刘燕
- 作品数：10 被引量：31H指数：3
- 供职机构：北京市心肺血管疾病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 单磷酸腺苷活化蛋白激酶巨噬细胞特异性敲除降低早期高血压的实验研究
- 2021年
- 目的:研究巨噬细胞单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)通路对小鼠高血压及心脏结构功能的影响。方法:使用AMPKα1-loxP转基因小鼠杂交集落刺激因子受体的启动子驱动表达雌激素受体-Cre融合蛋白的转基因小鼠,构建他莫昔芬诱导特异性敲除巨噬细胞AMPK的转基因小鼠(Csf1r-Mer-iCre-Mer:PRKAA1fl/fl),取12只Cre阴性小鼠(WT)和10只Cre阳性小鼠(KO),腹腔注射他莫昔芬(20 mg/mL)连续5 d,袖套式血压探头测鼠尾血压,分为四组,WT对照组6只,KO对照组5只,行假手术;WT高血压组6只,KO高血压组5只,皮下埋植血管紧张素II(AngII)渗透性迷你泵刺激7 d诱导高血压,检测血压和超声心动指标后麻醉处死,心脏组织做石蜡切片和α-SMA免疫组化染色观察纤维化情况。结果:AngII刺激7 d WT鼠和KO鼠的收缩压显著升高[WT对照vs. WT高血压组,SBP(120.7±1.7)vs.(164.2±6.9) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),P=0.0001;KO对照vs.KO高血压组:SBP(104.6±6.3)vs.(143.9±2.9) mmHg,P=0.0005];LVEDD显著降低;左心室舒张末期后壁厚度、LVEF、心脏质量/体重比值和纤维化程度显著提高;α-SMA免疫组化染色差异不明显。结论:巨噬细胞特异性敲除AMPK可降低早期高血压状态下的血压水平,但对心脏功能和纤维化程度的影响不明显。
- 郑帅刘燕朴春梅刘婷婷张芝杜杰
- 关键词：巨噬细胞高血压心脏纤维化
- 一种小鼠主动脉夹层动脉瘤模型的建立方法及其应用
- 本发明公开了一种小鼠主动脉夹层动脉瘤模型的建立方法及其应用。本发明的小鼠主动脉夹层动脉瘤模型的建立方法简便，可在短时间内构建小鼠主动脉夹层动脉瘤模型，无需实施外科手术，减少了实验小鼠的创伤，可操作性强。造模组主动脉夹层动...
- 杜杰刘燕王雪蕊
- 文献传递
- 医学研究生在当代医学研究中“代谢组学分析技术平台”应用能力的培养被引量：1
- 2017年
- 代谢组学分析技术平台目前已广泛的应用于医学以及临床研究的领域。该平台可以对代谢物进行高灵敏度检测和准确定量分析,发现由疾病所引起的体内特征性生物标志物,并将其广泛运用到临床疾病的诊断与研究过程中。培养医学研究生对代谢组学分析技术平台的应用能力,增强其对代谢组学的原理、方法、应用、数据分析的理解和使用,为医学研究生利用代谢组学分析技术平台发现及解决临床疾病的诊断、治疗等建立坚实的基础。
- 王媛王雪刘燕檀鑫王绿娅杜杰
- 关键词：代谢组学医学研究生
- 利用CRISPR／Cas9技术建立基因外显子敲除小鼠模型
- 2016年
- 目的利用CRISPR／Cas9系统建立钙结合蛋白S100a9基因外显子定向敲除小鼠。方法在S100a9基因第1个外显子5’端及第2个外显子3’端设计gRNA靶点，体外转录获得gRNA，利用Cas9蛋白体外检测gRNA切割效率。选取效率高的gRNA和Cas9mRNA注射C57BL／6小鼠受精卵，进行胚胎移植，利用PCR和测序方法检测F0代小鼠S100a9基因外显子敲除情况。结果F0代出生9只小鼠，PCR鉴定其中4只具有长片段删除，效率为44．4％；测序鉴定3只小鼠完全敲除了第1和第2外显子，1只敲除了第2外显子。结论成功建立利用CRISPR／Cas9系统定向敲除基因外显子的方法，获得了S100a9基因第1和第2外显子敲除的小鼠。
- 刘燕张晓萍王绿娅杜杰
- 关键词：小鼠基因敲除外显子
- 急性主动脉夹层患者补体活化及补体C3a受体表达的临床意义被引量：2
- 2016年
- 目的:揭示急性主动脉夹层发生中,是否存在补体系统活化及补体活化产物C3a受体的表达变化。方法:收集2015年1月至2015年7月,在北京安贞医院接受体检的正常人、腹主动脉瘤手术以及急性主动脉夹层手术患者血液各5例,进行微量样本多指标流式蛋白定量试验,测定其补体系统活化产物过敏毒素C3a、C4a和C5a的水平;收集2015年1月至2015年7月,在北京安贞医院接受主动脉弓部替换术患者的升主动脉组织5例及心脏移植供受体正常的升主动脉组织5例,进行免疫组化组织染色,并提取蛋白,检测C3a受体的表达。结果:微量样本多指标流式蛋白定量试验结果显示,腹主动脉瘤和急性主动脉夹层患者血浆中补体活化产物C3a、C4a和C5a含量显著高于正常对照组(P<0.01),这说明补体活化不仅在腹主动脉瘤,急性主动夹层患者循环系统也存在。免疫印迹结果显示急性主动脉夹层患者标本中C3a受体蛋白表达量显著高于正常对照组(P<0.05)。免疫组化染色发现,与正常升主动脉壁相比较,急性主动脉夹层标本的C3a受体表达显著增高(P<0.01)。结论:急性主动脉夹层患者体内存在补体系统活化C3a-C3a受体信号通路,可能参与主动脉夹层的发生发展。
- 任卫红刘燕王雪蕊王绿娅杜杰
- 关键词：补体系统急性主动脉夹层
- 炎症小体Nlrp3在高血压小鼠心肌纤维化中的作用被引量：12
- 2015年
- 目的:研究NOD样受体热蛋白结构域3(Nlrp3)炎症小体在高血压导致心脏纤维化重构中的作用与影响。方法:18只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=8)灌注0.9%氯化钠溶液,和血管紧张素(Ang II)组(n=10)灌注Ang II,采用鼠尾套管法测量小鼠血压。于灌注第7天后处死小鼠,收取心脏组织进行切片,采用免疫组织化学、H-E与Masson染色观测心脏炎症浸润与纤维化重构、使用q PCR检测炎症因子和nlrp3炎症小体表达与活化。结果:与对照组小鼠相比较,Ang II组小鼠在灌注后血压从第1天起持续升高,并持续到第7天。炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α以及诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达增加,巨噬细胞浸润增加,炎症小体表达增多,心脏中的间质胶原沉积增加,肌成纤维细胞标志α-SMA表达增加;与对照组相比,体外使用Ang II刺激巨噬细胞后,IL-1β表达升高,炎症小体nlrp3表达增加,给与P2X7受体(可以激活炎症小体nlrp3)抑制剂PPADS后,IL-1β与nlrp3转录水平表达降低。结论:高血压可能通过促进巨噬细胞内炎症小体nlrp3的表达,引起IL-1β的释放增多,促进心脏组织中巨噬细胞浸润,导致心脏组织损伤和纤维化加重。
- 阿希李玉琳王绿娅吴依娜刘燕杜杰
- 关键词：高血压巨噬细胞炎症反应
- 利用小动物活体成像技术检测心肌梗死后炎症的进程被引量：5
- 2015年
- 目的:利用小动物活体成像技术连续动态评估,同一只鼠心肌梗死后心脏炎症进程的方法。方法:40只成年雄性用荧光素酶标记转录因子NF-κB(NFκB-RE-luc)小鼠,按随机数字表分为对照组和心肌梗死组,每组各20只;心肌梗死组开胸结扎小鼠冠状动脉前降支,对照组只给予开胸处理。分别于术前及术后1天、3天、5天、7天、14天及28天检测NF-κB的转录活性。于3天时,收10只对照组小鼠,CBA检测外周血清中炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的表达,荧光定量PCR检测心肌梗死后心脏组织中的炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的表达。手术后28天,超声心动检测小鼠心功能;心脏组织病理切片,Masson三原色法检测心肌梗死后28天心脏胶原沉积。结果:28天心肌梗死组的病理切片染色和超声心动结果均证明心肌梗死模型造模成功。利用小动物活体成像检测到NF-κB转录活性的动态变化:心肌梗死后1天、3天、5天及7天后NF-κB表达水平与心肌梗死前相比明显升高[(255 400 000±31 280 000),(459 300 000±64 210 000),(461 000 000±73 830 000),(380 000 000±41 000 000)vs.(77 280 000±10 750 000)p/s,P<0.005)。心肌梗死术后3天心脏组织炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的mRNA表达和血浆中的炎症因子MCP-1、TNF-α及IL-6的水平均明显升高。结论:利用小动物活体成像技术可以活体检测小鼠心肌梗死后心脏炎症过程。
- 马友才刘燕朴春梅王绿娅杜杰
- 关键词：心肌梗死炎症
- 血流剪切力对血管内皮细胞过敏毒素C3a受体表达影响的研究被引量：8
- 2015年
- 目的:探讨血流剪切力对血管内皮细胞过敏毒素C3a受体(C3aR)、炎症因子及黏附分子表达的影响。方法:分离培养原代人脐静脉内皮细胞,利用振荡流(OS)刺激,分别于处理前、处理6小时、12小时、24小时收取细胞,用免疫印迹法检测C3a受体(C3aR)及血管细胞黏附蛋白1(VCAM 1)表达变化;用实时荧光定量检测C3aR、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子1(ICAM 1)及VCAM 1表达。结果:与处理前相比,内皮细胞在振荡流刺激后,C3a受体mRNA水平和蛋白表达均升高,6小时升高最显著分别为:[(1.997±0.3109)vs.(1.000±0.005773),P=0.0423;(2.968±0.2333)vs.(1.007±0.01202),P=0.0009];IL-1β、MCP-1、ICAM1及VCAM 1的mRNA水平均显著高于处理前,6小时达到最高值;TNF-α在刺激24小时后升高最显著(均P<0.05);振荡流刺激内皮细胞后VCAM 1表达上调,在6小时升高最显著(均P<0.05)。结论:血流剪切力可能通过上调血管内皮细胞过敏毒素C3a受体,调节内皮细胞炎症因子及黏附分子表达。
- 王雪蕊刘燕王绿娅张俊蒙杜杰
- 关键词：内皮细胞剪切力
- CRISPR/Cas9基因编辑系统中两种gRNA活性检测方法比较被引量：3
- 2016年
- 目的:比较CRISPR/Cas9系统中gRNA活性检测的两种方法,即利用Surveyor/T7E1核酸酶检测方法或利用Cas9蛋白的体外检测方法。方法:一方面构建表达Cas9和特异gRNA的质粒,转染NIH3T3细胞,然后提取DNA,利用T7E1核酸内切酶检测gRNA介导Cas9切割靶DNA并产生indel突变的效率;另一方面,设计引物并利用PCR扩增出gRNA的DNA模板片段,通过体外转录获得gRNA,利用Cas9蛋白及gRNA进行体外反应检测切割效率。结果:利用Cas9蛋白体外酶切可以检测到较高的gRNA活性,然而通过T7E1核酸酶方法检测gRNA在细胞中活性整体偏低,且在不同基因之间差异较大。结论:细胞Surveyor/T7E1法与Cas9蛋白体外酶切法检测到的gRNA活性不完全一致,体外活性检测法不能替代。
- 刘燕任卫红王绿娅张晓萍高诗娟武威李凤娟杜杰
- 关键词：体外检测
- C3aR拮抗剂在制备治疗马凡综合征中的应用
- 涉及C3aR拮抗剂在制备治疗马凡综合征中的应用，具体的，所述的拮抗剂为SB290157或其盐；所述的SB290157的化学式为C<Sub>24</Sub>H<Sub>29</Sub>F<Sub>3</Sub>N<Sub>...
- 杜杰张聪聪李玉琳刘燕张帆
