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钱忠
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1
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供职机构:
中国科学院北京基因组研究所
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发文基金:
国家重点基础研究发展计划
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相关领域:
生物学
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合作作者
武岚
中国医学科学院北京协和医学院
缪时英
中国医学科学院北京协和医学院
王琳芳
中国医学科学院北京协和医学院
付俊
中国医学科学院北京协和医学院
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2009
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腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析
2009年
目的纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析。方法将tte1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coliBL21(DE 3)后获得表达菌株。该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导高效表达出带有谷胱甘肽S转移酶标签的可溶性融合蛋白,经过GlutathioneSepharoseTM4B亲和层析、Resource Q 6 mL离子交换层析和10/300 superdex 200分子筛层析纯化后,得到目的蛋白TTE1925。结果纯化后蛋白的纯度达到99%以上。蛋白采用悬滴气相扩散法得到衍射至1.9的棒状晶体。结论成功制备了高纯度TTE1925蛋白,获得TTE1925蛋白质晶体,为进一步解析变旋酶的三维结构及其生物学功能分子机制研究奠定了基础。
武岚
钱忠
付俊
缪时英
王琳芳
关键词:
原核表达
蛋白质纯化
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