王宇
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南通大学医学院法医学系更多>>
- 发文基金：江苏省高校优势学科建设工程资助项目国家自然科学基金江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 硫氧还蛋白-1小干扰RNA加剧脂多糖诱导的大鼠肝细胞内质网应激被引量：2
- 2016年
- 目的探讨脂多糖（LPS）诱导大鼠肝细胞内质网应激（ERS）过程中硫氧还蛋白-1（Trx-1）的变化及其作用机制。方法①体外培养大鼠肝细胞株BRL，取部分细胞，分别用0．1、1．0、5．0、10．0、20．0mg／LLPS处理细胞12h；另取部分细胞，用10．0mg／LLPS分别处理细胞1、3、6、12、24h；均以LPS溶剂磷酸盐缓冲液（PBS）为对照，从量效和时效的角度观察LPS对Trx-1蛋白表达和ERS的影响。②体外培养大鼠肝细胞株BRL，分为溶剂对照组、阴性小干扰RNA（siRNA）对照组、Trx-1 siRNA对照组、LPS刺激组、阴性siRNA＋LPS组、Trx-1 siRNA＋LPS组，Trx-1 siRNA或阴性siRNA转染24h后用10．0mg／LLPS作用12h，观察Trx-1是否参与LPS诱导大鼠肝细胞ERS。用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测Trx-1、硫氧还蛋白还原酶（TrxR）和硫氧还蛋白结合蛋白（TXNIP）的蛋白表达，ERS标志性蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12（caspase-12）以及细胞凋亡执行蛋白caspase-3及其底物多聚二磷酸腺苷聚合酶-1（PARP-1）裂解片段的表达；采用细胞计数试剂盒检测细胞活性。结果①与溶剂对照组比较，LPS可诱导大鼠肝细胞Trx-1和TrxR蛋白表达上调、TXNIP蛋白表达下调，引起ERS相关蛋白GRP78、caspase-12上调，抑制细胞活性，且具有一定的剂量和时间依赖效应。②与溶剂对照组比较，除Trx-1及ERS相关蛋白外，LPS还可诱导大鼠肝细胞caspase-3及PARP-1裂解片段明显上调，同时抑制细胞活性；Trx-1 siRNA转染预处理24h能明显引起大鼠肝细胞Trx-1蛋白表达沉默（A值：0．249±0．017比0．531±0．030，P〈0．01），使LPS诱导的ERS及凋亡相关蛋白表达进一步上调[GRP78（A值）：1.247±0.124比0．786±0．048，caspase-12（A值）：0．810±0．017比0．578±0．013，caspase-3（A值）：0．508±0．008比0．308±0．009，PARP-1裂解片段（A值）：0
- 王涛费成平王宇刘晓珍刘夷嫦刘国庆闫骏谷振勇
- 关键词：硫氧还蛋白脂多糖小干扰RNA内质网应激肝细胞
- 硫化氢引起大鼠肝细胞非内质网应激依赖性细胞凋亡
- 2016年
- 目的 ：探讨内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）在外源性硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）引起大鼠肝细胞凋亡中的作用。方法：培养的大鼠肝细胞株BRL用50～2 000μmol/L H2S供体硫氢化钠（sodium hydrosulfide,Na HS）分别处理细胞1、12 h,用等体积的Na HS溶剂为对照。采用CCK8方法检测细胞活力,蛋白印迹技术检测细胞凋亡蛋白caspase-3、PARP-1、Bax和Bcl-2,ERS相关蛋白GRP78、CHOP和caspase-12,转录因子Nrf 2及其调控抗氧化蛋白Trx-1和HO-1的表达变化。结果：与对照组比较,50～100μmol/L Na HS无细胞毒效应,200～2 000μmol/L Na HS引起细胞活力明显降低;200～2 000μmol/L Na HS引起细胞激活型caspase-3及其底物PARP-1、Bax明显上调,Bcl-2表达下调,对ERS相关蛋白GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达无明显影响;50～2 000μmol/L Na HS能剂量依赖性引起转录因子Nrf 2及其调控抗氧化蛋白Trx-1和HO-1明显上调。结论：高浓度H2S可引起大鼠肝细胞非内质网应激依赖性细胞凋亡。
- 王涛费成平王宇刘晓珍刘国庆刘夷嫦谷振勇
- 关键词：硫化氢凋亡内质网应激肝细胞
- 大鼠视神经挫伤引起视网膜内质网应激被引量：1
- 2016年
- 目的 ：观察大鼠视神经挫伤后视网膜内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）变化。方法 ：复制大鼠视神经挫伤（optic nerve crush,ONC）模型。实验分正常对照组、假手术组和ONC组。用TUNEL方法检测细胞凋亡;用蛋白印迹技术检测凋亡相关蛋白表达和ERS相关蛋白表达;观察大鼠视网膜病理变化、检测神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs）数量和视网膜内侧部分厚度（retinal thickness of inner part,RTIP）。结果 ：与正常对照组比较,假手术组大鼠视网膜RGCs数量、RTIP未见明显变化;与假手术组比较,ONC 7～21 d组大鼠RGCs数量、RTIP分别呈时间依赖性数量减少、厚度变薄,ONC 3 d组TUNEL阳性细胞数量明显增多、主要分布于RGCs,细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Cleaved PARP-1和ERS相关蛋白GRP78、CHOP和caspase 12蛋白表达明显上调。结论 ：ONC能够诱导大鼠视网膜发生ERS,ERS可能是神经节细胞死亡的机制之一。
- 费成平王涛刘晓珍王宇朱旭东衣俊羽沈钟一丁岚娟吴海严韩新华谷振勇
- 关键词：视神经挫伤内质网应激视网膜神经节细胞
