谢鹏宇
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
- 供职机构：齐齐哈尔大学生命科学与农林学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省普通高等学校青年学术骨干支持计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的C和D线性抗原表位的抗原性比较被引量：3
- 2016年
- 为比较猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白含有的两个线性抗原表位(C和D)的抗原性,本研究采用Dot-ELISA方法对原核表达的S蛋白抗原C和D的两种线性表位重组蛋白进行了抗原性比较分析。结果表明,在等质量或等摩尔的条件下,含有抗原线性表位C的重组蛋白的抗原性弱于含有抗原线性表位D的重组蛋白。本研究为建立TGEV感染的血清学诊断方法,以及进一步研究抗原线性表位C和D的结构及功能奠定了基础。
- 于天飞张喜文朱可佳陈刚李赫陆泽谢鹏宇
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白抗原性
- 脊椎动物细小病毒衣壳结构研究进展被引量：1
- 2020年
- 脊椎动物细小病毒是一类感染脊椎动物的单链DNA病毒,该病毒衣壳无包膜,呈T=1二十面体对称。从1991年第1个脊椎动物细小病毒--犬细小病毒衣壳结构发布至今,研究人员陆续解析了近100种该类病毒衣壳结构,并揭示了其结构与功能的关联性。尽管脊椎动物细小病毒衣壳蛋白序列多样性高,然而其衣壳的拓扑学结构相对保守。脊椎动物细小病毒衣壳核心蛋白二级结构之间的环状结构构象各不相同,从而使衣壳表面形态具有种属特异性。这些变化使每种病毒可与特定宿主受体结合而产生特定组织嗜性和抗原多样性。文章综述了脊椎动物细小病毒衣壳结构功能和基于衣壳结构的基因工程载体开发的研究进展,以期为我国脊椎动物细小病毒衣壳结构方面的研究提供借鉴。
- 于天飞谢鹏宇尹海畅黎明胡丽霞樊兴冬齐岩
- 关键词：衣壳衣壳蛋白
- 猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白亲和肽的原核表达被引量：1
- 2020年
- 【目的】原核表达猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)spike蛋白亲和肽(SQHT),检测其病毒亲和性,为建立TGEV诊断方法奠定理论和物质基础。【方法】人工合成TGEV spike蛋白亲和肽基因,亚克隆后将该基因分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1中,构建重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,对重组质粒进行BamHⅠ单酶切和BamHⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。将重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),用IPTG进行诱导表达,对其表达产物的生物学活性进行检测。【结果】亚克隆获得了150 bp的TGEV spike蛋白亲和肽基因。成功构建了重组质粒pET-32a-SQHT和pGEX-6p-SQHT,并诱导表达出重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT,其分子质量分别为25和31 ku。Western blot分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子具有良好的亲和性;Dot-ELISA分析表明,2种重组蛋白与TGEV病毒粒子的最低结合滴度TCID50为5×102 mL-1。特异性试验表明,重组蛋白TRX-SQHT和GST-SQHT均可与TGEV产生特异性结合,而不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)结合。【结论】使用原核细胞成功表达了TGEV spike蛋白亲和肽,表达的重组蛋白具有很好的TGEV特异亲和性。
- 于天飞董慧莹董慧莹谢鹏宇孙婉姝黎明黎明
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒SPIKE蛋白原核表达
- 鸡细小病毒研究进展被引量：2
- 2019年
- 鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)发现于20世纪80年代早期,普遍存在于患有发育障碍与矮小综合征(Runting stunting syndrome,RSS)病鸡的肠道内。RSS以腹泻、精神沉郁、体温调节障碍、生长迟缓、饲料消耗增加为主要特征,给养鸡业造成较大的经济损失。用于ChPV检测的方法包括PCR、real-time PCR、ELISA、高通量测序技术等,目前还没有可用于防治ChPV的特效疫苗和药物。文章综述了目前关于ChPV在分子生物学、流行病学、发病机制和诊断方法方面的最新研究进展,以期为我国ChPV相关方面的研究提供借鉴。
- 于天飞孙婉姝孙婉姝谢鹏宇黎明于志丹
- 关键词：分子生物学流行病学发病机制
- 番鸭细小病毒非结构蛋白NS1与水禽真核翻译延伸因子1A1的体外互作分析被引量：1
- 2021年
- 旨在探讨番鸭细小病毒(MDPV)非结构蛋白NS1与水禽真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)之间的互作关系。根据GenBank中已发表的北京鸭和浙东白鹅eEF1A1基因序列,经大肠杆菌偏爱密码子优化,人工合成的质粒分别命名为pUC57-DeEF1A1和pUC57-GeEF1A1;对含有MDPV YL08株NS1基因的重组质粒pUC57-NS1、pUC57-DeEF1A1和pUC57-GeEF1A1进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,回收目的片段后分别插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a中,构建了重组质粒pGEX-DeEF1A1、pET-GeEF1A1、pET-NS1和pGEX-NS1;重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白GST-DeEF1A1、TRX-GeEF1A1、TRX-NS1和GST-NS1的表达;采用HRP标记的GST单克隆抗体鉴定GST-DeEF1A1、HRP标记的His单克隆抗体鉴定TRX-GeEF1A1;采用HRP标记的His单克隆抗体鉴定TRX-NS1、HRP标记的GST单克隆抗体鉴定GST-NS1,采用MDPV感染番鸭血清鉴定TRX-NS1和GST-NS1的抗原性;采用GST pull-down试验验证GST-DeEF1A1与TRX-NS1、GST-NS1与TRX-GeEF1A1的互作。结果表明,获得的重组蛋白GST-DeEF1A1、TRX-GeEF1A1、TRX-NS1和GST-NS1的分子量分别为76.9,67.9,89.5,98.6 ku;GST-DeEF1A1和GST-NS1可与HRP标记的GST单克隆抗体特异性结合,TRX-GeEF1A1和TRX-NS1可与HRP标记的His单克隆抗体特异性结合;GST-NS1和TRX-NS1可与MDPV感染番鸭血清特异性结合,抗原性良好;GST pull-down试验中,GST-DeEF1A1可与TRX-NS1互作,GST-NS1不与TRX-GeEF1A1互作。本研究表明,MDPV NS1蛋白可以和北京鸭eEF1A1在体外相互作用而不能和浙东白鹅eEF1A1在体外相互作用,互作结果差异性可能与二者的102-106 aa,108 aa的氨基酸残基有关。
- 于天飞谢鹏宇谢鹏宇孙婉姝尹海畅黎明黎明
- 关键词：番鸭细小病毒非结构蛋白
- 水禽核糖体蛋白S12与番鸭细小病毒结构蛋白VP1的体外相互作用研究被引量：1
- 2022年
- 为了探讨水禽核糖体蛋白S12(ribosomal protein S12,RPS12)与番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)结构蛋白VP1之间的相互作用关系,试验根据GenBank中已登录的北京鸭和浙东白鹅RPS12基因序列,人工合成重组质粒pUC57-DRPS12和pUC57-GRPS12,双酶切后回收目的片段,分别插到载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-DRPS12和pGEX-GRPS12。将pGEX-DRPS12、pGEX-GRPS12及含MDPV YL08株VP1基因的重组质粒pET-VP1分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达,利用HRP标记的GST或His标签单克隆抗体,通过Western-blot法鉴定重组蛋白,采用GST pull-down法体外检测水禽RPS12蛋白与VP1蛋白的相互作用情况。结果表明:获得的重组蛋白GST-DRPS12、GST-GRPS12和TRX-VP1分子质量分别为41.2,40.3,98.8 ku,浓度为1.32,1.29,0.81 mg/mL;重组蛋白TRX-VP1能够与MDPV YL08株感染的番鸭血清特异性结合,具有较好的反应原性;重组蛋白TRX-VP1可以和GST-DRPS12、GST-GRPS12在体外相互作用。说明MDPV VP1蛋白与水禽RPS12蛋白存在相互作用关系。
- 谢鹏宇孙婉姝于天飞李静尹海畅黎明黎明
- 关键词：番鸭细小病毒结构蛋白原核表达
- 抗鹅细小病毒NS1蛋白单克隆抗体可变区的原核表达
- 2021年
- 为了在大肠杆菌中表达抗鹅细小病毒(GPV)NS1蛋白单克隆抗体轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,并测定其与NS1蛋白结合活性。对抗GPV NS1蛋白单克隆抗体VL、VH基因核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化,人工合成获得了含有可变区基因的重组质粒pUC57-VL和pUC57-VH。然后用Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切pUC57-VL、pUC57-VH,回收340 bp的VL基因和370 bp的VH基因。目的基因通过Bam HⅠ/XhoⅠ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a,获得重组质粒pET-VL和pET-VH。重组质粒经Bam HⅠ单酶切和Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。重组质粒分别转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白TRX-VL和TRX-VH的表达,分子量分别为30.3,31.4 ku。纯化后的重组蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性结合,鉴定结果表明,获得的纯化蛋白为目的蛋白。间接ELISA分析表明,0.4μg的TRX-VH可与25 ng的GST-NS1蛋白特异性结合而0.4μg的TRX-VL不能与各包被量的GST-NS1蛋白特异性结合,TRX-VH与GST-NS1蛋白的特异性结合可被1∶200稀释的GPV感染鹅血清完全阻断。
- 于天飞谢鹏宇谢鹏宇孙婉姝尹海畅黎明黎明
- 关键词：鹅细小病毒非结构蛋白单克隆抗体原核表达
- 番鸭细小病毒YL08株VP2和VP3蛋白的原核表达及免疫反应性被引量：1
- 2022年
- 为获得番鸭细小病毒(muscovy duck parvovirus,MDPV)重组结构蛋白VP2、VP3,本研究以含有MDPV YL08株VP1基因的重组载体pET-32a-VP1为PCR扩增模板,分别亚克隆VP2、VP3基因。构建了重组载体pGEX-6p-VP2、pGEX-6p-VP3并将它们转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,分别构建了重组菌株pGEX-6p-VP2/Rosetta(DE3)和pGEX-6p-VP3/Rosetta(DE3)。2种重组菌株在IPTG诱导下分别获得了重组蛋白GST-VP2和GST-VP3,分子质量分别为91、86 ku。Western blot分析结果表明,重组蛋白GST-VP2和GST-VP3可特异性结合GST-tag单克隆抗体和MDPV感染番鸭血清,免疫反应性良好。Dot-ELISA比较分析结果表明,在等质量条件下,GST-VP2的免疫反应性强于GST-VP3。
- 李静谢鹏宇于天飞柳芳芳尹海畅于志丹
- 关键词：番鸭细小病毒VP2VP3原核表达免疫反应性
- 猪传染性胃肠炎病毒S蛋白抗原表位C的串联表达研究被引量：5
- 2017年
- 为比较含有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白抗原表位C不同表位密度的重组蛋白的抗原性,本研究将抗原表位C的编码核酸序列进行串联,构建了重组表达质粒pET-(C_1C_2)_2~p ET-(C_1C_2)_6,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。Western blot分析表明,表达的6种重组蛋白r-C_1C_2~r-(C_1C_2)_6均具有良好的抗原性。采用Dot-ELISA方法对各重组蛋白进行了抗原性比较分析。结果表明,含有12个表位肽的重组蛋白r-(C_1C_2)_6的抗原性强于其它重组蛋白。本研究制备的串联重组蛋白为建立TGE血清学诊断方法奠定了物质基础。
- 于天飞董慧莹张喜文谢鹏宇王有祺孙婉姝
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白
- 猪传染性胃肠炎病毒血清抗体Dot-ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2018年
- 为快速检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体,本研究以原核表达系统串联表达的含有TGEV S蛋白抗原表位C的重组蛋白r-(C_1C_2)6为包被抗原建立TGEV血清抗体的Dot-ELISA检测方法。经反应条件优化结果显示,抗原最适包被量为62.5 ng/点;血清最佳工作浓度和工作时间分别为1∶80和45 min;羊抗猪IgG-HRP最佳工作浓度和工作时间分别为1∶800和45 min;最适封闭条件分别为5%脱脂乳37℃,45 min;血清和酶标抗体最适反应温度均为37℃;最佳显色时间7.5 min。结果显示该方法与猪轮状病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清无交叉反应,表明其具有良好的特异性。该方法对TGEV阳性血清最低检测限为1∶1 280。采用建立的Dot-ELISA对27份临床猪血清样品进行检测,结果显示Dot-ELISA与TGEV/PRCV抗体检测试剂盒检测结果的符合率为92.6%。本研究建立的Dot-ELISA检测方法简便、快速、灵敏、特异,适合用于TGE快速诊断。
- 于天飞董慧莹董慧莹张喜文谢鹏宇孙婉姝
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒DOT-ELISA
