刘检
- 作品数：72 被引量：256H指数：10
- 供职机构：湖南中医药大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于线粒体自噬介导的凋亡探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁证海马突触微环境损伤的保护作用被引量：6
- 2021年
- 目的:基于线粒体自噬介导的凋亡探讨左归降糖解郁方(ZGF)对糖尿病并发抑郁症(DD)海马突触微环境损伤的保护作用。方法:建立DD大鼠动物模型及模拟DD环境的体外细胞模型,实验设正常组、模型组、GluR2阻断剂(CNQX)组和ZGF组。采用免疫荧光法检测GluR2、Parkin、Cyt-C、SYN及PSD-95蛋白表达;mRFP-GFP-LC3自噬双标法检测海马神经元自噬流;JC-1法检测线粒体膜电位;MitoSOX法检测线粒体活性氧(ROS);Tunel染色法检测海马神经元凋亡;ELISA法检测Glu、5-HT、DA、ATP水平;旷场试验和强迫游泳试验评估大鼠抑郁样行为;透射电子显微镜观察大鼠海马神经元自噬小体;Western blotting检测大鼠海马组织中GluR2、Parkin、Cyt-C蛋白表达。结果:ZGF能有效抑制体外海马神经元线粒体自噬流、线粒体ROS释放及海马神经元凋亡(P<0.01),缓解线粒体膜电位下降、单胺神经递质失衡、突触前膜SYN及突触后膜PSD-95蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01),同时改善DD大鼠抑郁样行为、线粒体自噬过度激活、单胺神经递质分泌不足,并显著调控GluR2-Parkin-Cyt-C信号通路相关蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:ZGF对线粒体自噬介导的海马神经元凋亡致DD海马突触微环境损伤具有明显的保护作用,这可能是其防治DD的重要机制。
- 刘检张尚霞刘林龙红萍韩远山姜帆赵洪庆赵洪庆
- 关键词：凋亡
- 左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症胎鼠海马神经元NR-5-HT信号轴的影响被引量：2
- 2018年
- 目的:研究左归降糖解郁方(ZGJTJYF)对模拟糖尿病并发抑郁症(Diabetes mellitus with depression,DD)环境下大鼠胎鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NR)-5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)信号轴的影响。方法:分离、纯化、培养并鉴定胎鼠海马神经元,将培养的海马神经元随机分为6组:空白组、空白血清组、模型组、氟西汀+二甲双胍阳性药组、左归降糖解郁方组和NR阻断剂MK-801组。除空白组和空白血清组外,其余各组分别给予葡萄糖(150 mmol/L)和皮质酮(200μmol/L)用以构建DD海马神经元体外模型,氟西汀+二甲双胍阳性药组和左归降糖解郁方组分别给予10%相应含药血清,阻断剂组加入100 mmol/L MK-801,干预18 h。采用高内涵细胞成像分析技术(High Content Analysis,HCA)检测NR2A、NR2B和5-HT1AR蛋白的表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NR2A、NR2B、5-HT1AR基因的表达。结果:与空白组比较,模型组NRs蛋白和基因表达显著升高,5-HT1AR则表达显著降低;与模型组比较,氟西汀+二甲双胍阳性药组和左归降糖解郁方10%含药血清组可以逆转上述表达;使用阻断剂后NRs蛋白和基因表达明显降低,5-HT1AR蛋白含量显著升高,但基因表达显著降低。结论:左归降糖解郁方抗DD海马神经元损伤,可能与调控NR-5-HT信号轴有关。
- 杨琴凌佳王宇红刘检刘检杨蕙韩远山杜青
- 关键词：海马神经元5-羟色胺受体
- 左归降糖解郁方对自噬介导的糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经血管单元中神经元损伤的保护作用及其机制被引量：17
- 2019年
- 目的探讨左归降糖解郁方(ZGF)对自噬介导的糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)大鼠海马神经血管单元(neurovascularunit,NVU)中神经元的保护作用及其机制。方法原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元、星形胶质细胞及脑微血管内皮细胞,构建海马NVU体外共培养体系,并进行免疫细胞化学染色鉴定。采用高糖(150mmol/L)联合皮质酮(200μmol/L)干预制备海马NVU细胞模型,实验设对照组、模型组、空白血清对照组和ZGF含药血清组。采用Furo-3/AM染色法检测海马NVU神经元细胞内钙水平,高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)检测海马NVU神经元细胞内自噬标志物自噬相关蛋白1(Beclin-1)、人微管相关蛋白轻链3II(LC3-II)及谷氨酸受体2(Glu R2)/Ca2+/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路关键蛋白的表达,TUNEL染色法观察各组海马神经元细胞凋亡。结果与对照组比较,模型组及空白血清对照组海马NVU神经元细胞内钙水平显著升高,自噬标志物Beclin-1、LC3-II蛋白表达水平显著升高,Glu R2、m TOR蛋白表达水平显著降低,AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)蛋白表达水平显著升高,且细胞凋亡明显增多;与模型组比较,ZGF含药血清组海马NVU神经元细胞内钙水平明显降低,自噬标志物Beclin-1、LC3-II蛋白表达水平降低,GluR2/Ca2+/mTOR信号通路中Glu R2、m TOR蛋白表达水平升高,AMPK蛋白表达水平降低,同时细胞凋亡显著减少。结论 ZGF对自噬介导的DD大鼠海马NVU神经元细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制与调控GluR2/Ca2+/mTOR信号通路及细胞凋亡有关。
- 刘检刘林唐林韩远山杨蕙凌佳龙红萍蔺晓源王宇红
- 关键词：神经血管单元自噬
- 复方木鸡颗粒联合顺铂对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的机制研究被引量：3
- 2020年
- 目的探讨复方木鸡颗粒联合顺铂对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,取对数生长期细胞,将其消化后随机分为对照组,复方木鸡颗粒高、低(10、5 mg/mL)剂量组,顺铂组(1 mg/mL)和复方木鸡颗粒(5 mg/mL)联合顺铂(1 mg/mL)组,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用Hoehcst染色法检测细胞凋亡情况,采用免疫荧光联合激光共聚焦分别检测各组细胞中凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、蛋白天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、细胞色素C氧化酶(Cyt-C)表达水平。结果与对照组比较,复方木鸡颗粒10、5 mg/mL组及顺铂组、联合组的细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡显著增加,细胞内Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.05、0.01),而Bax、Caspase-9、Cyt-C蛋白显著上调(P<0.05、0.01),且联合组在抑制人肝癌HepG2细胞增殖、促进其凋亡、调控凋亡相关蛋白表达的作用效果最佳。结论复方木鸡颗粒可显著抑制HepG2细胞增殖并促进其凋亡,其与顺铂联合起到协同增效的效果,其作用机制可能与下调人肝癌HepG2细胞内抑凋亡蛋白Bcl-2,上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-9、Cyt-C表达水平有关。
- 胡超肖幸华唐林刘检
- 关键词：复方木鸡颗粒肝癌细胞增殖细胞色素C氧化酶
- 基于免疫激活研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马谷氨酸重摄取的干预作用被引量：6
- 2017年
- 目的研究糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马内免疫状态对星形胶质细胞谷氨酸重摄取功能的影响,及左归降糖解郁方对其干预作用。方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为模型组、阳性药组(0.18 g·kg-1二甲双胍+1.8 mg·kg-1氟西汀)、左归降糖解郁方高、中、低剂量组(20.53,10.26,5.13 g·kg-1),以正常大鼠为正常对照组,灌胃给药4周。分别采用ELISA法检测各组大鼠血清和海马中白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)及海马中谷氨酸含量,采用电镜观察各组大鼠海马血脑屏障结构,采用双重免疫组化技术检测各组大鼠海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及谷氨酸转运蛋白2(EAAT2)表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠血清及海马匀浆液中各细胞因子表达均显著升高(P<0.05或P<0.01),电镜结果显示血脑屏障存在一定损伤;海马中GFAP表达显著增加(P<0.05),而EAAT2表达显著减少(P<0.01),海马匀浆液中谷氨酸含量异常增多(P<0.01)。高剂量左归降糖解郁方可显著减少模型大鼠血清中各细胞因子及海马匀浆液中IL-1、IL-6、IFN-?和谷氨酸的含量(P<0.05或P<0.01),显著降低GFAP并增加EAAT2的表达(P<0.05或P<0.01),此外,其对大鼠海马血脑屏障也具有一定的保护作用。结论左归降糖解郁方可通过增加糖尿病并发抑郁症大鼠海马星形胶质细胞表面EAAT2表达,减少谷氨酸造成的兴奋性毒性,该作用可能与其抑制模型大鼠脑内免疫激活有关。
- 杨蕙韩远山王宇红刘检李薇孟盼杜青赵洪庆
- 关键词：免疫激活星形胶质细胞海马
- 左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠下丘脑IRS-1/PI3K/AKT信号通路的影响被引量：2
- 2020年
- 目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠下丘脑IRS-1/PI3K/AKT信号通路的影响。方法将糖尿病并发抑郁症模型动物随机分为模型组、阳性药组(二甲双胍0.18g/kg+氟西汀1.8mg/kg)、左归降糖解郁方高剂量组(20.53g/kg)和低剂量组(10.26g/kg),每组8只。另取8只健康大鼠为正常组。灌胃给药28d并每周测量动物体重。实验结束后,采用血糖仪检测大鼠空腹血糖。采用免疫荧光法检测大鼠下丘脑p-IR,p-IRS-1、p-PI3K,p-Akt蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠体重显著降低而血糖含量显著升高(P<0.01),下丘脑p-IR,p-IRS-1,p-PI3K,p-Akt蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,在体重方面,左归降糖解郁方高剂量组大鼠体重在给药的第2周至第4周有显著性增加(P<0.01),而低剂量组大鼠体重仅第3周和第4周有显著性差异;在血糖方面,左归降糖解郁方的2个剂量均可显著降低大鼠的血糖(P<0.01);在胰岛素信号方面,左归降糖解郁方高剂量组可显著升高模型大鼠下丘脑p-IR,p-IRS-1,p-PI3K,p-Akt的表达,而低剂量仅对p-IR和p-IRS-1蛋白的表达有显著性影响(P<0.01或P<0.05)。结论左归降糖解郁方可有效改善糖尿病并发抑郁症大鼠下丘脑的胰岛素信号通路,从而改善动物脑内的胰岛素抵抗状态。
- 杨蕙黄会珍金狮刘检蔺晓源韩远山文诗仪王宇红
- 关键词：下丘脑胰岛素受体胰岛素受体底物-1
- 六味地黄提取物及其联合顺铂对人肝癌BEL-7402细胞迁移和血管新生因子基因表达的影响被引量：1
- 2021年
- 目的观察六味地黄提取物及其联合顺铂对人肝癌BEL-7402细胞一般形态学和细胞迁移的影响,并探讨其对血管新生因子基因表达水平的影响。方法以人肝癌细胞BEL-7402为研究模型,分为对照组、顺铂(1 mg·mL^(-1))组、六味地黄提取物(100 mg·mL^(-1))组、联合用药(六味地黄提取物100 mg·mL^(-1)+顺铂1 mg·mL^(-1))组。细胞划痕法观察细胞迁移的影响;Western blot法与RT-PCR法检测各组细胞血小板反应素(TSP)、金属蛋白酶-2组织抑制因子(TIMP2)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管素-2(Ang-2)蛋白及其mRNA表达水平。结果与对照组相比,各干预组BEL-7402细胞两侧细胞间距明显加大,无细胞向划痕处迁移生长,且死亡细胞显著增加;各干预组BEL-7402细胞TSP、TIMP2蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.05),VEGF、Ang-2蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.05);与六味地黄提取组和顺铂组比较,联合用药组BEL-7402细胞TSP、TIMP2蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.05),VEGF、Ang-2蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论六味地黄提取物及其联合顺铂对BEL-7402细胞迁移生长具有明显的抑制作用,并可能通过促进细胞中TSP、TIMP2的mRNA表达,抑制VEGF、Ang-2的mRNA表达来抑制血管新生。
- 周牡娜刘检石雕刘蓉邹自征欧阳方丹
- 关键词：细胞迁移
- 云南萝芙木与催吐萝芙木HPLC指纹图谱建立及利血平测定
- 2020年
- 目的建立萝芙木属药材HPLC指纹图谱,并测定利血平的含有量。方法样品80%乙醇提取物的分析采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.05%三乙胺溶液,梯度洗脱;检测波长280 nm。采用UPLC-Q-TOF进行色谱峰组分鉴定。通过相似度评价并结合聚类分析、主成分分析及正交偏最小二乘法-判别分析对云南萝芙木与催吐萝芙木的总体质量评价。结果15批样品HPLC指纹图谱中有15个共有峰,对其中11个共有峰进行成分鉴别。相似度0.83~0.97,表明该药材总体质量较为稳定;但通过模式识别技术均发现不同批次药材质量之间存在一定的差异,且主要分为2类,最后进一步采用正交偏最小二乘法-判别分析筛选出云南萝芙木与催吐萝芙木质量差异的2种主要成分,分别为利血平、萝芙木碱。结论该方法科学、准确、可靠且简便,可系统、全面地评价萝芙木属药材的质量。
- 唐林肖望重刘检龙红萍吴笛王宇红
- 关键词：指纹图谱HPLC化学模式识别
- 左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马星形胶质细胞神经营养的影响被引量：10
- 2017年
- 目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症模型大鼠海马星形胶质细胞神经营养功能的保护作用。方法采用复合方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型。实验大鼠随机分为模型组、阳性药组和左归降糖解郁方高、中、低剂量组,每组12只,另取12只SD大鼠作为正常组。各给药组给予相应药物灌胃,连续4周。旷场实验检测大鼠抑郁行为,免疫组化检测大鼠海马星形胶质细胞标记物特异性蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及神经元细胞标记物微管相关蛋白2(MAP2)的表达,Western blot和RT-PCR检测大鼠海马星形胶质细胞营养分泌物脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)表达。结果与正常组比较,模型组大鼠活动次数明显减少,海马GFAP表达明显增加,MAP2、BDNF、GDNF、NGF表达明显减少;左归降糖解郁方干预后,模型大鼠抑郁行为明显改善,大鼠海马BDNF、GDNF、NGF、MAP2表达增加,GFAP表达明显减少。结论左归降糖解郁方可有效改善大鼠海马星形胶质细胞的分泌功能,其可能通过增强星形胶质细胞的营养作用保护神经元,从而发挥抗抑郁作用。
- 杨蕙王宇红杜青韩远山孟盼刘检刘林赵洪庆
- 关键词：星形胶质细胞神经营养
- 胆囊收缩素与抑郁症的相关性研究进展被引量：3
- 2021年
- 抑郁症是以显著而持久的情绪低落为主要特征的精神性疾病。新近研究发现,胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)作为一种脑肠肽(brain gut peptide,BGP)小分子,其广泛分布于中枢神经系统(central nervous system,CNS)和肠神经系统(enteric nervous system,ENS),为进一步明确CCK与抑郁症发病机制的联系,本文就CCK在抑郁症中的作用及作用机制包括下丘脑-垂体-肾上腺轴(hypothalamic-pituitary-adrenal axis,HPA)、突触功能、分子及环路机制等方面作一综述。
- 王叶情王宇红刘检赵洪庆邹蔓姝
- 关键词：抑郁症胆囊收缩素神经元
