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人胰岛因子1基因启动子的克隆及活性鉴定: 2017年; 目的:克隆含人胰岛因子1(islet1,ISL1)基因上游启动子序列的质粒并检测其在人胚肾HEK-293细胞中的启动子活性。方法:以HEK-293细胞提取的DNA为模板,PCR扩增ISL1基因启动子区全长1 419 bp片段;酶切后将此片段连接至pGL3-Basic载体,克隆含有ISL1基因启动子片段的重组质粒;以此重组质粒为模板重复上述步骤构建一系列ISL1启动子5'侧翼区截短质粒。将含ISL1启动子序列的重组质粒及其截短质粒转染至人胚肾HEK-293细胞,双荧光素酶报告基因检测各片段的启动子活性,找出启动子最小活性区域,并通过生物信息学方法分析转录因子结合位点。结果:经酶切、测序鉴定,成功构建含有ISL1启动子序列的重组质粒及其截短质粒。与p GL3-Basic空载体相比,含有ISL1启动子序列的重组质粒启动子活性明显增加(P<0.01)。ISL1最小活性区域位于转录起始位点-173 bp至-1 bp之间,其中包含OCT-1、MYOD、E2F2等多个转录因子结合位点。结论:人ISL1转录起始点上游1 215 bp区域在HEK-293细胞中具有较强启动子活性。; 路康金蕊周国平; 关键词：启动子活性人胚肾细胞

髓核细胞来源外泌体对骨髓间充质干细胞向髓核样细胞分化的作用被引量：4: 2016年; 目的：探讨人髓核细胞（NPCs）外泌体对人骨髓间充质干细胞（BMSCs）向髓核样细胞分化的作用。方法：取腰椎间盘突出症患者手术切除的髓核组织，体外分离培养人NPCs，采用差速离心法提取NPCs的外泌体，利用透射电镜及Western blot对外泌体进行大小形态及标志蛋白的检测，同时用PKH67荧光染料标记外泌体后与BMSCs共孵育0．5h、2h、4h，在激光共聚焦显微镜下观察BMSCs对NPCs外泌体的摄取情况：取人BMSCs经NPCs外泌体诱导3d、7d、10d、14d后应用RT—PCR检测BMSCs中蛋白聚糖（ACAN）、SOX-9、Ⅱ型胶原（COL2A1）、角蛋白19（KRT19）及缺氧诱导因子1α（HIF—1α）的mRNA表达情况。结果：提取的人NPCs外泌体为直径为30—100nm的圆形或椭圆形结构，其表达CD63和Tsg101,不表达Calnexin蛋白。经PKH67标记的NPCs外泌体可以被BMSCs摄取：经NPCs外泌体诱导后7d开始BMSCs中的ACAN、SOX-9、COL2A1、KRT19及HIF—1α基因mRNA表达均显著性高于未经诱导的BMSCs（P〈0．05）。结论：在体外实验中，人NPCs可以分泌外泌体并被BMSCs所摄取．诱导BMSCs分化为髓核样细胞，可为椎间盘退变的组织工程修复提供更为简单有效的NPCs来源。; 路康杨匡李海音周跃李长青; 关键词：椎间盘退变外泌体髓核细胞骨髓间充质干细胞

1-磷酸鞘氨醇受体在不同退变程度髓核组织中的表达变化被引量：1: 2015年; 目的 :比较不同退变程度人椎间盘髓核组织中3种1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1/2/3)表达水平的差异,探讨椎间盘中S1PR表达水平与椎间盘退变的关系。方法:收集腰椎间盘退行性病变患者手术切除的椎间盘组织,其中轻度退变(Pfirrmann分级Ⅳ级)22例,严重退变(Pfirrmann分级Ⅴ级)14例;同时取6例无椎间盘退变患者(单纯腰椎椎体骨折,Pfirrmann分级Ⅱ级)手术切除的椎间盘组织作为对照组;通过HE染色以及Saf-O染色观察不同退变程度椎间盘的组织学变化,免疫组化检测不同退变程度组织中的S1PR表达水平;Ⅱ型胶原酶消化分离提取原代髓核细胞,通过Real-time PCR、Western-bolt检测不同退变程度椎间盘髓核细胞中S1PR的表达水平,并通过细胞免疫化学方法对S1PR进行定位。结果:HE染色及Saf-O染色结果显示退变椎间盘的纤维环出现破损,髓核细胞形成明显的集落,细胞外基质减少。免疫组化结果显示正常和轻度退变的髓核组织中3种受体(S1PR1/2/3)都有表达,严重退变的组织中表达极弱;Real-time PCR结果显示对照组髓核细胞中S1PR1/2/3的m RNA表达水平分别是严重退变组的5.34±0.52倍、7.25±0.04倍、1.92±0.06倍,轻度退变组S1PR1/2/3的m RNA表达水平分别是严重退变组的4.35±2.45倍、4.96±3.44倍、2.19±0.82倍;Western-blot发现对照组和轻度退变组髓核细胞中S1PR1/2/3均有表达,严重退变组表达水平较低;免疫细胞化学显示S1PR主要集中在髓核细胞的细胞质和细胞膜上。结论:髓核组织中主要表达S1PR1/2/3,在严重退变的髓核组织和细胞中其表达水平明显下降,S1P及其受体可能参与椎间盘髓核组织的退变过程。; 杨匡李海音张伟路康周跃李长青; 关键词：椎间盘退变髓核细胞

前列腺癌根治术前焦虑和术后生活质量评估相关性分析被引量：3: 2014年; 目的：研究前列腺癌患者术前焦虑和术后生活质量评估的相关性。方法选取32例行前列腺癌根治术的患者，在其术前1d，采用焦虑状态-特质评分问卷（the Stata-Trait Anxiety Inventory，STAI）进行焦虑评估；在术后1个月，采用前列腺癌治疗功能评价（the functional assessment of cancer therapy-prostate, FACT-P）问卷，对其生活质量进行调查。通过SPSS软件对患者的术前焦虑和术后生活质量评估进行相关性分析。结果患者的术前焦虑评分为59.0＆#177;7.3，术后生活质量评估为64.5＆#177;7.4。术前焦虑和术后生活质量评估呈线性负相关关系（r=-0.58，P＜0.05）。结论前列腺癌患者的术前焦虑和术后生活质量评分呈负相关关系，根据焦虑评分状况积极地进行围手术期的心理干预，加强患者与家人朋友的沟通交流，对临床治疗及术后恢复具有积极的意义。; 储嘉慧黄华兴郑雨潇沈露萍路康袁文博李普陈涛肇毅邵鹏飞秦超; 关键词：焦虑前列腺肿瘤外科学

微创经椎间孔入路椎体间融合手术治疗伴ModicⅡ型改变的复发性腰椎间盘突出症的短期疗效分析被引量：5: 2016年; 目的：探讨采用微创经椎间孔入路椎体间融合手术治疗伴ModicⅡ型改变的复发性腰椎间盘突出症的临床疗效。方法：回顾性分析2012年11月—2015年7月,采用Quadrant微创系统经椎间孔椎体间融合手术治疗的12例同节段同侧腰椎间盘突出术后复发伴ModicⅡ型改变的患者临床资料。记录患者术前、术后、术后3个月、术后半年的疼痛视觉模拟评分（visual analogue scale,VAS）,术前、术后3个月、术后半年的Oswestry功能障碍指数（Oswestry disability index,ODI）及术前、术后3个月的8条简明量表（SF-8）评分,并进行统计学分析。结果：12例患者均获随访3~6个月。术后随访所有患者症状较术前均有明显改善。术前ODI评分为（53.11±13.10）分,术后3个月为（13.11±5.97）分,术后半年为（5.00±4.07）分,术前与术后3个月、术前与术后半年比较均有统计学差异（P〈0.05）;术前VAS评分为（6.30±2.00）分,术后为（2.10±0.88）分,术后3个月为（1.10±0.74）分,术后半年为（1.13±0.83）分,术前与术后、术前与术后3个月、术前与术后半年比较均有统计学差异（P〈0.05）;术前SF-8评分为（26.15±11.49）分,术后3个月为（61.61±14.44）分,术前与术后3个月比较有统计学差异（P〈0.05）。结论：采用Quadrant通道系统经椎间孔入路椎体间融合术治疗伴ModicⅡ型改变的复发性腰椎间盘突出症,具有术中、术后出血少,显著减少软组织损伤,术后疼痛轻、恢复快,术后并发症较少等优势,术后症状缓解明显,随访疗效满意。; 陈赢杨小政朱翔车荟路康任永信

重组法国梧桐花粉过敏原2(rPla a2)对诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子活性及基因表达的影响被引量：1: 2018年; 目的:构建人诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因启动子区,对NOS2启动子序列进行鉴定并分析其活性;探索重组法国梧桐花粉过敏原2(r Pla a2)对人NOS2基因启动子活性及基因表达的影响。方法:利用PCR扩增、限制性内切酶双酶切、DNA连接酶连接、大肠杆菌转化等方法将NOS2基因启动子区克隆至pGL3-Basic载体上,将所构建重组报告质粒转染至人胚肾(HEK293T)细胞中,利用双荧光素酶活性分析检测该重组报告质粒启动子活性及检测rPla a2对人NOS2基因启动子活性的影响;用实时荧光定量PCR法检测rPla a2对人NOS2基因mRNA水平的影响。结果:成功构建含有NOS2启动子的重组报告质粒,与对照(p GL3-Basic)组相比,含NOS2启动子区的重组质粒转染组荧光素酶活性显著增高;与不加刺激(NOS2)组相比,加入rPla a2刺激后含NOS2启动子区的重组报告质粒转染组荧光素酶活性显著增高,加入rPla a2刺激后NOS2 mRNA相对表达水平显著增高。结论:rPla a2可增强人NOS2基因启动子活性,并增加其基因表达。; 乔笑芹王进雅路康曹倩周国平; 关键词：启动子哮喘

抗血小板治疗对非体外循环冠状动脉旁路移植术患者围手术期出血的影响: 2013年; 目的探讨抗血小板药物治疗对非体外循环冠状动脉旁路移植术(off pump coronary artery bypass grafting,OPCABG)围手术期出血的影响。方法回顾性总结分析611例择期OPCABG患者临床资料,分为服药组(Y组)466例和未服药组(N组)145例。服药组又分为:阿司匹林组(A组)94例和阿司匹林+氯吡格雷组(AC组)372例。记录各组临床资料;分析比较各组术中失血量,术后胸腔引流量、血液制品使用率和使用量。多元线性回归模型分析与手术失血相关的因素。结果术中血浆用量Y组比N组少[(584.65±322.81)ml vs(681.47±359.38)ml,P=0.006],两组在其他方面差异无统计学意义。服药组中,与AC组相比,A组手术时间短[(257.02±41.84)min vs(273.49±60.48)min,P=0.002],近段吻合口数多(1.76±0.48 vs 1.58±0.60,P=0.002),红细胞使用率低(90.4%vs 96.5%,P=0.013),血小板使用率低(4.3%vs 15.6%,P=0.004),输血浆量多[(706.96±422.16)ml vs(551.56±303.37)ml,P=0.000],术后A组血浆总使用率低(89.4%vs 96.0%,P=0.011)。多元线性回归模型分析,术前是否抗血小板治疗因素(r=-13.770,P=0.618)与术中失血量无显著相关性。手术时间因素(r=1.16,P=0.000)是影响术中失血量的相关因素。结论术前抗血小板治疗不增加择期OPCABG术中失血量,术前双联与单联抗血小板治疗相比不增加手术失血量。; 张杨杨魏磊王晓伟路康张蔚然张石江; 关键词：非体外循环冠状动脉旁路移植术氯吡格雷出血

张力性刺激对人髓核细胞表达软骨层间蛋白的调控及机制被引量：1: 2017年; 目的:探索张力性刺激对人椎间盘髓核细胞分泌软骨层间蛋白(cartilage intermediate layer protein,CILP)的影响及其机制。方法:选取2016年6月在我院因创伤性骨折行L4/5椎间盘摘除及相邻椎体融合手术的1例38岁男性患者的髓核组织作为细胞来源,术前MRI示该节段椎间盘组织改良Pfirrmann分级为Ⅱ级,分离培养其中的髓核细胞并传代至第3代,进行力学实验。使用Flexcell 5000系统通过电脑控制气压变化来使载有细胞的塑料膜发生形变,进而对膜载体上的细胞给予不同强度、时长的张力性力学加载。实验组分为4组,均以10%的拉伸量为刺激强度,给予不同时长(6h、12h、24h、48h)的刺激,空白对照组不给予任何刺激。利用RT-q PCR技术检测各组CILP的基因表达量,选出表达变化最为明显的一组,以该组的刺激时长为限,再将实验组分为3组,分别给予不同刺激强度(5%、10%、20%)的张力刺激,空白对照组不给予任何刺激,利用RTq PCR技术检测各组CILP的基因表达。选取相比较于对照组CILP增长效应最明显的力学强度和时长作为刺激条件,测定髓核细胞在该实验条件下smad3的磷酸化程度,并对髓核细胞预先给予smad3磷酸化的特异性抑制剂SIS3处理后再置于同一力学条件下,以RT-q PCR检测CILP的基因表达量,以此观察smad信号通路是否介导了张力性刺激对于髓核细胞CILP表达的调控。实验结果使用配对t检验以及单因素方差分析进行组间比较。结果:RT-q PCR结果显示,相较于空白对照组,不同刺激时长的10%张力性刺激均明显下调了CILP的表达,其中在刺激48h后对CILP的抑制效应达到最大(P<0.05);5%的张力性刺激48h后髓核细胞的CILP基因相对表达量与对照组比较无统计学差异(P>0.05),10%的张力刺激48h明显降低CILP的表达(P<0.05),20%的张力刺激48h显著提高CILP表达量(P<0.05)且smad3的磷酸化水平相对于空白对照组明显增高;相对于只给�; 何晋月孙靖路康周跃潘勇; 关键词：髓核细胞 SMAD信号通路

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路康

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