王蒙
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>
- 降糖肽Aglycin的高效表达及活性鉴定被引量：3
- 2020年
- 基于自组装肽ELK16能在大肠杆菌细胞内自聚集的特性,本研究将Aglycin通过一个内含肽Mxe GyrA与自组装肽连接,构建能在体外自剪切的重组表达载体pET30a-Aglycin-Mxe-PT-ELK16。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行蛋白表达条件的优化,得到目的蛋白聚集体,随后对聚集体进行DTT切割条件的优化,经过进一步纯化最终可得到纯度为98.15%、产量为5.53mg/g菌体湿重的Aglycin肽。采用基因工程手段重组表达Aglycin的产量比目前化学提取方法提高了近100倍。此外,经体外实验证明,Aglycin对α-葡萄糖苷酶抑制的IC50(36.48μmol/L)比阿卡波糖(991.33μmol/L)低,说明Aglycin比阿卡波糖有更强的α-葡萄糖苷酶抑制活性,这进一步证明Aglycin有开发为α-葡萄糖苷酶抑制剂的潜力。
- 黄敏华林静莲王蒙马毅王菊芳
- 关键词：大肠杆菌
- 降糖多肽Brevinin-2GUb的高效表达及活性鉴定被引量：2
- 2020年
- 为实现降糖多肽Brevinin-2GUb在大肠杆菌中的高效表达,本文将Brevinin-2GUb基因插入到含有硫氧还蛋白、His标签及肠激酶酶切位点的p ET32a载体中,将重组表达载体p ET32a-Trx-His-EK-Brevinin-2GUb转化至大肠杆菌中诱导表达Trx-His-EK-Brevinin-2GUb融合蛋白。通过对表达温度进行优化,结果显示16℃诱导表达20 h后融合蛋白产量达到36 mg/L;该融合蛋白经肠激酶(EK)特异性切割后成功获得不带标签的Brevinin-2GUb多肽,产量约为2.50 mg/L,纯度达90%以上。通过反相高效液相色谱对重组表达的Brevinin-2GUb进行鉴定,结果显示重组表达的Brevinin-2GUb与人工合成的Brevinin-2GUb的氨基酸序列一致。通过血平板检测发现,170μg/m L的重组表达Brevinin-2GUb多肽无溶血效应。此外,重组表达的Brevinin-2GUb多肽在浓度为10μg/m L时对INS-1细胞产生显著的刺激胰岛素分泌作用(为基础释放量的120.04%;p<0.01)。研究结果为Brevinin-2GUb多肽开发为降糖口服液及多肽药物奠定了基础。
- 林静莲黄敏华王蒙马毅王菊芳
- 关键词：大肠杆菌
- 重组类人Ⅰ型胶原蛋白肽在大肠杆菌中的表达纯化及功能鉴定被引量：3
- 2016年
- 本研究构建了编码重组类人Ⅰ型胶原蛋白肽基因的原核表达载体pET28a-rhCⅠ,并将其转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行诱导表达。采用PCR的方法扩增重组类人Ⅰ型胶原蛋白肽的cDNA序列,并将其克隆到原核表达载体pET28a上;重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行IPTG诱导表达,并优化表达条件。利用SDS-PAGE和WesternBlot检测表达产物。大量表达重组蛋白,采用镍亲和层析进行纯化,并对纯化后的蛋白进行体外抗氧化研究以及促细胞增殖分析。结果表明,通过大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达获得了分子量约为40ku的重组蛋白,与预期相符。经镍亲和层析获得纯度较高的蛋白,通过DPPH实验证明其有一定的抗氧化活性;而且MTT实验证实该蛋白可以促进小鼠成纤维细胞3T3细胞的增殖,为其在食品、化妆品和医疗行业的应用提供一定的理论依据。
- 杨晶余洁莹王蒙吴少敏马毅王菊芳
- 关键词：胶原蛋白抗氧化细胞增殖
- cA-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的高效功能性表达
- 2015年
- 为了实现乳酸乳球菌锚定蛋白cA在大肠杆菌中可溶表达以及直观检测其生物学活性,以乳酸乳球菌MG1363为模板,扩增N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶AcmA基因,将其C末端序列与GFP基因融合,连接至大肠杆菌表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-cA-GFP,转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),通过低温诱导表达重组蛋白cA-GFP。工程菌超声破碎后的上清液与经热酸处理的乳酸乳球菌常温孵育,经SDS-PAGE和荧光显微镜检测。结果表明,工程菌可以表达分子量约53ku的目的融合蛋白质,与预期大小相符。cA-GFP通过锚定蛋白cA的引导回向锚定,成功将GFP展示在乳酸乳球菌表面,目的蛋白cA-GFP在乳酸乳球菌表面展示量为121mg/g干重菌体。GFP锚定至乳酸乳球菌后于4℃保存,连续6d测定其荧光强度,荧光强度仍可达82.2%,证明其稳定性较好。成功获得了具有生物学功能的cA-GFP可溶性蛋白,为进一步展示功能性外源蛋白奠定了坚实的基础。
- 苏艳芳杨晶王蒙吴少敏马毅李杉王菊芳
- 关键词：乳酸乳球菌绿色荧光蛋白
