张会然
- 作品数：3 被引量：18H指数：2
- 供职机构：河北医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠肺部TMEM16A基因表达沉默模型的建立
- 2016年
- 目的 构建小鼠TMEM16A-shRNA慢病毒载体,通过气管内注射慢病毒载体,局部部分沉默小鼠肺部TMEM16A基因的表达,为后续在体研究TMEM16A在肺部作用提供基础.方法 ①构建小鼠TMEM16A-shRNA慢病毒载体;②免疫荧光法验证LA795小鼠肺腺癌细胞膜上TMEM16A的表达,体外行慢病毒感染实验,确定感染的最佳条件,最后体外实验确定慢病毒的干扰效率;③链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连接法（streptavidin-perosidase,SP）法验证肺组织中TMEM16A的表达;④气管内注射慢病毒2周后行支气管肺泡灌洗,BAC法检测灌洗液中蛋白及酶联免疫吸附法测定（ELISA）法检测炎症因子肿瘤坏死因子α（tumornecrosisfactor-a,TNF-α）、IL-1β及IL-10的浓度;⑤气管内注射慢病毒2周后取材肺组织提取蛋白用蛋白印迹法（Western blot）验证在体TMEM16A-shRNA慢病毒载体的沉默效率.结果 ①LA795细胞膜上存在TMEM16A的表达,LA795细胞在5 mg/L的Eni.S＋ polybrene条件下容易被感染,病毒感染复数（MOI）为20;②Western blot进一步显示体外细胞慢病毒shRNA的沉降效率约81.35％（P＜0.05）;③气管内注入Lenti-Neg-shRNA后BALF的蛋白含量无增加,细胞因子TNF-α、IL-1β及IL-10的浓度无明显变化（P＞0.05）;光镜下肺组织结构正常,未造成病理损伤;④气管内注入Lenti-TMEM16A-shRNA后,Western-blot结果显示TMEM16A表达水平降低（P＜0.05）,达到在肺部部分沉默TMEM16A的目的.结论 本研究成功构建小鼠TMEM16A-shRNA慢病毒载体,体内实验证实慢病毒气管内注射是比较安全,未增加肺组织的蛋白渗漏及病理损伤,并能有效转染气道及肺泡上皮细胞并在局部表达,成功沉默肺部TMEM16A的表达.
- 李宏林阎锡新张会然郭丽娜
- 关键词：RNA干扰慢病毒LA795
- 氯离子通道研究进展被引量：3
- 2015年
- 氯离子是体内最重要最丰富的阴离子,它进出细胞的过程,除了与氯离子相关的一些转运体主动转运有关外,经过阴离子通道进行转运是重要方式之一。氯离子通道组织分布广泛,参与了众多的生理过程:包括细胞体积的调节、膜电位的稳定性调节、信号转导以及跨上皮运输等。该文重点综述了钙激活氯通道和容积调节氯通道的生理功能及分子基础,简单介绍了电压门控氯通道、囊性纤维跨膜电导转运体及配体门控氯通道。
- 刘雅妮张会然赵晨黄东阳杜雨薇张海林
- 关键词：氯离子钙激活氯通道
- 氢气对环卫工人雾霾暴露肺保护性作用的研究被引量：15
- 2016年
- 目的 探讨氢气吸入对环卫工人雾霾暴露的肺保护性作用.方法 2016年1—2月选取石家庄市中心城区96名健康不吸烟环卫工人为研究对象,采用随机、对照、双盲的方法,将研究对象分为试验组（50名）及对照组（46名）.试验组给予吸入氢氧混合气（67%/33%）治疗,对照组给予吸入氮氧混合气（67%/33%）治疗,1 h/次,1次/d,为期30 d.分别在试验前1天（第0天）、试验开始第8、15及30天留取血样、诱导痰液、测定肺功能及呼出气一氧化氮（FeNO）,问卷调查及随访受试对象自觉症状改善情况.结果 （1）第8天试验组FeNO测定值为（16±5）×109,明显低于对照组的（21±14）×109（F=6.94,P〈0.05）;（2）第8天试验组FEV1占预计值%为（96±13）%,高于对照组的（94±14）%（F=3.96,P〈0.05）;第30天试验组FEV1占预计值%为（97±14）%,高于对照组的（95±12）%（F=8.5,P〈0.05）;第15天试验组PEF占预计值%为（73±15）%,高于对照组的（67±18）%（F=8.68,P〈0.05）;（3）痰上清液中,试验组第8、15、30天基质金属蛋白酶（MMP）-12与超氧化物歧化酶3（SOD3）低于对照组,第15、30天IL-10高于对照组,第30天丙二醛及IL-2低于对照组（均P〈0.05）.两组痰液中C反应蛋白（CRP）、转化生长因子（TGF）-β1差异无统计学意义（均P〉0.05）;（4）血清中,试验组第8、15、30天IL-2与SOD3低于对照组,IL-10高于对照组,第30天MMP-12低于对照组（均P〈0.05）.血清中CRP、TGF-β1、丙二醛各观察点两组比较差异无统计学意义（均P〉0.05）;（5）试验组结束治疗后咳嗽等呼吸系统症状得到明显改善.结论 氢气吸入治疗有助于降低气道氧化应激损伤相关炎性水平,对全身炎症反应可能也有一定抑制效果,同时能够改善环卫工人咳嗽等呼吸系统症状.
- 龚志晶关继涛任雪珠孟德杨张会然王伯丽阎锡新
- 关键词：颗粒物氢氧化性应激呼吸功能试验
