赵一瑾
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：齐鲁工业大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生环境科学与工程轻工技术与工程更多>>
- 枯草芽孢杆菌芽孢衣壳蛋白CotC表面展示海藻糖合酶的技术研究
- 海藻糖是由两分子葡萄糖通过半缩醛羟基缩合而成的，自然界中普遍存在的一种非还原性双糖，是一种极好的天然干燥剂和保鲜剂。海藻糖合酶（ Trehalose synthase，TreS）属于糖苷水解酶第13家族，能够催化麦芽糖直...
- 赵一瑾
- 关键词：海藻糖合酶发酵合成芽孢杆菌
- Cot系列芽孢衣壳蛋白作为分子载体表面展示海藻糖合酶的研究
- 表面展示技术是指通过基因工程技术将外源蛋白或多肽定位到噬菌体、细胞或芽孢表面的一种技术。自1985年首次发现噬菌体M13能够作为一种展示外源蛋白或多肽的载体后，其他噬菌体展示技术、酵母表面展示技术和细菌表面展示技术便应运...
- 赵一瑾王腾飞王瑞明
- 海藻糖合酶在毕赤酵母表面的展示被引量：2
- 2016年
- 海藻糖合酶能够利用麦芽糖一步法转化生产海藻糖,其底物专一性较高,该酶体系生产工艺简单,不受底物麦芽糖浓度的影响,是工业生产海藻糖的首选。为获得具有生产海藻糖合酶能力的毕赤酵母表面展示载体,实验以筛选的Pseudomonas putide P06海藻糖合酶基因为模板,PCR扩增得到海藻糖合酶基因(tres,2 064 bp),连接至pPICZαA质粒中,获得重组质粒pPICZαA-tres。以来自酿酒酵母的共价连接细胞壁的Pir系列蛋白的Pir1p成熟肽蛋白作为毕赤酵母表面展示的锚定蛋白,利用PCR技术扩增得到pir1p(847 bp),连接至重组质粒pPICZαA-tres中,获得重组质粒pPICZαA-tres-pir1p。将重组质粒电击转入毕赤酵母GS115中,利用α-factor信号肽将蛋白引导分泌至细胞壁展示于毕赤酵母表面。通过Zeocin抗性筛选,挑选出阳性克隆子并摇瓶发酵。发酵产物经离心、破碎并使用昆布多糖酶水解,洗脱,结果显示,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析可见明显融合蛋白条带,表明海藻糖合酶已成功地锚定在毕赤酵母。将重组毕赤酵母使用p H 7.5的缓冲液清洗并重悬,与底物浓度为30%的麦芽糖在30℃~60℃水浴条件下作用2 h,反应产物利用HPLC检测,能够检测到酶学活性。在优化后的条件p H 7.5,50℃,表面展示海藻糖合酶酶活达到300.65 U/g。40℃~50℃酶活较稳定,保温60 min,残留酶活相对活力达75%以上;最适反应p H值为7.5,并在碱性环境下稳定。
- 李梦悦王腾飞汪俊卿赵一瑾程成王瑞明
- 关键词：海藻糖海藻糖合酶毕赤酵母
- 以CotC为分子载体在枯草芽孢杆菌表面展示海藻糖合酶被引量：1
- 2017年
- 海藻糖是自然界中普遍存在的一种非还原性双糖,是一种极好的天然干燥剂和保鲜剂。海藻糖合酶能够催化α,α-1,4-糖苷键连接的麦芽糖直接转化为α,α-1,1-糖苷键连接的海藻糖,是生产海藻糖的首选。为获得具有良好展示效果的海藻糖合酶,将其高效稳定的展示于枯草芽孢杆菌芽孢表面,实验同时分别选取增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和海藻糖合酶(Tres)作为模型蛋白,以来自枯草芽孢杆菌的芽孢衣壳蛋白Cot C作为枯草芽杆菌表面展示的锚定蛋白进行表面展示研究。利用流式细胞仪分析EGFP在芽孢表面展示的情况,结果表明芽孢衣壳蛋白Cot C可以将EGFP固定在芽孢的表面。然后将荧光蛋白基因egfp通过酶切替换为海藻糖合酶基因tres,将重组菌株使用p H7.5的缓冲液清洗并重悬,与底物浓度为30%的麦芽糖在50℃水浴条件下作用2h,反应产物利用HPLC检测,能够检测到海藻糖峰,通过计算得到的酶活为252U/ml。说明海藻糖合酶基因通过与芽孢衣壳蛋白Cot C融合后可被展示在芽孢的表面。
- 赵一瑾王腾飞汪俊卿王瑞明
- 关键词：海藻糖海藻糖合酶枯草芽孢杆菌
