张林成
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 供职机构：西南大学园艺园林学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 甘蓝BYPASS1编码基因的克隆与表达分析被引量：2
- 2013年
- 通过双向电泳结合MALDI-TOF-TOF/MS质谱技术在甘蓝柱头内鉴定出1个受自花授粉诱导上调表达的BYPASS1蛋白(BPS1)。利用PCR技术扩增甘蓝BPS1基因的编码序列,序列分析结果表明:该基因没有内含子,开放阅读框为1059bp,编码352个氨基酸,蛋白质分子量为38.7kD。氨基酸同源性和系统发生树分析结果表明:甘蓝BPS1与拟南芥BPS1亲缘最近,氨基酸同源相似性达85%;与烟草BPS2关系较远。RT-PCR检测结果表明:甘蓝BPS1基因在开花前1～2d的花瓣、萼片、花药、柱头和叶片中均有表达,柱头中的表达量最高。实时荧光定量PCR分析结果表明:甘蓝柱头内BPS1表达水平在自花授粉后逐渐升高,异花授粉后柱头内BPS1表达水平先升高后降低再升高。
- 刘豫东高启国曾静张林成朱利泉任雪松王小佳
- 关键词：甘蓝自花授粉异花授粉
- 结球甘蓝叶片卷曲过程中6个生长素相关基因的克隆与表达分析被引量：2
- 2015年
- 生长素在结球甘蓝球叶向上、向内自然卷曲的过程中发挥着重要的调控作用。为挖掘重要的影响结球甘蓝叶片卷曲的生长素相关基因,通过对结球甘蓝莲座期叶片与结球期叶片的转录组进行对比分析,筛选出6个显著差异表达的生长素相关基因,分别为调控生长素动态平衡的Bo ILL6、Bo ASA1基因,控制极性运输的Bo SF21、Bo PIN4基因,参与信号转导的Bo ARF8、Bo GH3.5基因。对上述6个基因进行同源克隆,分别获得全长c DNA序列,序列分析发现6个基因均含有生长素相关的结构域。分子进化树分析发现各基因与芜菁的对应基因遗传关系最近,拟南芥次之。荧光定量PCR检测结果显示,Bo ILL6、Bo ASA1与Bo SF21的表达量变化最为显著,结球期叶片相对莲座期叶片的表达量差异均高达12倍以上,变化趋势与转录组数据分析结果基本一致,说明这3个基因可能与结球甘蓝叶片的卷曲发育密切相关。
- 蒲全明高启国张林成施松梅刘晓欢张莹毕云龙任雪松刘豫东朱利泉
- 关键词：结球甘蓝基因克隆
- 甘蓝自交不亲和相关转录因子BosiP_(A1)蛋白基因的克隆与表达分析
- 2013年
- 通过自交不亲和甘蓝‘A1’自花授粉1 h和未授粉柱头蛋白质表达谱的对比,鉴定出1个受自花授粉诱导上调表达的蛋白,通过PCR技术获取了其编码序列,命名为BosiPA1蛋白,其基因全长为3 730 bp,具有1个1 092 bp的完整编码框(KF314579)。BosiPA1由6个外显子、5个内含子组成,编码363个氨基酸。序列分析表明BosiPA1蛋白具有典型的basic helix-loop-helix(bHLH)功能域,在SCR、SRK、Exo70A1基因的ATG上游启动子序列中存在可以被bHLH功能区识别并结合的E-box(CANNTG)序列。在分子进化上甘蓝BosiPA1与AtbHLH128距离最近,与AtHEC1/2/3和TgGBOF-1处在同一个分支。RT-PCR检测表明甘蓝BosiPA1基因在花瓣、萼片、花粉、柱头和叶片中均有表达;荧光定量PCR分析表明BosiPA1基因在自花授粉10 min、30 min、1 h的柱头中呈逐渐上升趋势。上述结果说明BosiPA1与bHLH的进化分支较早,可能是一个参与甘蓝多器官发育的自交不亲和相关的转录因子。
- 刘豫东朱利泉高启国曾静张林成任雪松王小佳
- 关键词：甘蓝基因克隆
- 结球甘蓝AUX/IAA家族基因BoIAA2与BoIAA19的克隆与表达分析被引量：2
- 2017年
- 为了探究AUX/IAA家族基因在结球甘蓝叶片与茎尖发育过程中的功能,筛选出对甘蓝叶片与茎尖发育具重要影响的相关AUX/IAA基因。试验以结球甘蓝品系"519"为材料,通过对莲座期叶片与茎尖,结球期叶片与茎尖的转录组比较分析,筛选出在两个组织中均表达差异显著的2个AUX/IAA基因,分别为BoIAA2与BoIAA19。采用PCR技术分别获得基因BoIAA2与BoIAA19的编码序列,其CDS(coding sequence)全长分别为519 bp、585 bp,编码172、194个氨基酸;进一步序列分析发现BoIAA2、BoIAA19分别与大白菜BrIAA2、油菜BnIAA19氨基酸同源相似性均达99%,且均具有AUX/IAA蛋白的DomainⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ特异性结构域。利用荧光定量PCR分析表明BoIAA2和BoIAA19在叶片、茎尖中的表达量均呈现出结球期高于莲座期的变化趋势,与转录组分析结果相符;对其结合蛋白基因BoTIR1和BoARF8进行表达分析,结果显示二者与BoIAA2、BoIAA19在叶片、茎尖中不同时期的表达量变化趋势一致;由此,推测BoIAA2和BoIAA19可能通过与BoTIR1和BoARF8的结合影响生长素信号转导,进而调控结球甘蓝叶片及茎尖的生长发育。
- 蒲全明施松梅张林成高启国任雪松向承勇杨鹏林帮民耿明明
- 关键词：结球甘蓝AUX/IAA基因克隆
- 甘蓝BoSU03蛋白基因的克隆及其与SRK相互作用分析被引量：2
- 2015年
- 扩增了从甘蓝柱头蛋白质谱鉴定中获得的泛素蛋白BoSU03基因的编码序列。序列分析表明BoSU03与甘蓝泛素蛋白Bo1003815的核苷酸序列相似性最高,达98%,含有臂重复结构域,属于植物泛素蛋白家族。为探究BoSU03是否为自交不亲和S位点受体激酶(SRK)下游的互作蛋白,以SRK与ARC1相互作用为对照,利用GAL酵母双杂交系统对SRK与BoSU03进行了相互作用验证,结果表明,BoSRK/BoSU03的转化酵母在四缺平板SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/x-α-gal/25 mmol 3-AT上长势较好,显色较深,进一步检测发现BoSRK/BoSU03转化酵母的β-半乳糖苷酶活性值大于BoSRK/BoARCl转化酵母的活性值,这为进一步分析鉴定BoSU03是否参与SRK下游信号传导过程提供了依据。
- 毕云龙高启国施松梅刘晓欢蒲全明张莹张林成廉小平柳菁朱利泉
- 关键词：甘蓝酵母双杂交系统
- 结球甘蓝BoLH01和BoLH02基因的克隆与表达被引量：1
- 2014年
- bHLH类转录因子在植物叶片形态建成和发育过程中发挥重要的生理功能。本文通过结球甘蓝转录组数据分析,筛选出莲座期和结球期的茎尖间与叶片间均显著差异表达的2个bHLH类转录因子,命名为BoLH01和BoLH02基因,获得了2个基因的编码序列,其中BoLH01基因CDS全长为966 bp、编码321个氨基酸;BoLH02基因CDS全长870 bp、编码289个氨基酸;序列分析表明BoLH01和BoLH02分别与拟南芥AtbHLH18和AtbHLH19氨基酸同源相似性最高,达81%和74%,均具典型bHLH结构域特点和完全保守的13E-16R和9H-13E-17R以及Leu23对应的关键氨基酸位点;分子进化上BoLH01、BoLH02与AtTCP2/3/4/10/24亲缘关系较近,与AtTCP9/11/14/15较远;转录组和荧光定量PCR分析表明BoLH01和BoLH02在平展的莲座叶中表达量较低,在卷曲的球叶中高量表达;序列分析BoHB7、BoHB12和BoILL6的ATG上游均包含能被bHLH功能域识别的E-box序列,对BoHB7、BoHB12和BoILL6荧光定量PCR分析表明,三者与BoLH01和BoLH02在不同时期叶片中表达量的变化趋势完全一致;说明BoLH01和BoLH02可能通过正向调控BoHB7、BoHB12、BoILL6基因的表达来参与甘蓝叶片卷曲的调控。
- 张林成高启国蒲全明任雪松刘豫东朱利泉王小佳
- 关键词：甘蓝基因克隆
- 结球甘蓝叶片卷曲相关7个同源异型盒基因的克隆与表达分析
- 2014年
- 以结球甘蓝(Brassica oleracea L.)‘519’品系为试材,通过结球期茎尖和叶片以及莲座期茎尖和叶片的转录组对比分析,筛选出4个显著差异表达HB类基因,分别为BoHAT2、BoHB12、BoHB7和BoHB27。进一步对上述4个基因以及调控拟南芥(Arabidopsis thaliana)叶片卷曲但在结球甘蓝转录组中未检测到表达差异的基因BoPHB、BoPHV和BoREV进行了同源克隆。序列分析表明上述7个基因都含有同源异型域(homeodomain,HD),具有同源异型盒(homeobox,HB)蛋白家族的典型结构特征。BlastP(蛋白序列与蛋白库做比对)表明它们与拟南芥的同源蛋白相似性高,来自结球甘蓝的BoHAT2、BoHB12、BoHB7、BoHB27、BoPHB、BoPHV、BoREV与拟南芥中的HAT2、ATHB12、ATHB 7、ATHB27、PHB、PHV、REV蛋白同源,同源性分别为86%、80%、79%、60%、94%、95%和96%。BlastP比对和进化树分析结果表明,BoHAT2属于HD-ZipⅡ类,BoHB12和BoHB7属于HD-ZipⅠ类,BoHB27属于ZF-HD,BoPHB、BoPHV和BoREV属于HD-ZipⅢ类。BoHAT2、BoHB12、BoHB7、BoHB27、BoPHB、BoPHV、BoREV在结球甘蓝莲座期到结球期的茎尖和叶片中均有表达,BoHB12和BoHB7在结球期叶片中表达量显著增高,分别是莲座期叶片的38.1倍和6.2倍,其余基因表达量差异不明显,表明BoHB12和BoHB7可能是结球甘蓝球叶自然卷曲过程中的主效调控基因。
- 任雪松张林成蒲全明高启国王小佳宋明
- 关键词：结球甘蓝基因克隆
- 甘蓝BoExo70A1与BoSEC3、BoExo84蛋白相互作用的酵母双杂交检测
- 2015年
- Exo70A1是芸薹属作物柱头接受亲和花粉的必需因子,可能参与了干性柱头水分分泌和花粉水合过程。本文从自交不亲和甘蓝A1柱头c DNA中获取了Bo Exo70A1、Bo SEC3、Bo SEC10、Bo SEC15和Bo Exo84基因的编码序列,序列分析表明,Bo Exo70A1、Bo SEC3、Bo SEC10、Bo SEC15和Bo Exo84基因分别与At Exo70A1、At SEC3A、At SEC10、At SEC15B和At Exo84B基因的c DNA序列高度同源,其编码的5个蛋白均没有信号肽,Bo SEC3蛋白含有一个典型的EF-hand钙离子结合结构域。将Bo Exo84蛋白拆分为2个片段(Bo Exo84-N和Bo Exo84-C),并与Bo SEC3、Bo SEC10和Bo SEC15蛋白编码序列一起分别亚克隆至p GADT7质粒,Bo Exo70A1蛋白编码序列亚克隆至p GBKT7质粒,酵母双杂交检测结果表明,Bo Exo70A1蛋白能与Bo SEC3、Bo Exo84-N蛋白互作,但不能与Bo SEC10、Bo SEC15蛋白互作,这为深入探讨Bo Exo70A1蛋白乃至整个胞泌复合体在甘蓝干性柱头接受自花花粉排斥异花花粉过程中的作用机制提供了依据。
- 高启国刘豫东蒲全明张林成朱利泉王小佳
- 关键词：相互作用
