许彦鸣
- 作品数：75 被引量：188H指数：7
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- HRE/CMV启动子的克隆和缺氧调控活性的测定
- 2007年
- 目的:将具有缺氧调控作用的多种缺氧反应元件(HRE)与CMV启动子组合,以获得缺氧应答启动子。将荧光素酶报告基因置于缺氧应答启动子的下游,通过检测荧光素酶活性的方法,方便地研究缺氧应答启动子缺氧诱导的作用。方法:合成多种HRE核苷酸序列,并设立HRE突变对照,克隆入pCI-neo中,构建HRE/CMV启动子。扩增HRE/CMV序列,定向亚克隆入pGL3-Basic中,获得HRE/CMV荧光素酶报告载体。瞬时转染HeLa细胞,在0.1%O2环境下培养细胞,并设立正常氧分压环境对照。检测荧光素酶的相对活性。结果:成功构建了HRE/CMV荧光素酶报告载体,其中mPGK-HRE/CMV载体表现出很好的缺氧诱导作用和高水平的表达。结论:mPGK-HRE/CMV启动子能够有效地进行缺氧诱导和调控工作。
- 杨洁杜德伟李占亭贾林涛赵晶许彦鸣杨安钢孙脊峰
- 关键词：缺氧反应元件荧光素酶
- bcl-2核酶与Bax在诱导食管癌细胞凋亡中的协同作用被引量：13
- 2000年
- 为了同时调节二种凋亡相关蛋白的表达诱导肿瘤细胞凋亡 ,探索肿瘤基因治疗的可能性 ,同时转入可诱导表达的特异性切割 bcl- 2的核酶基因及 bax基因 ,间接免疫荧光标记法检测 Bcl- 2及Bax蛋白的表达量 ,用 TUNEL、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 .共转染后 Bcl- 2蛋白表达下降 ,同时 Bax蛋白表达升高 ,导致 30 %左右细胞凋亡 ,并可使细胞对紫杉醇的敏感度增加近4倍 ,使紫杉醇有效作用时间缩短近一倍 .同时调节二个凋亡相关基因可导致细胞凋亡 ,并能有效促进化疗药物诱导的凋亡 .同时校正多个基因的异常表达 ,比仅仅改变单个基因可更有效地达到治疗肿瘤的目的 .
- 彭玮丹张杰惠宏襄许彦鸣杨安钢王成济
- 关键词：BCL-2BAX凋亡基因治疗食管癌细胞
- PTI-1表达载体构建及在大肠杆菌中的高效表达和纯化被引量：2
- 2002年
- 目的 构建表达人前列腺癌诱导基因 1(PTI- 1)蛋白的重组质粒 ,在大肠杆菌中诱导高效表达并纯化 .方法 应用亚克隆 PTI- 1基因的 p U C19/ PTI- 1质粒 ,重新构建表达载体 PTI- 1/ p GEX4T- 1,酶谱分析鉴定出正确的重组质粒 ,诱导表达 ,进行 SDS- PAGE分析 ,应用 GSH树脂纯化表达产物 .结果 筛选出 5个与 p GEX4T- 1正向重组质粒 ,其中一株表达一个 Mr为 6 90 0 0的新蛋白 ,并以包涵体的形式存在 ,蛋白在宿主菌中高效表达 ,表达量为 43.2 %,纯化蛋白得到纯度为 79.72 %的 GST/ PTI- 1融合蛋白 .结论 重组质粒 PTI- 1/PGEX4T- 1的构建和 GST/ PTI- 1融合蛋白高效表达及纯化的成功使简便获得前列腺癌诱导蛋白成为可能 .
- 付振虹王禾武国军许彦鸣袁建林王成济杨安钢
- 关键词：大肠杆菌纯化前列腺肿瘤基因基因表达
- 重组人肿瘤坏死因子-α联合肿瘤坏死因子受体1基因转染杀伤舌癌细胞的实验研究被引量：4
- 2004年
- 目的 :观察重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)对建系细胞 (T T)作用效应与机制。方法 :反转录PCR方法克隆人TNFR1基因 ,并将其稳定转染入舌癌细胞中 ,建系并鉴定 ;通过MTT法检测、DNA降解片段琼脂糖凝胶电泳及电镜观察检测rhTNF α对T T细胞的作用效果与机制。结果 :成功构建含TNFR1基因的真核表达质粒 pcDNA3 TNFR1,并建立表达TNFR1蛋白活性的舌癌细胞系T T ;较之亲本Tca 8113细胞及转染空载体的T pc细胞 ,rhTNF α对T T细胞具有更强的细胞毒作用 ,且通过介导细胞凋亡的方式发挥其作用。结论 :重组人肿瘤坏死因子 α联合肿瘤坏死因子受体 1基因转染可有效地杀伤舌癌细胞 ,为舌癌基因治疗提供理论依据。
- 刘大庆司徒镇强曹云新许彦鸣于翠娟王成济杨安钢
- 关键词：肿瘤坏死因子受体肿瘤坏死因子舌癌细胞
- 分泌表达的抗ErbB2单链抗体与重构型人半胱氨酸蛋白水解酶3融合蛋白对SKBr3细胞的靶向杀伤作用被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨分泌表达的抗erbB2单链抗体与重构型人半胱氨酸蛋白水解酶 (caspase 3)融合蛋白对ErbB2抗原阳性肿瘤细胞的靶向杀伤作用。方法 将重构型人caspase 3基因亚克隆入pCMV e2 3scFv PEII PEIII相应位点 ,构建表达分泌型的抗erbB2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白基因的真核表达载体 pCMV e2 3scFv PEII revcasp 3,转染人T淋巴瘤细胞系Jurkat,筛选并建系 ,ELISA检测培养上清中融合蛋白的分泌表达以及对人乳腺癌细胞SKBr3生长的抑制作用 ,并将重组质粒经脂质体包裹后肌肉注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤的抑制作用 ,间接免疫荧光检测重构型人caspase 3蛋白在瘤体的靶向分布。结果 融合蛋白基因可通过Jurkat细胞分泌表达并杀伤SKBr3细胞 ,肌肉注射重组质粒明显延长荷瘤裸鼠生存时间 (延长 72 % )和抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长 (抑制率为77% )。间接免疫荧光染色显示重构型人Caspase 3融合蛋白具有靶向分布。结论 分泌表达的抗erbB2单链抗体与重构型人Caspase 3融合蛋白靶向诱导SKBr3细胞死亡。
- 张立红贾林涛于翠娟曲萍董海龙赵晶许彦鸣王成济杨安钢
- 关键词：分泌表达融合蛋白靶向杀伤作用CASPASE-3基因疗法
- 针对HER2/neu的siRNA对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用被引量：4
- 2006年
- 目的:构建针对HER2/neu的RNA干涉载体,观察对HER2/neu表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响.方法:设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链,退火互补成双链,克隆至pSUPER质粒载体,转化DH5α菌株,提取质粒,转染过表达HER2/neu的肺腺癌细胞系SPCA1,RTPCR检测HER2/neu的mRNA表达,Westernblot和间接免疫荧光法检测HER2/neu的蛋白表达,FCM分析细胞周期变化,MTT法观察细胞生长.结果:肺腺癌细胞系SPCA1存在HER2/neu过表达;成功构建了HER2/neu特异性RNA干涉载体pSUPERsiHER2;瞬时转染SPCA1细胞,HER2/neu的mRNA及蛋白表达均降低;G1期细胞较亲代增加9.9%;肿瘤细胞增殖速度减慢(P<0.05).结论:成功构建了HER2/neuRNA干涉载体,转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPCA1HER2/neu的mRNA转录及蛋白水平表达,阻滞转染细胞于G1期,造成转染细胞生长速度减慢,这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段.
- 任新玲钱桂生鲍炜付海京贾林涛张瑞王涛许彦鸣杨安钢
- 关键词：SIRNARNA干涉HER2/NEU癌细胞生长
- 人fadd基因cDNA的克隆和诱导舌癌细胞凋亡的研究被引量：1
- 2002年
- 目的 :观察人 fadd基因对舌癌 (Tca 8113 )细胞的凋亡诱导作用。方法 :用反转录PCR获取人fadd基因 ,将基因克隆入真核表达载体 pcDNA3和 pIRES2 EGFP中 ,脂质体法转染舌癌细胞 ,通过细胞计数、荧光显微镜及电镜观察、流式细胞仪等检测被转染细胞的生长及其凋亡状况。结果 :成功获取了人fadd基因。与对照组相比 ,在转染 1～ 3d内 ,fadd基因的表达导致舌癌细胞存活数目减少 ,大量细胞发生凋亡。结论 :人 fadd基因可以诱导转染的舌癌细胞发生凋亡。
- 刘大庆司徒镇强许彦鸣曹云新于翠娟王成济杨安钢
- 关键词：克隆舌癌细胞凋亡基因疗法
- NT3基因工程细胞经脑脊液途径的耳蜗内生物学效应的初步证明被引量：15
- 2002年
- 目的 通过脑脊液途径移植神经营养因子 - 3(NT3)基因工程细胞 ,初步观察其耳蜗内听觉生物学效应。方法 将体外构建的NT3基因工程细胞扩大培养 ,收集浓缩培养上清中的蛋白 ,用印迹杂交鉴定其分泌蛋白的生物学效应 ,再将适当的细胞直接移植到 2 0天龄近交BALB/C小鼠的脑脊液中 ,4 0天后比较移植前后的畸变产物耳声发射 (DPOAE)幅值。结果 体外构建NT3基因工程细胞是可行的 ,其具备分泌NT3的功能 ,经脑脊液途径注射后观察到BALB/C小鼠耳蜗功能的老化在高频范围内得到了延缓 ,DPOAE高频范围幅值下降减缓。结论 NT3基因工程细胞具有较好的体外体内生物学效应 ,可以用于进一步实验治疗感音性聋的研究 ;
- 高下王锦玲杨安钢金明许彦鸣王枫
- 关键词：生物学效应神经营养因子-3基因转染基因工程细胞耳蜗感音性聋
- 重构型caspase-3的表达及其对SKBr3细胞的凋亡诱导作用被引量：2
- 2002年
- 目的:探讨重构型caspase-3基因的表达对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。方法:用重组PCR的方法获得大、小亚基顺序颠倒的重构型caspase-3基因并将其克隆入真核表达载体pcDNA3,转染乳腺癌细胞系SKBr3细胞,通过HE染色、流式细胞仪分析及免疫组化等方法观察其表达后对细胞的促凋亡活性,并将载体DNA直接注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤的抑制作用。结果:重构型caspase-3基因可在SKBr3细胞内表达,转染组较同期对照组出现明显的细胞死亡现象,pcDNA3-revcasp-3重组质粒直接注入对荷瘤裸鼠肿瘤生长有明显抑制作用。结论:重构型caspase-3基因表达可诱导SKBr3细胞凋亡。
- 张立红贾林涛陈广生曲萍于翠娟赵晶许彦鸣王成济杨安钢
- 关键词：凋亡SKBR3乳腺癌肿瘤细胞
- 重组抗HER2 ScFv/tbid基因的表达及其对乳腺癌SKBr-3细胞的促凋亡作用被引量：1
- 2006年
- 目的:观察构建的重组抗HER2ScFv/tbid基因在SKBr-3细胞中的表达及其对转染的SKBr-3细胞的作用.方法:用限制性内切酶双酶切已构建的pcDNA-bid质粒,获得带有PE转膜结构域和tbid的重组基因,将所获基因插入到真核表达载体pCMV单链抗体基因ScFv23e的下游,转染SKBr-3细胞.间接免疫荧光法检测目的蛋白的表达,MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况.结果:转染SKBr-3细胞后,检测出目的蛋白的表达.MTT实验发现细胞的增殖被明显抑制.间接免疫荧光双标记染色检测tBid的表达,并可观察到Cytc在细胞质中存在,SKBr-3细胞出现凋亡.结论:重组抗HER2ScFv/tBid分子可以在转染的SKBr-3细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡.
- 王芳裘秀春王立锋许彦鸣赵晶孟艳玲贾林涛王成济范清宇杨安钢
- 关键词：BID乳腺肿瘤
