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1a，25（OH）2D3对心肌细胞生物钟基因表达的影响: 2016年; 目的探讨1a，25（OH），D，对心肌细胞生物钟基因Bmal!mRNA、Per2mRNA和Rev—erbamRNA表达的影响。方法分离培养7H龄SD大鼠乳鼠心肌细胞，并用免疫荧光法鉴定。原代心肌细胞培养72h后，设置1a，25（OH）：D，5个终浓度梯度即0nmol／L、1nmol／L、10nmol／L、50nmol／L和100nmol／L处理心肌细胞2h，然后提取细胞RNA，实时荧光定量PCR（RT—PCR）检测生物钟基因（BmalI、Per2、Rev—erba）表达量变化，以确定1a，25（OH）：D，最佳处理浓度。再将培养72h的原代心肌细胞分为3组，对照组：无血清培养基培养；血清休克组：含体积分数50％马血清的DMEM培养2h；1a，25（OH）2D3处理组：最佳1a，25（OH）2D3浓度培养2h。分别于7个时间点（0h、4h、8h、12h、16h、20h、24h）收集细胞，提取细胞总RNA，再采用RT-PCR分析心肌细胞生物钟基因（Bmall，Per2，Rev—erba）的转录水平。结果1a，25（OH）：D，培养浓度为50nmol／L时，BmallmRNA表达水平最高，Per2和Rev—erbamRNA表达水平最低。与对照组相比，1a，25（OH）：D，处理组和血清休克组均引起心肌细胞Bmall、Per2和Rev—erba基因呈日周期的节律振荡，且Bmall和Per2的表达模式呈相反的时相表达，在12h时Bmall的表达量出现在波峰，而nr2的表达量出现在波谷。Rev—erba的表达变化趋势在8h开始上升，在12～16h出现最高表达量。结论1a，25（OH）2D3可影响心肌细胞生物钟基因Bmall、nr2和Rev—erbamRNA表达。; 陈玉梅范燚李杏李华吴丽洁张奇军程子杰钱玲梅; 关键词：心肌细胞生物钟生物钟基因

长链非编码RNA-uc．167的生物信息学特征及其对小鼠心脏发育的时空表达规律被引量：2: 2016年; 目的探索长链非编码RNA（1ncRNA）-uc．167基本生物学特征，及uc．167在小鼠心脏发育过程中的空间分布特征、时间表达规律。方法利用生物信息学软件ENCODE UCSC genomebrowser预测uc．167的基本结构和功能。取不同阶段（孕7．5、11．5、14．5、18．5d）的胚胎小鼠心脏，使用实时荧光定量（RT）-PCR方法检测uc．167及邻近基因在心肌组织中的表达情况，并采用原位杂交技术检测UC．167在心肌组织的分布情况。采用二甲基亚砜方法诱导P19细胞向心肌细胞方向分化，采用RT-PCR方法检测分化过程中（d0、d4、d6、d8、d10）UC．167及邻近基因的表达变化。结果人uc．167全长201bp，定位于基因组5q14．3（chr5：88179623-88179824，GRCh37／hgl9），根据lncRNA分类原则，属Intronic antisense lncRNA；uc．167主要表达于心室肌组织内；uc．167在小鼠胚胎发育过程的表达水平逐渐下调（7．5d：1．000±0．100，11．5d：0．714±0．107，14．5d：0．393±0．043，18．5d：0．125±0．013），而Mef2c的表达水平逐渐上调（7．5d：1．081±0．118，11．5d：2．340±0．351，14．5d：3．958±0．542，18．5d：9．361±0．722），二者呈相反趋势；在P19细胞向心肌细胞分化的过程中，UC．167呈现“先升后降”的表达模式，在胚胎样小体形成（d4）时表达水平达到最高，而后逐渐下调（d0：1．071±0．117，d4：4．714±0．501，d6：3．572±0．414，d8：2．550±0．314，d10：0．786±0．085），临近基因Mefee的表达变化与其呈相反趋势（d0：1．012±0．041，d4：0．353±0．037，d6：2．470±0．329，d8：6．706±0．682，d10：7．765±0．705）。结论UC．167可能在胚胎小鼠心脏发育中具有一定功能；HC．167可能通过负向调控其邻近基因Mef2c来发挥作用。; 吴丽洁宋桂仙李杏陈玉梅范燚李华张奇军钱玲梅; 关键词：生物信息学分析心脏发育长链非编码RNA

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陈玉梅

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