施文
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传学研究所更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 寡核苷酸的化学合成
- 1989年
- 以四种自制的保护脱氧核苷酸作单体,用固相亚磷酰胺法,合成了二十余种寡核苷酸,平均每步缩合产率在97%以上。经基因克隆和序列分析证明,合成的DNA序列是正确的。
- 高必峰闵永洁戴定明施文王启松
- 关键词：寡核苷酸固相合成化学合成
- 编码口蹄疫病毒VP1免疫活性肽基因片段的化学合成及克隆与表达被引量：11
- 1989年
- 口蹄疫病毒(FMDv)VP1蛋白质141～160位氨基酸的肽段,是免疫活性肽,含20个氨基酸,用DNA合成仪合成这段免疫活性肽基因片段,共72bp,5＇端带有Eco RI切点,3＇端带有BamHI切点,利用Eco RI和BamHI切点将兔疫活性肽基因片段克隆到带肴1ac启动子的基因表达载体pWR590质粒中,以O型FMDV抗体做为特异的IgG,检查FMDV抗原活性肽基因片段的表达,从210个菌落中选到有明显表达的菌株8株。
- 郑兆鑫贺沛富严维耀王启松施文赵洪兴周智爱朱慈晖徐泉兴陈嘉棣李致勋施履吉
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因基因克隆
- 酵母tRNA^(Gly)基因的化学合成与克隆
- 1991年
- tRNA 结构与功能的研究是分子生物学中引人入胜的领域之一.为了得到大量tRNA,并便于在 tRNA 中进行碱基置换,我们化学合成了酵母 tRNA^(Gly)基因.全基因共分为13个寡聚核苷酸片段进行化学合成,通过把这些片段分步退火、连接,再与M13mp18噬菌体重组、克隆,转化大肠杆菌 JM103,经过杂交检测和酶切鉴定,并用序列测定核实,得到了一个与设计一致的克隆.目前该基因的表达及反密码子的置换工作正在进行中.
- 张鹰沈文彦施文王启松J.Tze Fei Wang
- 关键词：TRNA基因化学合成克隆
- 基因的多点定位突变方法的研究——双点定位突变法改造人α心钠素基因被引量：3
- 1989年
- 定位突变作为基因工程和蛋白质工程研究中的一种基本方法,已广为应用。定位突变法可利用噬菌体M_(13)单链DNA作为基因载体,在化学合成的寡聚核苷酸引物的诱导下,把碱基突变导入基因的任何预定位置。但经典的方法常常需要通过碱性蔗糖梯度离心、凝胶电泳等耗时而复杂的手段富集经体外诱变的闭环双链DNA,突变基因的产率一般较低,且只进行碱基的单点突变。因此,当某些基因需要进行间隔一段距离的多点突变时。
- 杨迪谢毅施文闵永洁王启松
- 关键词：定位突变
- 人α-心房肽基因的化学合成及其在酵母系统中的克隆和表达
- 1990年
- 按酵母密码系统化学合成人α-心房肽。为得到人α-心房肽基因的正确表达,少数碱基已按酵母简并密码予以替换,但在DNA序列互补的另一链的相应位点上的密码则未作相应的替换,故在局部上出现了不配对的格局。该基因已被克隆入带有α-factor外分泌型启动子的穿梭质粒pCLWA_2,含有编码人α-心房肽不同DNA序列的重组体已用Bg1 Ⅱ的限制性分析加以区别。比较两种基因所表达的人α-心房肽水平表明:含有酵母简并密码的基因所表达的人α-心房肽水平(0.5～0.7mg/L)低于按天然DNA序列合成的基因所表达的人α-心房肽水平(0.8～1mg/L)。
- 林哈娜张福徽卢圣栋王年门建华朱虹雷勋兰屈金河王启松施文闵永洁
- 关键词：基因合成酵母
- 人α-心钠素全基因的化学合成被引量：4
- 1989年
- 用固相亚磷酰胺法(solid-phase phosphoramidite method)合成了人α-心钠素(简称α-hANP)的全基因。合成的α-hANP基因全长为96bp,包括编码α-hANP的结构基因、基因5＇端的谷氨酸(作为表达产物用内肽酶Glu-C专一裂解的位点)密码子GAA、基因3＇端的终止信号TGA及基因两端的接头部分。基因分7个寡聚核苷酸片段在DNA合成仪上合成,然后一次性酶促连接成为完整的α—hANP双链基因。化学合成的基因克隆到M13载体上,经分子杂交鉴定筛选出的α-hANP基因克隆株,用双脱氧链终止法进行序列分析,证明核苷酸顺序正确。
- 杨迪闵永洁施文王启松
- 关键词：心钠素化学合成基因
