王晓飞
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
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- 短时CaCl2刺激对人脂肪干细胞增殖与成骨向分化的影响
- 2015年
- 目的:观察CaCl_2溶液作为海藻酸钠/明胶交联剂短时作用于人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,h ASCs)时,对其增殖和成骨向分化的影响,从而为后期三维生物打印实验选择合适浓度的CaCl_2溶液打下研究基础。方法:取P3代h ASCs,实验组分别用50、100、200、500 mmol/L的CaCl_2溶液对细胞处理5 min,对照组细胞不处理。P3代h ASCs处理后第1、3、5、7天用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞增殖情况。P3代h ASCs成骨诱导7d后,采用碱性磷酸酶染色法观察细胞成骨向分化情况,并用碱性磷酸酶活性定量法测定各实验组与对照组碱性磷酸酶活性表达的差异。P3代h ASCs成骨诱导14天后,用茜素红染色法观察细胞矿化结节形成情况进行定量分析。采用SPSS 17.0软件,运用单因素方差分析对结果进行分析,两两比较采用SNK法。结果:不同浓度CaCl_2溶液处理组细胞的增殖水平在第1、3、5、7天的差异均无统计学意义;成骨诱导7天后,随着CaCl_2溶液浓度的升高,碱性磷酸酶活性先升高后降低,除50 mmol/L与100 mmol/L CaCl_2溶液处理组之间,以及成骨诱导培养基组与200 mmol/L CaCl_2溶液处理组之间差异无统计学意义外,其余组间差异均有统计学意义(P<0.05);成骨诱导14天后,随着CaCl_2溶液浓度的升高,矿化结节由散在片状逐步变为层叠片状,矿化结节定量结果显示各实验组之间以及与各对照组间的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:短时高浓度钙离子刺激对h ASCs增殖无影响,但对h ASCs的成骨向分化有促进作用,且随着钙离子浓度增加,促进作用加强,因此可以选用高浓度CaCl_2溶液作为三维生物打印用材料的交联剂。
- 王晓飞吕培军宋杨王勇孙玉春
- 关键词：脂肪组织间充质干细胞氯化钙细胞分化
- 纳米羟基磷灰石对人脂肪干细胞共混物三维生物打印影响的初步研究被引量：6
- 2016年
- 目的:初步研究纳米羟基磷灰石对人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,h ASCs)共混物三维生物打印体细胞增殖和成骨分化的影响。方法:以P5代h ASCs作为种子细胞,将10 g/L纳米羟基磷灰石加入细胞-海藻酸钠-明胶共混物(20 g/L海藻酸钠,80 g/L明胶,细胞密度约为1×106个/m L)混合后进行三维生物打印,作为实验组;另将细胞-海藻酸钠-明胶共混物直接进行三维生物打印,作为对照组。在打印后的既定时间点上,对实验组和对照组分别进行显微镜观察、CCK-8检测、Western blot检测和PCR检测,分析打印体细胞增殖能力和成骨分化能力。结果:显微镜观察和CCK-8检测结果显示,实验组和对照组打印体内细胞在打印完成后24 h和7 d均呈现良好的增殖能力。Western blot结果显示,在打印完成后14 d,实验组和对照组的Runt相关转录因子(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)蛋白水平差异无统计学意义。PCR结果显示,在打印完成后14d,实验组的成骨相关基因RUNX2、osterix(OSX)和骨钙素(osteocalcin,OCN)表达明显高于对照组。结论:纳米羟基磷灰石加入后,打印体内细胞仍具有良好的增殖性,且打印体的体外成骨分化能力得到了增强。
- 宋杨王晓飞王宇光董凡吕培军
- 关键词：纳米羟基磷灰石间充质干细胞脂肪组织
- 人脂肪间充质干细胞与生物材料共混物三维打印体的体内成骨被引量：10
- 2016年
- 目的:构建人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,h ASCs)-生物材料共混物三维生物打印体,检测其体内成骨能力,初步建立将细胞共混物三维生物打印技术应用于体内成骨的技术路线。方法:以P4代h ASCs作为种子细胞,进行成骨向诱导,并采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和茜素红矿化结节染色检测其成骨向分化的能力。将种子细胞加入20 g/L海藻酸钠和80 g/L明胶混合物(细胞密度约为1×106个/m L),采用Bioplotter三维生物打印机(德国Envision公司)进行打印,获得细胞-海藻酸钠-明胶共混物打印体,采用活-死细胞双荧光染色法观察打印体中细胞存活率,随后对打印体进行1周成骨诱导培养,作为实验组;另打印不含细胞、只含海藻酸钠-明胶溶胶的三维打印体作为对照组。将实验组和对照组打印体植入裸鼠背部皮下,于植入后6周取出样本,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、马松(Masson)三色法染色、免疫组织化学染色和Inveon微型CT(Micro CT)检测打印体样本的成骨情况。结果:打印体中细胞存活率达89%±2%,打印体植入6周后取出,对照组植入打印体大部分发生降解,形态不规则,为无定型凝胶状,而实验组打印体基本保持原有大小,质地坚韧。HE染色和马松三色法染色结果显示,植入6周后,实验组打印体中有类骨组织形成,并有血管长入;免疫组织化学染色结果显示,骨钙素抗体表达成阳性;Micro CT结果显示,实验组密度较高,新生骨容积为18%±1%。结论:h ASCs共混物三维生物打印体可在裸鼠体内异位成骨,细胞共混物三维生物打印技术应用于体内成骨的技术路线是可行的。
- 宋杨王晓飞王宇光孙玉春吕培军
- 关键词：骨生成间充质干细胞脂肪组织生物相容性材料
