胡月
- 作品数：21 被引量：38H指数：4
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区重大科技专项新疆维吾尔自治区高校科研计划新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 荧光蛋白标签对gD囊膜蛋白在BHK-21细胞亚细胞定位的影响被引量：3
- 2016年
- 【目的】探究荧光蛋白标签对马疱疹病毒I型(Equine herpes virus type 1,EHV-1)gD囊膜蛋白亚细胞定位的影响。【方法】以EHV-1基因组为模板利用PCR扩增gD全基因,分别克隆至pAcGFP1-C1和p Ds Red2-N1质粒,构建p Ac-GFP-gD(GFP-gD)和p Ds-gD-Red(gD-Red)重组质粒;将GFP基因插入gD基因信号肽序列之后并克隆至PVAX-1质粒,构建PVAX-S-GFP-gD’(S-GFP-gD’)重组质粒;将Flag标签序列与gD囊膜蛋白N端序列融合后并克隆至p VAX-1表达载体,构建p VAX-Flag-gD(Flag-gD)重组质粒。将4种不同重组真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,通过激光共聚焦显微镜对不同融合蛋白gD进行亚细胞定位。【结果】成功构建4种不同的融合蛋白gD真核表达载体;在BHK-21细胞单独表达时,不同融合蛋白gD绝大部分都定位于高尔基体,极少量定位于细胞核内。【结论】不同插入位点的荧光蛋白标签对gD囊膜蛋白亚细胞定位无明显影响,这对今后研究其它蛋白亚细胞定位提供参考。
- 王世民张艳楠胡月苏艳冉多良包晓玮
- 关键词：亚细胞定位
- 新疆1株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析
- 2022年
- 为了解乌鲁木齐市鸡传染性支气管炎(IB)的流行特征,本研究利用鸡胚培养、RT-PCR、新城疫病毒(NDV)干扰及鸡胚半数感染量(EID_(50))测定等多种方法分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),将其命名为IBV/CK/CH(XJ)/01/2020。对其S1基因进行序列测定及比对分析发现,该分离株在鸡胚上连传5代出现侏儒胚现象,并且可以抑制NDV在鸡胚中的增殖,经计算其EID_(50)为10^(-4.58)/0.1 mL,为中等毒力毒株,攻毒组与正常组比较,雏鸡气管内有大量黏液且肺脏肿大,表现为呼吸型毒株特征,且其S蛋白裂解位点序列为HRRKR,与TC07-2、GX-NN0903等毒株形成一个独立的发育进化群,均属于TC07-2/GVI-1型IBV;与国内常用的H120、H52、M41等疫苗株的同源性仅为59%-65%。本研究为新疆地区IB的流行病学提供参考,也为当地IB的防控提供了理论依据。
- 刘建华马彩红加尔肯胡月孙文程阿里木江·喀迪尔苏战强冉多良
- 关键词：传染性支气管炎病毒S1基因
- 马疱疹病毒1型ORF5基因分子特征分析及原核表达载体的构建
- 2021年
- 马疱疹病毒1型(EHV-1)对马产业造成严重的经济损失。该病的防控主要依赖疫苗免疫,但是现有的检测方法不能有效区分疫苗免疫与自然感染,给流行病学调查和疫病的防控带来了一定的阻碍。本研究聚焦EHV-1的非结构蛋白,以EHV-1 XJ2015株为研究对象,扩增ORF5基因进行其遗传进化分析、氨基酸序列差异性分析、蛋白质性质分析,并根据分析结果设计引物扩增保守性与抗原性高的片段,构建原核表达载体,结果表明与31株EHV-1病毒ORF5基因核苷酸序列相似性达94.9%~100%,EICP27蛋白包含一个核定位信号,无核外运信号、无跨膜螺旋结构域、无信号肽,第75~204位氨基酸易形成潜在的抗原表位;对重组质粒pET-32a(+)-NSP5进行PCR鉴定,进行凝胶电泳观察结果,条带大小与目的基因相符,表明重组质粒pET-32a(+)-NSP5构建成功。本研究为区分EHV-1自然感染与疫苗免疫的检测方法的建立奠定基础。
- 祖力亚江·阿不都热合曼刘建华胡月轩梦珂马彩虹吴桂灵
- 关键词：ORF5基因生物信息学分析原核表达载体
- 新疆普氏野马源马疱疹病毒1型的分离与鉴定
- 2024年
- 为鉴定并分离新疆野马繁殖研究中心疑似发生马鼻肺炎的病原,本研究采集该中心患病马的鼻拭子、血液样品及病变组织,常规处理后经PCR扩增,13份马鼻咽拭子和4份病料样品均获得806 bp的目的条带,将鼻拭子和病变组织研磨液混合后分别接种于RK-13细胞和MDBK细胞盲传3代,每代均出现细胞病变(CPE)。利用PCR扩增出现CPE的细胞培养物中马疱疹病毒1型(EqAHV-1)的gG基因并测序,采用间接ELISA方法对采集的13份血清样品进行EqAHV-l检测,并对EqAHV-l gG基因进行遗传进化分析。将EqAHV-l分别经酸、碱、紫外线、热处理后,接种于RK-13细胞中,测定病毒的半数感染量(TCID_(50));并进一步对分离病毒进行血清中和试验,通过透射电镜鉴定EqAHV-l。结果显示,第3代细胞培养物经PCR扩增获得806 bp的目的条带,与NCBI中登录的EqAHV-l gG基因序列同源性达99.97%;13份血清样品中EqAHV-l抗体阳性率为100%(13/13)。该病毒对强酸、强碱和紫外线敏感,不耐热;EqAHV-l感染RK-13和MDBK细胞的病毒效价分别为10^(4.71)TCID_(50)/0.1 mL和10^(3.48)TCID_(50)/0.1 mL,能被EqAHV-l阳性血清(1:24)中和。该病毒粒子呈直径约120 nm的有囊膜球形结构,与EqAHV-l结构相符。综上所述,本研究分离到新疆普氏野马源EqAHV-l,将其命名为EqAHV-l/PH/China/XJ1/2019株。本研究为进一步研究新疆普氏野马源EqAHV-l的生物学特性奠定基础,为预防该病毒的感染提供数据和技术支持。
- 王雪竹胡月陈卓刘建华冉多良
- 关键词：普氏野马
- 马疱疹病毒1型gp2基因缺失株的构建及生长特性分析被引量：1
- 2021年
- 构建针对马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1,EHV-1)XJ2015株的转移载体pUC-gp2^(-)LR和pUC-gp2^(-)LR-EGFP;将EHV-1 XJ2015基因组与pUC-gp2^(-)LR-EGFP共转染至RK-13细胞,利用EGFP基因筛选获得EHV-1 XJ2015-gp2^(-)/EGFP+毒株,以此毒株基因组与pUC-gp2^(-)LR共转染至RK-13细胞,筛选去除EGFP基因的EHV-1 XJ2015-gp2^(-)毒株并通过生长曲线、蚀斑形态、易感细胞连续传代评价其增殖能力和遗传稳定性。结合荧光观察、空斑纯化和PCR检测,获得能稳定遗传的EHV-1 XJ2015-gp2^(-),该毒株的生长曲线与亲本株存在差异,增殖能力下降约2个病毒滴度;两者的空斑面积平均值分别为0.378 mm^(2)和1.698 mm^(2),差异极显著(P<0.01)。结果表明,成功获得EHV-1 gp2基因缺失株,该毒株的体外生长动力学较亲本毒弱,为研制EHV-1减毒活疫苗奠定了基础。
- 胡月贾钦瑞吴桂灵车传忠刘建华加尔肯冉多良
- 关键词：基因缺失生物学特性
- 马疱疹病毒1型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2021年
- 为快速准确地检测马疱疹病毒1型(equine herpesvirus 1,EHV-1),本研究根据EHV-1基因组序列进化分析筛选出特异性较高的ORF68基因的保守区域设计引物与探针,建立了TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该方法线性关系良好,相关系数为0.999;灵敏度高,最低检测量为10.2拷贝/μL,比常规PCR敏感1000倍;特异性强,检测EHV-2、EHV-4、EHV-5、马动脉炎病毒和马流感病毒均无交叉反应;重复性好,组内及组间样本检测的Ct值均小于等于2%;对2020年收集的60份伴有呼吸道症状的马匹鼻试子进行检测分析显示本方法的阳性检出率(26.67%)高于SYBR GreenⅠ荧光定量PCR(23.33%)和常规PCR(21.67%)。本研究建立了一种快速、灵敏、稳定、特异性强的TaqMan荧光定量PCR检测方法,可用于EHV-1的快速诊断和核酸定量检测,为EHV-1的防控工作提供了有力手段。
- 胡月刘建华王雪竹车传忠吴桂灵加尔肯冉多良
- 关键词：荧光定量PCRTAQMAN探针
- 马疱疹病毒1型gp2基因分子特征
- 2022年
- 为了探索α疱疹病毒亚科的马疱疹病毒特有基因gp2的功能及分子结构,本试验以EHV-1 XJ2015株为研究对象,扩增其gp2基因并测序,继而进行遗传进化分析、氨基酸序列差异性分析和蛋白质性质分析。结果显示,30株EHV-1病毒gp2蛋白氨基酸序列相似性达90.38%;gp2蛋白预测包括1个信号肽、1个螺旋跨膜结构域和1个核外运信号;gp2蛋白二级结构以无规卷曲为主,高达88%,极性分子居多,亲水性氨基酸占52.02%,第25~130位和第273~565位氨基酸亲水性和抗原性较强,易形成潜在的抗原表位。由此可见,gp2基因属于EHV-1较保守的基因,gp2蛋白是分泌型蛋白,且具有良好的抗原性。本试验为进一步解析EHV-1 gp2基因及其编码蛋白功能、制作基因工程疫苗和诊断试剂提供了生物信息学依据。
- 刘建华吴桂灵胡月加尔肯贾钦瑞孙文程撒瑞雪张嗣玉冉多良
- 关键词：分子结构生物信息学分析
- 马疱疹病毒1型gB糖蛋白表位与小鼠C3d串联重组质粒免疫效果分析被引量：1
- 2017年
- 为了探究马疱疹病毒1型gB糖蛋白表位与小鼠C3d串联重组质粒的免疫效果。设计合成完整的抗原表位串联体B;以小鼠脾脏总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增出小鼠C3d基因;以EHV-1基因组为模板扩增出gB基因;构建重组质粒B-pVAX1、gB-pVAX1、C3d-pVAX1、B-C3d-pVAX1和gB-C3d-pVAX1;转染BHK-21细胞后能正常表达;将重组质粒免疫BALB/c雄性小鼠。结果表明:B-pVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于gB-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P<0.01);B-C3dpVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于B-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P<0.01);gB-C3d-pVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于gB-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P<0.01);重组表位串联体B能够增强小鼠体液免疫和细胞免疫,同时C3d作为分子佐剂具有增强免疫的作用。
- 李静鲍子磊范斌胡月宋焕堂刘建华
- 关键词：B细胞表位重组质粒免疫效果
- 马疱疹病毒1型感染的叙利亚金黄地鼠脑脊髓炎模型的建立及其脑组织转录组学分析
- 2025年
- 旨在了解马疱疹病毒1型(EHV-1)导致脊髓型脑病的机制。采用EHV-1/China/YL2023株,以鼻内接种病毒的方式感染叙利亚金黄地鼠建立脑脊髓炎模型,并对脑组织进行转录组学测序分析。结果:感染EHV-1/China/YL2023分离株的叙利亚金黄地鼠,第5天出现食量减退、精神沉郁、口部流涎、皮毛凌乱等症状,且较对照组更具有攻击性;第7天开始出现神经症状,转圈、头点地即下垂,共济失调、站立不稳、行走困难、颈部僵硬,眼观发现脑充血、水肿以及轻度液化,对脑部进行苏木精伊红(HE)染色显示神经元肿胀、坏死及大量炎性细胞浸润;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测发现促炎细胞因子γ干扰素(IFN-γ)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因的表达量发生显著变化,表明EHV-1/China/YL2023分离株感染叙利亚金黄地鼠脊髓性脑病模型成功建立。转录组学测序分析表明,差异表达基因中有719个表达基因上调,173个基因表达量下调;基因本体(GO)富集分析表明,差异基因主要富集于免疫反应、免疫系统过程、防御反应、细胞增殖、胞外间隙、内吞囊泡、蛋白结合、信号受体结合、细胞因子受体结合、CXCR趋化因子受体结合;京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示,主要富集的通路包括病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用、抗原加工与提呈、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、趋化因子信号通路及NOD样受体信号通路、吞噬体信号通路、细胞黏附分子以及自然杀伤细胞介导的细胞毒性信号通路。因此,本研究构建了叙利亚金黄地鼠脊髓性脑病感染模型,对其进行转录组学测序分析,得到多个与EHV-1感染组织的差异表达基因和所富集的通路,为研究马鼻肺炎的分子机制提供基础,为后续的防控研究及新型疫苗提供新思路。
- 撒瑞雪杨一明赵敏贾晗铎付玉李银涛张嗣玉刘建华冉多良胡月加尔肯
- 关键词：差异表达基因转录组动物模型
- 马疱疹病毒1型XJ2015株全基因组测序及分析
- 马疱疹病毒1型(Equine herpesvirus-1,EHV-1)是一种可导致马属动物多种疾病的病原体,潜伏期长且能够建立终身感染。可引起不同程度的呼吸系统、神经系统疾病、孕马流产和新生马驹死亡。EHV-1属于疱疹病...
- 胡月刘建华冉多良
- 关键词：全基因组测序分子特征
