罗娜
- 作品数：14 被引量：21H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局医学科研项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 维持静息细胞周期状态的小鼠肝细胞的分离纯化和原代培养
- 2012年
- 目的建立维持正常肝细胞静息细胞周期状态的小鼠肝细胞的分离纯化及原代培养方法。方法对传统小鼠肝细胞分离纯化的原位两步胶原酶灌流法进行改良,台盼蓝染色法计数细胞总数并鉴定肝细胞活率;用改良的WME培养基对C57BL/6小鼠肝细胞进行原代培养,经过碘酸雪夫氏染色(Periodic acid-Schiff stain,PAS)和全自动生化分析仪鉴定肝细胞的生物学特性及功能;Western blot法检测分离纯化后的小鼠肝细胞及原代培养24、48、72、96 h小鼠肝细胞的细胞周期蛋白p16、cyclin D1和cyclin A的表达水平。结果分离纯化后可从每只小鼠肝脏稳定获取(3～5)×107个肝细胞,细胞活率达(86.68±2.46)%;原代培养96 h内的小鼠肝细胞能保持合成糖原、白蛋白、尿素的功能;原代培养小鼠肝细胞中,细胞周期蛋白p16、cyclin D1和cyclin A的表达水平与分离纯化的小鼠肝细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05),表明原代培养96 h内的小鼠肝细胞均能维持静息细胞周期状态。结论改良的分离纯化方法能稳定获得高产量、高活率的小鼠肝细胞;改良后的原代培养方法可使肝细胞维持其特异性功能、分化特性及静息细胞周期状态。
- 罗娜蔡园张俊汤为学吴小翎何松
- 关键词：肝细胞提纯原代培养细胞周期
- Mini-CEX联合MDT在急诊科住院医师规范化培训中的应用效果
- 2024年
- 目的探讨迷你临床演练评估(mini-clinical evaluation exercise,Mini-CEX)联合多学科综合治疗协作组(multidisciplinary team,MDT)在急诊科住院医师规范化培训中的运用效果。方法选择于医院急诊科进行规范化培训的住院医师,2022年6—8月进行规范化培训者为传统培训组,2022年9—11月进行规范化培训者为Mini-CEX联合MDT组。传统培训组35名,给予常规教学方式教学,Mini-CEX联合MDT组35名,给予Mini-CEX联合MDT教学,教学完成后评估规范化培训住院医师的理论成绩及实际操作技能,教学前、后通过Mini-CEX考核规范化培训住院医师的问诊能力、临床诊断、操作能力、查体能力、治疗方案、沟通能力,给予评判性思维能力量表-中文版(critical thinking disposition inventory—Chinese version,CTDI-CV)、学生自主学习能力评价量表评价,比较2组教学满意度。结果Mini-CEX联合MDT组理论知识、实际操作技能评分较传统培训组高,差异有统计学意义(P<0.001);Mini-CEX联合MDT组问诊能力、临床诊断、操作能力、查体能力、治疗方案、沟通能力评分较传统培训组高,差异有统计学意义(P<0.001);Mini-CEX联合MDT组CTDI-CV评分较传统培训组低,自主学习能力评分、教学满意度较传统培训组高,差异有统计学意义(P<0.001)。Mini-CEX联合MDT组教学满意度(97.14%)较传统培训组高(85.71%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论在急诊科住院医师规范化培训中运用Mini-CEX联合MDT教学,可提升规范化培训住院医师理论及实践操作成绩,提升其综合临床能力、评判性思维能力、自学能力及教学满意度。
- 王川江刘景仑周发春罗娜
- 关键词：急诊科住院医师规范化培训评判性思维能力
- 结核杆菌热休克蛋白70作为表位肽载体体外诱导HBV特异性免疫应答被引量：2
- 2014年
- 目的在体外研究结核杆菌热休克蛋白70(TB.HSP70)作为乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)细胞毒性T淋巴细胞表位肽载体,诱导HBV特异性免疫应答。方法应用毕赤酵母分泌表达HSP70(P1)、HSP70-HBcAg(18-27)(P2)、HSP70-PreS2B(18-24)-PreS2Th(37-53)-HBcAg(18-27)(P3),用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹法鉴定各重组蛋白的表达。体外考察重组蛋白(P1、P2、P3)对慢性乙型肝炎外周血来源的树突状细胞和淋巴细胞的作用,流式细胞术评估树突状细胞的成熟,酶联免疫吸附测定法检测细胞因子白细胞介素(IL)-12p70、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)分泌情况,TdR-3H掺入法检测淋巴细胞的增殖情况,应用经典51 Cr法检测重组蛋白诱导HBV特异性细胞毒活性。结果重组蛋白P1、P2、P3构建成功,P1、P2、P3能诱导树突状细胞成熟,上调CD1a、CD40、CD86表达,释放Th1型细胞因子IL-12p70、IL-1β和TNF-α,P3最能有效激活自体淋巴细胞成为细胞毒活性细胞,促进淋巴细胞增殖和IFN-γ的释放,而单独的HSP70无杀伤活性。结论 TB.HSP70可作为HBV HBcAg细胞毒性T淋巴细胞表位肽载体,提高T淋巴细胞表位肽的免疫原性,且含有B、Th表位的P3能更好地激活HBV特异性免疫应答。
- 罗莉何松罗娜彭明利
- 关键词：T淋巴细胞树突细胞
- HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响
- 2012年
- 目的构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响。方法以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板,用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,并酶切和DNA测序鉴定。用SapⅠ单酶切这两种质粒,获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组,经转染试剂PolyJetTMReagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中。在转染后各时间点Western blot检测HBx蛋白的表达,Southern blot和Real-time PCR同时检测细胞质DNA复制和细胞核cccDNA的合成,Real-time PCR分析定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录。结果在野生组中可检测到HBx蛋白的表达,而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Western blot的检测范围。两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异(P>0.05)。而在转染后96 hHBx突变组中细胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50%～70%(P<0.05)。结论 HBx缺失虽然不影响细胞核HBV cccDNA的合成,但是它能下调细胞质HBV DNA的复制和pgRNA的转录。
- 罗莉何松郭进军雷宇罗娜龚倩
- 关键词：HBVX蛋白CCCDNA定点突变技术
- 具有双通道通气和恒定泄气量功能的新型无创正压通气面罩治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重合并CO_(2)潴留患者的临床效果研究被引量：1
- 2023年
- 背景无创正压通气(NPPV)是治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)合并CO_(2)潴留患者的重要呼吸支持技术。但现有NPPV面罩内存在明显无效腔效应,容易导致CO_(2)重复呼吸而影响患者CO_(2)潴留的纠正。目的研发一种具有双通道通气和恒定泄气量功能的NPPV面罩(即TCCL面罩),并探讨其在NPPV治疗AECOPD合并CO_(2)潴留患者中的价值。方法选择重庆医科大学附属第一医院重症医学科2020-2021年收治的30例AECOPD合并Ⅱ型呼吸衰竭行NPPV治疗的患者为研究对象。根据不同的NPPV面罩类型随机分为试验组(n=15)和对照组(n=15)。试验组采用TCCL面罩;对照组采用传统NPPV面罩和侧孔型呼气阀的组合。监测两组NPPV治疗0 h、4 h、8 h、24 h、48 h及停止NPPV 24 h的动脉血氧分压(PaO_(2))和二氧化碳分压(PaCO_(2))水平。结果两因素重复测量方差分析结果可见,时间和组间对PaO_(2)、PaCO_(2)不存在交互作用(P>0.05),时间对PaO_(2)、PaCO_(2)主效应显著(P<0.001),组间对PaO_(2)主效应不显著(F_(组间)=0.153,P_(组间)=0.699),组间对PaCO_(2)主效应显著(F_(组间)=5.129,P_(组间)=0.031)。两组治疗0 h的PaO_(2)水平均低于治疗4 h、8 h、24 h、48 h及停止NPPV 24 h(P<0.05);两组治疗4 h的PaO_(2)水平均低于治疗8 h、24 h、48 h及停止NPPV 24 h(P<0.05);两组治疗8 h的PaO_(2)水平均低于治疗48 h及停止NPPV 24 h(P<0.05);对照组治疗24 h的PaO_(2)水平低于治疗48 h(P<0.05);试验组治疗24 h的PaO_(2)水平低于治疗48 h及停止NPPV 24 h(P<0.05);相同时间点两组间PaO_(2)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组治疗4 h、8 h、24 h的PaCO_(2)水平低于对照组(P<0.05)。两组治疗0 h时PaCO_(2)水平高于治疗4 h、8 h、24 h、48 h及停止NPPV 24 h(P<0.05),两组治疗4 h时PaCO_(2)水平高于治疗8 h、24 h、48 h及停止NPPV 24 h(P<0.05),两组治疗8 h的PaCO_(2)水平高于治疗24 h、48 h及停止NPPV 24 h(P<0.05)。对照组治疗24 h时PaCO_(2)水
- 黄桃罗娜罗娜徐钦
- 关键词：肺疾病面罩血气分析正压呼吸无创正压通气
- 含莫西沙星方案治疗重症社区获得性肺炎的疗效分析
- 罗娜王川江何发明
- HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响
- 目的 构建HBx 基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究 HBx 缺失对HBV复制和转录的影响.方法 以包含HBV 全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0 为模板,用定点突变技术构建HBx 基因缺失突变质粒...
- 罗莉何松郭进军雷宇罗娜龚倩
- 关键词：HBVXCCCDNA定点突变技术
- 上调microRNA-150表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响被引量：7
- 2012年
- 目的探讨上调microRNA-150(miR-150)表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法 SMMC7721细胞分成miR-150感染组(加入pGIPZ-miR-150慢病毒表达载体)、阴性对照组(加入只含GFP的慢病毒载体)和空白对照组(不转染)。采用荧光定量PCR检测miR-150的表达情况,Western blotting检测靶基因c-Myb蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果荧光定量PCR结果显示,转染miR-150pGIPZ后,SMMC7721细胞miR-150表达量(2.48±0.15)较阴性对照组(0.81±0.09)增加了2倍(P<0.01)。CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,miR-150组的细胞增殖率显著降低(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,miR-150组细胞c-Myb蛋白表达(0.31±0.07)与空白对照组(0.80±0.09)及阴性对照组(0.81±0.08)相比明显减少(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,miR-150组细胞凋亡率(19.36%±1.78%)与阴性对照组(5.12%±0.54%)及空白对照组(4.68%±0.35%)相比明显增加(P<0.01)。结论上调miR-150表达可通过降低靶基因c-Myb的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-150可能成为肝癌靶向治疗新的靶基因。
- 张俊罗娜王勃李少林朱辉
- 关键词：肝肿瘤细胞增殖细胞凋亡微RNAS
- 乙型肝炎病毒Ⅹ蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨HBV复制过程中HBx蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响。方法采用原代小鼠肝细胞为研究系统，用野生型HBV质粒（pHBV）和HBx蛋白表达缺失的HBV质粒（pHBV△X）分别转染细胞。Westernblot检测细胞周期蛋白cyclinD1、cyclin E、cyclinA及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p16（p16）、p21的表达水平l实时荧光定量PCR和Southernblot检测HBVDNA复制水平。两组之间比较用两样本均数f检验，多样本均数间的比较用方差分析及q检验。结果新分离肝细胞和原代培养24、48、72h肝细胞的细胞周期蛋白表达水平无明显差异；转染48h后，pHBV组细胞与pHBV△X组细胞周期蛋白条带灰度值相比，前者cyclinD1、p21、cyclinE表达量较高，p16的表达量较低，统计量t值分别为15．713，22．897，14．680，-19．584，P值均〈0．05。培养72h后提取HBVDNA，Southernblot检测HBVDNA复制中间体松散环状DNA、双链线性DNA、单链DNA的水平，经条带灰度扫描，pHBV组的水平（分别为3288．336±448．011、6458．318±182．163、2760．613±393．561）明显高于pHBV△X组（分别为515．721±62．530、2122．228±28．347、1632．013±207．021）及空白对照组，P值均〈0．05 实时荧光定量PCR检测HBVDNA复制水平，pHBV组【每个细胞（987．50±47．80）拷贝】也明显高于pHBVAX组【每个细胞（303．67±33．94）拷贝】，t=20．203，P〈0．05。结论HBx蛋白能通过调节细胞周期中各蛋白的表达，使细胞由静止期（G0）进入DNA合成前期（G1）并停滞于G1期，从而促进HBV的复制。
- 蔡园何松罗娜罗莉龚倩
- 关键词：肝炎病毒乙型转染小鼠细胞周期蛋白质类HBX蛋白
- 乙型肝炎病毒X蛋白及其截短体与损伤DNA结合蛋白1在HBV复制中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白（HBx）及其两个截短体（HBx、HBx43～154）与损伤DNA结合蛋白（DDB）1在HBV复制中的作用。方法用质粒瞬时转染HepG2细胞，72h后分别提取细胞总蛋白质和总RNA，通过Westernblot分析验证DDB1蛋白表达，逆转录实时定量PCR在基因的mRNA水平观察HBx蛋白及其截短体对DDB1蛋白表达的影响。提取转染72h后细胞胞质DNA，收集细胞的培养上清液，通过实时定量PCR及酶联免疫吸附试验检测各组细胞胞质HBVDNA复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平，从而观察HBx蛋白及其两个截短体与DDB1对HBV复制的影响。对数据进行单因素方差分析及检验。结果在有HBV复制的HepG2细胞中，缺失HBx转染组细胞中DDB1蛋白在mRNA水平明显下降（相对表达水平为野生型转染组的52．74％±8．95％，f=9．143，P〈0．05），胞质DNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平也明显下降（相对表达水平分别为野生型转染组的55．49％±1．19％、48．05％±2．90％、46．22％±2．20％，P值均〈0．05）。共转染HBxN-端截短体HBx4。后细胞中DDB1蛋白mRNA水平恢复到野生型水平，且能使缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBVDNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平。但共转染HBxC-端截短体HBx的细胞中DDB1蛋白在mRNA水平较野生组明显下降（相对表达水平为野生型转染组的59．95％±9．09％，f=7．629，P〈0．05），且不能使转染缺失HBx蛋白的HepG2细胞中胞质HBVDNA的复制及培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg的表达恢复到野生型水平（相对表达水平分别为野生型转染组的62．53％±0．67％、63．13％±2．14／0、55．40％±0．99％，P值均〈0．05）。并且各转染组DDB1蛋白mRNA水平变化与胞质HBVDNA复制和培养上清液中病毒标志物HBsAg、HBeAg表达水平是一致的。结论C-�
- 杨旋何松罗娜罗莉樊浩龚倩
- 关键词：肝炎病毒乙型乙型
