金炜刘捷马畅恽时锋严若峰
- 关键词：旋毛虫ENO原核表达PVAX1
- 绿色荧光裸鼠部分免疫学指标的测定及分析被引量：2
- 2015年
- 目的检测绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,简称GFP)转基因裸鼠的部分免疫学指标,分析GFP转基因裸鼠与其他小鼠在免疫学方面的优缺点,为将来的研究提供基础参考值。方法 1实验选用6~8周GFP转基因裸鼠、BALB/c裸鼠和BALB/c小鼠,活体称体质量,剖取脾脏称其质量,之后进行脾淋巴细胞增殖能力的测定。2取外周血,测定部分血常规指标及免疫球蛋白指标。结果 1 GFP转基因裸鼠脾脏质量、脾脏系数以及T、B淋巴细胞增殖反应与BALB/c裸鼠相近,但与BALB/c小鼠差异显著。2 GFP转基因裸鼠、BALB/c裸鼠两种裸鼠品系外周血白细胞水平、淋巴细胞以比例及免疫球蛋白IgG、IgM都远低于BALB/c小鼠,差异显著。结论从脏器系数、白细胞水平,免疫球蛋白水平等角度发现,GFP转基因裸鼠和BALB/c裸鼠的免疫系统水平较BALB/c小鼠相弱,其中GFP转基因裸鼠的免疫系统水平最为低下。
- 尤金炜刘彪张旭亮马畅董敏赵志刚恽时锋
- 关键词：BALB/C裸鼠BALB/C小鼠免疫功能
- 实验应激致小鼠福利受损及音乐干预的效果被引量：3
- 2015年
- 目的探究常规实验操作对动物福利的损伤程度以及音乐干预的效果。方法采用3周龄雄性ICR小鼠,实验操作组分别给予保定(E-r)、灌胃(E-g)、腹腔注射(E-p)和眼眶静脉丛采血(E-o)处理,音乐干预组采取相同处理后给予1h音乐干预(M-r,M-g,M-p,M-o)。连续处理7 d后,测定与福利相关的神经内分泌、免疫、生化、生长指标和饲料能效比。结果 1与对照组相比,实验操作四组体增重和饲料能效比均显著降低;E-r组TG、HDL-C、WBC、IL-2、β-EP和脾脏、胸腺指数均显著降低,CORT、ACTH、EPI显著升高;E-g组的TG、WBC、IL-2和β-EP显著降低,CORT、ACTH和EPI显著升高;E-p组IL-2显著降低,CORT、ACTH和EPI显著升高;E-o组脾脏指数和WBC显著降低,CORT显著升高。2与实验操作组相比,M-r组体增重、饲料能效比、脾脏指数、IL-2显著升高,CHOL、CORT、ACTH和β-EP均显著降低;M-g组WBC显著升高,CORT显著降低;M-p组WBC显著降低;M-o组饲料能效比显著升高。结论四种常规实验操作均对小鼠的健康福利造成了不同程度损伤,而音乐干预能够改善小鼠的操作应激和福利损伤程度。
- 马畅梁磊张旭亮尤金炜刘捷恽时锋
- 关键词：小鼠音乐
- 小鼠诺如病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2017年
- 本研究旨在利用巢式RT-PCR技术,建立高效检测小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的方法。通过Gen Bank上公布的一系列小鼠诺如病毒的基因序列,设计内、外各一对特异性引物,通过优化PCR反应条件,建立巢式RT-PCR检测方法,并对临床样品进行检测。结果显示,本研究建立的巢式PCR检测方法特异性好,最低检出量为1×102copies/L,高于使用参考引物RT-PCR的最低检出量1×105 copies/L,对临床样品检出率为73%,高于使用参考引物普通RT-PCR的检出率(60%),与RT-qPCR方法检出率一致。结果表明,本研究成功建立了一种检测小鼠诺如病毒的巢式RT-PCR方法,并能快速、高效地应用于临床样品的检测,为小鼠诺如病毒的诊断和检测提供了有力的手段。
- 张旭亮马畅刘捷尤金炜刘彪恽时锋
- 关键词：巢式RT-PCR敏感性
