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王锴: 作品数：19 被引量：31H指数：4; 供职机构：山西农业大学动物科技学院更多>>; 发文基金：山西省国际科技合作计划国家自然科学基金山西省回国留学人员科研经费资助项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生文化科学更多>>

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外源注射CART特异性dsRNA对蛋鸡产蛋性能和蛋品质的影响: 2016年; 选择500只健康、20周龄的海兰褐蛋鸡,预饲30 d后随机平均分为5组,每组4个重复,分别进行如下处理:生理盐水仅第1天注射一次组(A组,对照组)、可卡因—苯丙胺调节转录肽(CART)特异性双链RNA(dsRNA)仅第1天注射一次组(B组)、CART dsRNA每40 d注射一次组(C组)、CART dsRNA每20 d注射一次组(D组)、CART dsRNA每10 d注射一次组(E组),120 d后对各处理组蛋鸡的产蛋性能、蛋品质、蛋组分和体重变化进行测定,研究CART对产蛋期蛋鸡的产蛋性能和蛋品质的影响.结果表明:各试验组之间以及与对照组之间在产蛋率上均存在差异(P<0.05);B组的日产蛋量与对照组的差异不显著,其他试验组与对照组的差异显著(P<0.05);各试验组的采食量均高于对照组(P<0.05);从蛋料比来看,B、C组与对照组的差异不显著,D组与E组的差异不显著,但均与对照组存在差异(P<0.05);各试验组蛋品质、蛋组分与对照组的差异不显著;试验结束后,各试验组蛋鸡的体重变化与对照组均存在差异(P<0.05).总之,CART dsRNA对海兰褐蛋鸡产蛋性能和体重变化的影响显著,对蛋品质和蛋组分的影响不显著.; 李鹏飞景炅婕毕锡麟王锴张子宁吕丽华; 关键词：蛋鸡产蛋性能蛋品质

牛卵泡颗粒细胞PRSS23表达和功能研究: 牛是非常重要的畜牧业饲养动物,在肉用和奶用上都有广泛的应用。其性情温驯,是非季节性发情动物,也是单胎哺乳动物,排卵率低是限制牛扩大繁殖规模的重要因素。因此对于提高牛繁殖能力进行研究有重要意义。本课题组筛选出的丝氨酸蛋白酶...; 王锴; 关键词：颗粒细胞基因沉默; 文献传递

BMP15通过bta-miR-2285bc-BMPR2调控牛卵泡颗粒细胞功能的研究: 2023年; 本实验旨在探究牛卵泡颗粒细胞(Granulosa Cells,GCs)bta-miR-2285bc与BMPR2的靶标关系,及其作为BMP15下游关键因子对GCs增殖和卵泡发育的潜在调控作用。利用miRanda预测bta-miR-2285bc与BMPR2 3’UTR的结合位点,构建BMPR2 3’UTR野生型与突变型双荧光报告载体,并通过双荧光素酶报告试验验证其靶标关系;屠宰场获取牛卵巢并于实验室分离直径4~8 mm卵泡,刮取卵泡壁GCs进行体外培养。设置浓度梯度,根据BMPR2表达量确定BMP15最适添加浓度。转染bta-miR-2285bc mimics/inhibitor至GCs并添加BMP15,qRT-PCR和Western blotting分别检测BMPR2 mRNA和蛋白表达,随后qRT-PCR检测GCs BMP/Smad信号通路、增殖、凋亡和类固醇激素合成相关基因表达水平,Elisa检测细胞培养液中雌激素(E2)和孕激素(P4)浓度。结果显示:bta-miR-2285bc能够靶向结合BMPR2 3’UTR;向体外培养的GCs添加最适浓度BMP15(100ng/mL)并转染bta-miR-2285bcmimics时,BMP/Smad信号通路相关基因Smad1、Smad5、Smad9和Smad4表达量下降(P<0.05);细胞增殖相关基因CCND2表达量下降(P<0.05);细胞凋亡相关基因BAX和Caspase3表达量上升(P<0.05);抑凋亡基因BCL2表达量下降(P<0.01);类固醇激素合成相关基因CYP11A1、CYP19A1、HSD3B1和STAR表达量下降(P<0.05);GCs培养液中E2和P4浓度下调(P<0.05)。转染bta-miR-2285bc inhibitor得到与上述相反的实验结果。综上,BMP15通过bta-miR-2285bc-BMPR2调控牛卵泡GCsBMP/Smad信号通路、细胞增殖、细胞凋亡和类固醇激素合成相关基因的表达,调控类固醇激素的合成,进而可能影响GCs增殖和卵泡发育。; 成颖王锴张雅琦吕丽华; 关键词：卵泡颗粒细胞类固醇激素

WNT2在绵羊卵泡颗粒细胞的表达及功能研究被引量：2: 2020年; 旨在探究WNT2在绵羊卵泡颗粒细胞(GCs)中的表达及功能。本研究选取4~6月龄健康母羊20只,采集双侧卵巢,免疫组化技术检测WNT2蛋白在卵泡中的表达定位;qRT-PCR及Western blot技术检测其在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达差异;siRNA沉默GCs中的Wnt2基因后,qRT-PCR技术检测Wnt2基因及参与经典WNT信号通路关键基因CTNNB1的相对表达量,并测定GCs凋亡情况。结果表明:1)WNT2蛋白在绵羊卵泡内膜细胞、颗粒细胞以及卵丘细胞内均有表达。2)qRT-PCR及Western blot结果基本一致,均表明Wnt2 mRNA及蛋白在不同发育阶段卵泡颗粒细胞表达差异显著(P<0.05),且在大卵泡颗粒细胞内表达量显著高于中卵泡颗粒细胞(P<0.05),中卵泡颗粒细胞内表达量显著高于小卵泡颗粒细胞(P<0.05)。3)基因沉默后,沉默组Wnt2和CTNNB1的表达量均显著低于无义序列siRNA组(NC组)以及空白对照组(P<0.05),而Wnt2基因沉默组细胞凋亡率显著高于其他两组(P<0.05)。综上表明,WNT2是通过WNT2/CTNNB1信号通路促进绵羊卵泡颗粒细胞生物学功能的。; 薛丽娜薛丽娜王锴王锴党文庆罗惠娣罗惠娣吕丽华; 关键词：绵羊卵泡颗粒细胞 WNT/Β-CATENIN信号通路

Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞增殖的影响: 2023年; 【目的】卵泡发育是一个复杂的调控过程,其中绵羊卵泡颗粒细胞(granulosa cells,GCs)的增殖,分化会直接影响卵泡的发育状况。TGF-β信号通路在绵羊卵巢发育和卵泡生长过程中起着重要作用,Smad7作为TGF-β信号通路关键性的抑制基因也发挥重要作用,通过探究Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡GCs增殖凋亡的影响,为进一步研究Smad7在卵泡GCs增殖凋亡过程中的调控作用提供依据。【方法】选取4—6月龄未怀孕的晋中健康杜湖杂交母羊20只,屠宰后采集双侧卵巢组织,分离培养卵泡颗粒细胞,FSHR细胞免疫荧光鉴定,Smad7细胞免疫荧光的表达定位,CCK8法测定细胞增殖情况,绘制生长曲线;细胞传代后外源添加不同浓度Smad7激动剂积雪草苷(asiaticoside,AS)(0、100、200、400、600 ng·mL^(-1))培养绵羊卵泡GCs,选择AS最佳作用浓度处理二代颗粒细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平;合成3个siSmad7,转染至卵泡GCs中,选择干扰效果最佳的,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平。【结果】Smad7在绵羊卵泡GCs中有表达;200 ng·mL^(-1) AS能极显著上调Smad7在GCs的表达(P<0.01),siSmad7-1对绵羊卵泡GCs的转染效果最佳(P<0.01);Smad7上调能显著增加TGF-β信号通路Smad4,TFDP-1和EP300的表达量(P<0.05),极显著增加TGF-β信号通路SP1的表达(P<0.01),显著增加凋亡相关基因Caspase8的表达量(P<0.05),极显著增加凋亡相关基因Caspase3和Bim的表达量(P<0.01),显著升高细胞周期相关基因P21和P27的表达量(P<0.05),极显著升高细胞周期相关基因CCND2的表达量(P<0.01),而CCND1的表达量显著降低(P<0.05);Smad7 siRNA显著降低TGF-β信号通路Smad4,TFDP-1和EP300的表达量(P<0.05),极显著降低TGF-β信号通路SP1的表达量(P<0.01),显著降低凋亡相�; 郭泽媛杜张胜张雅琦陈春路马晓燕成颖王锴吕丽华; 关键词：积雪草苷 SIRNA SMAD7 TGF-Β信号通路绵羊颗粒细胞

Notch2在牛黄体化颗粒细胞中的调控作用被引量：1: 2021年; 试验旨在探究Notch2在牛黄体化颗粒细胞中的调控机制。将免疫荧光鉴定采集到的原代颗粒细胞,通过慢病毒过表达技术感染牛黄体化颗粒细胞,最后应用qRT-PCR技术检测周期基因、抗氧化基因和孕酮合成相关基因的表达。结果显示:牛黄体化颗粒细胞过表达Notch2胞内功能片段NICD2后,周期基因CyclinD1、CyclinD2、CDK4和PCNA的mRNA表达量上升(P<0.05),而CDK1基因的mRNA表达无显著差异;抗氧化基因SOD和CAT的mRNA表达量上升(P<0.05);孕酮合成相关基因CYP11A1、STAR和3β-HSD的mRNA表达量上升(P<0.05)。综上所述,推测Notch2在牛卵泡颗粒细胞黄体化过程中促进细胞增殖、抗氧化水平和孕酮的合成。; 李雅婷贾凯琪郭翔宇成颖周正义王锴马晓燕吕丽华; 关键词：NOTCH2 增殖抗氧化

转录组测序筛选牛卵泡发育相关基因及其表达差异分析被引量：7: 2018年; 【目的】通过不同生理状态牛卵泡高通量测序筛选与卵泡发育相关的基因。【方法】母牛同期发情后,B超声波连续监测并适时采集第一卵泡波出现偏差前的最大卵泡(the largest follicle at predeviation,PDF1)和第二大卵泡(the second largest follicle at predeviation,PDF2),构建RNA文库后Illumina平台测序,经数据库比对,设定参数筛选高表达基因、差异表达基因并进行GO分析,Genecards基因功能查询进一步筛选与卵泡发育直接相关的调控基因,q RT-PCR对筛选的基因进行表达量验证分析。【结果】两个转录本中共获得263个差异表达基因;GO功能聚类分析共分为三大类90组:其中生物学过程占64.4%,细胞组分占17.8%,分子功能占17.8%;获得一些重要的功能富集通路,如调控信号转导和细胞因子应答的生物途径;基因表达量分析筛选出10个高表达的上调和下调基因,获得参与雌激素合成和胎儿性别发育的CYP17A1、参与类固醇激素合成的LOC785462、细胞发育过程中调节细胞凋亡的DACH1以及调节ERK和MEK1/2信号通路的MAP3K3。Genecards功能查询共获得6个基因与卵泡发育关系较为密切,其中上调基因分别为PRSS35,PTGRF,ARID4B,GPR116;下调基因为APOA1和CPXM1;q RT-PCR结果显示,PRSS35和ARID4B在DF中的表达量显著高于SF(P<0.05),CPXM1在SF中的表达量极显著高于DF(P<0.01),PTGRF,GPR116和APOA1在DF和SF中的表达量不存在显著差异(P>0.05),但其表达变化趋势与高通量测序结果相一致。【结论】转录组测序结果真实可靠,PRSS35和ARID4B在卵泡发育过程中发挥正调控作用,CPXM1在卵泡发育过程中发挥负调控作用,获得的牛卵泡发育相关基因和重要调节途径,对后期深入探讨卵泡发育调控机理的研究具有重要意义。; 李鹏飞孟金柱景炅婕毕锡麟王锴朱芷葳吕丽华; 关键词：卵泡转录组发育

用于神经肽受体筛选的方法: 本发明公开了一种用于神经肽受体筛选的方法，依据统计学原理，要求基因组测序结果FDR校正后的P＜0.05，基因差异表达倍数的选择依据是配体‑受体结合产生的效应强度与占领受体的数量成正比；采用蛋白同源建模技术建立蛋白模型；综...; 李鹏飞吕丽华谢建山孟金柱刘岩姚晓磊赵妙妙景炅婕毕锡麟王锴; 文献传递

牛卵巢PRSS35基因CDS序列分析被引量：1: 2019年; 为测定牛卵巢丝氨酸蛋白酶35 (PRSS35)的CDS序列并进行生物信息学分析。试验根据NCBI上已公布牛PRSS35基因的mRNA序列设计特异性引物,使用RT-PCR技术扩增牛卵泡中PRSS35的CDS序列。结果显示,牛PRSS35基因CDS区序列全长为1 239 bp,共编码412个氨基酸,PRSS35与其他10个物种的同源序列相似性较高,且该蛋白具有一个长度为20个氨基酸的信号肽,具有11个O-糖基化位点和2个N-糖基化位点,以及3个磷酸化位点,并发现有一个典型的Tryp_Spc结构域,即胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶结构域。为进一步研究该基因及其编码蛋白在卵泡发育过程中所起的作用提供了一定的理论依据。; 毕锡麟王锴景炅婕韩琦李鹏飞吕丽华; 关键词：卵泡生物信息学分析

牛卵巢卵泡Smad9表达模式的研究被引量：1: 2021年; 本研究旨在探究Smad9在牛卵巢卵泡中的表达模式,为研究Smad9的功能奠定基础。从屠宰场获取牛卵巢,分离得到小卵泡(2 mm≤直径≤4 mm)、中卵泡(4 mm<直径<8 mm)、大卵泡(直径≥8 mm),用免疫组织化学技术对不同直径卵泡的Smad9蛋白进行定位分析;通过机械分离法分离卵泡颗粒细胞,用qPCR和Westernblotting技术检测Smad9在小卵泡、中卵泡、大卵泡颗粒细胞中的相对表达量。结果显示:在牛的卵泡中,Smad9在颗粒细胞和膜细胞层中表达;小卵泡和中卵泡颗粒细胞中Smad9mRNA转录本相对丰度低于大卵泡颗粒细胞(P<0.01),而中卵泡颗粒细胞内Smad9 mRNA转录本相对丰度低于小卵泡(P<0.05);中卵泡和小卵泡颗粒细胞中Smad9蛋白的表达量低于大卵泡(P<0.01),中卵泡颗粒细胞中Smad9蛋白表达量是小卵泡的0.9倍(P<0.05)。综上,Smad9主要在牛卵泡颗粒细胞层中表达,且大卵泡表达量极显著高于小卵泡和中卵泡。; 郭翔宇贾凯琪韩琦马晓燕党文庆王锴李雅婷李鹏飞吕丽华; 关键词：卵泡颗粒细胞

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