刘欣民
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
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- 腺病毒介导的HSV-TK/GCV系统在Cfos启动子调控下对胶质瘤细胞的杀伤作用被引量：1
- 2015年
- 目的 构建人Cfos启动子调控的单纯疱疹病毒（HSV）-胸苷激酶（TK）自杀基因重组腺病毒载体,观察其介导的HSV-TK/更昔洛韦（GCV）系统对胶质瘤细胞的杀伤作用. 方法 构建重组腺病毒载体Ad-Cfos-TK-IRES-hr绿色荧光蛋白（GFP）、Ad-CMV-TK-IRES-hrGFP,转染至HEK293细胞获得重组腺病毒Ad-Cfos-TK-IRES-hrGFP、Ad-CMV-TK-IRES-hrGFP,荧光计数法检测病毒滴度;将病毒感染U251、U87细胞,荧光显微镜下观察GFP的表达.将病毒感染U251、U87细胞,24 h后加入1000、100、10、1、0.1、0.01、0μmol/L GCV作用48 h,CCK-8法检测各组细胞抑制率. 结果 成功构建重组腺病毒载体pDC315-CMV-TK-IRES-hrGFP、pDC315-CFOS-TK-IRES-hrGFP.荧光计数法检测显示2种腺病毒滴度均达1＆#215;1010 PFU/mL.在病毒感染复数（MOI）为100、GCV浓度为1、10、100、1000 μmol/L时,转染Ad-Cfos-TK-IRES-hrGFP组U251细胞抑制率分别为（24.18±6.01）％、（30.39±9.67）％、（57.07±9.29）％、（94.50±3.48）％,转染Ad-Cfos-TK-IRES-hrGFP组U87细胞细胞抑制率分别为（9.78±2.24）％、（86.33±5.06）％、（98.48±0.79）％、（98.76±0.93）％. 结论 腺病毒介导的HSV-TK/GCV系统在Cfos启动子调控下在体外可以有效杀伤胶质瘤细胞.
- 王浩潘建青胡继良冯诣宋伟健罗杰刘欣民魏强国洪全球翟宝进
- 关键词：神经胶质瘤
- 脑室腹腔分流术应用于创伤性脑损伤后不同程度脑积水的效果研究被引量：1
- 2017年
- 目的探讨脑室腹腔分流术应用于创伤性脑损伤后不同程度脑积水的效果。方法选择2015年2月‐2017年2月收治的88例创伤性脑损伤并脑积水患者作为研究对象,以脑积水程度将其分为3组,即轻度组30例、中度组30例,重度组28例。3组患者均行脑室腹腔分流,观察3个月,对比3组临床治疗效果;观察治疗前后格拉斯哥预后评分(GOS)评分、格拉斯哥昏迷评分(GCS)评分、脑室周围水肿带直径的变化;观察术后并发症情况。结果重度组术后总有效率57.14%,低于轻度组的96.67%、中度组的90.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度组与中度组治疗后GOS评分、GCS评分均高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);脑室周围水肿带直径低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。重度组GOS评分、GCS评分、脑室周围水肿带直径与治疗前相比差异无统计学意义(P>0.05)。重度组术后并发症发生率32.14%,高于中度组6.67%、轻度组6.67%(P<0.05)。结论脑室腹腔分流术对轻度、中度创伤性脑损伤后脑积水的治疗效果与安全明显优于重度脑积水。
- 魏强国胡深刘欣民
- 关键词：脑室腹腔分流术创伤性脑损伤脑积水
- 磁标记神经干细胞移植治疗脑梗死大鼠MRI示踪及形态学研究被引量：1
- 2008年
- 目的:利用磁共振成像(MRI)技术追踪移植的超顺磁性氧化铁标记神经干细胞(NSCs),无创、动态地监测NSCs在活体脑内的存活和迁移。方法:大鼠32只制备右侧大脑中动脉瘤局灶脑缺血/再灌注(MCAO)模型,BrdU标记NSCs,立体定向磁标记NSCs脑内移植,MRI下活体动态追踪脑内移植的磁标记NSCs,实验动物于磁标记NSCs脑内移植第1、5和14天达到观察时相点后,取脑组织做石蜡切片及HE染色。结果:24只大鼠出现明显的神经功能缺失症状。MRI追踪示:磁标记NSCs脑内移植1d后,针道和侧脑室部位有低信号物质存在;磁标记NSCs脑内移植5d后,低信号物质沿胼胝体腹侧迁移;磁标记NSCs脑内移植2周,右侧(病灶侧)侧脑室部位低信号物质向缺血区迁移,其前端已达到缺血区的边缘。脑组织病理学检测:BrdU阳性磁标记NSCs沿胼胝体腹侧向缺血/再灌注区迁移。随着脑内磁标记移植时间的推移,侧脑室区的NSCs向缺血/再灌注区迁移数量逐渐增加。结论:超顺磁性氧化铁颗粒和BrdU双标记的神经干细胞移植至脑梗死大鼠脑内后可迁移到病灶区;MRI成像能够在活体内连续示踪观察神经干细胞的迁移及分布情况。
- 翟宝进刘欣民李双英钟士江王爽陈礼明
- 关键词：干细胞脑梗塞
- 颅内动脉瘤研究现状被引量：2
- 2008年
- 颅内动脉瘤是脑血管系统的有破裂倾向的局灶性病理扩张，其破裂可致脑蛛网膜下腔出血。对其病因学的研究，有望揭示动脉瘤发病的生物学机制，为其早期预防和治疗提供依据。本文对近年来颅内动脉瘤的研究现状做一综述。
- 刘欣民翟宝进焦德让
- 关键词：颅内动脉瘤病因学病理症状
- 甲泼尼龙对脑干出血所致梗阻性脑积水的预防作用
- 2013年
- 目的观察大剂量甲泼尼龙冲击治疗对脑干出血所致梗阻性脑积水的临床疗效和不良反应。方法选择116例脑干出血患者,按出血量多少分为3组:A组33例,出血量<2mL;B组45例,出血量2～5mL;C组38例,出血量>5mL。再将每组患者随机分为治疗组和对照组,对照组给予常规综合治疗,治疗组在对照组治疗基础上应用甲泼尼龙冲击给药方法,比较2组梗阻性脑积水发生率。结果 A组和C组中,治疗组与对照组梗阻性脑积水总发生率差异无统计学意义;B组中,治疗组梗阻性脑积水总发生率为28.0%,明显低于对照组的60.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论甲泼尼龙冲击治疗对脑干出血2～5mL所致梗阻性脑积水有预防效果,针对脑干出血量2～5mL的无激素禁忌患者,主张早期给予甲泼尼龙冲击治疗。
- 王浩胡继良宋伟健刘欣民翟宝进
- 关键词：脑积水
- 颅内动脉瘤患者血清差异表达蛋白质的研究被引量：4
- 2010年
- 目的 采用蛋白质组学方法研究散发性颅内动脉瘤和健康成人外周血清蛋白表达差异.方法 对散发性颅内动脉瘤和健康成人的血清样本进行双向凝胶电泳分离,通过对两种蛋白图谱的比较,确定差异表达的蛋白点 而后对差异点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析和蛋白数据库信息检索 随机选取2种蛋白进行Western blot法验证蛋白质组学实验结果.结果 在颅内动脉瘤和健康成人中鉴定出14种差异表达蛋白,得到了11个肽质量指纹图谱（peptide mass fingerprinting,PMF）,最终7种蛋白质得到确认.结合珠蛋白、C反应蛋白、B因子、淀粉样血清蛋白A和载脂蛋白E前体在动脉瘤组表达上调 载脂蛋白A-Ⅳ前体和间α胰蛋白酶抑制物H4重链前体表达下调.蛋白印迹实验结果与双向电泳结果一致.结论 成功鉴定出7个与颅内动脉瘤相关的蛋白,为进一步阐明颅内动脉瘤形成的病理生理学机制提供了新的思路.
- 翟宝进刘欣民李双英崔刚董俊强常斌鸽薛德友焦德让
- 关键词：颅内动脉瘤蛋白质组学双向凝胶电泳
- 正常人外周血单核细胞基因表达谱的建立及临床意义被引量：1
- 2008年
- 目的:建立正常人外周血单核细胞的基因表达谱,探讨颅内动脉瘤的差异基因,为研究颅内动脉瘤的发病机制及其可能的基因治疗打下基础。方法:分别抽提60例正常人和颅内动脉瘤患者外周血单核细胞的RNA,基因芯片技术检测其外周血中的基因表达情况。结果:在基因芯片所检测的共14112个基因中,有7749个基因在正常人外周血单核细胞中呈阳性表达,表达数量较多的基因分别是:细胞信号和传递蛋白表达类、代谢相关类、离子通道和运输蛋白、结构运动类基因。表达水平位于前3位的基因分别是核糖体蛋白L41(RPL41)、核糖体蛋白S3A(RPS3A)和核糖体蛋白L23A(RPL23A)基因。与正常人外周血阳性基因比较,颅内动脉瘤患者得到85个差异基因,其中KPNA4基因与信号传导、蛋白质转运过程功能有关,基因表达明显上调;SPG3A基因与核苷酸结合功能相关,基因表达明显下调。结论:建立了正常人外周血的基因表达谱,KPNA4基因和SPG3A基因可能与颅内动脉瘤形成和发展有关。
- 朱海霞翟宝进刘欣民崔刚董俊强王俊妨
- 关键词：单核细胞基因表达颅内动脉瘤RNA
- 活细胞荧光成像技术连续观察胶质瘤干细胞向内皮细胞分化过程中多种分子标记物的变化被引量：1
- 2017年
- 目的采用活细胞荧光成像技术动态观察胶质瘤干细胞向内皮细胞的分化过程,并分析细胞表面标记物的变化。方法以胶质瘤干细胞株GSC-1为对象,分别进行免疫荧光标记技术和活细胞荧光成像技术观察其在分化过程中分子标记物的变化趋势。结果 GSC-1置入三维培养基质,细胞随时间增加而增殖,6 h后,细胞突起发生融合,细胞增殖,可清晰地观察到多细胞所形成的圆形、多边形和三角形管道样结构。VEGF诱导下免疫荧光染色观察GSC-1表达CD34随时间增加而增加,6 h时较多GSC-l细胞表达CD34,出现典型的闭合样管腔结构。CD34阳性细胞数间差异存在统计学意义(P<0.05)。活细胞荧光观察追踪单个细胞发现,6 h达到高峰,CD34阴性细胞逐渐出现绿色荧光,提示转变成CD34阳性细胞。结论活细胞荧光成像技术观察结果同传统免疫荧光技术所得到的结果相一致,同时可获得单个细胞从CD34阴性细胞转变为CD34阳性细胞的直接影像证据,可直观、准确地对单个细胞进行追踪。
- 魏强国王浩刘欣民
- 关键词：胶质瘤干细胞内皮细胞分化分子标记物
- C-fos启动子在人胶质瘤细胞株及正常组织的转录活性研究被引量：1
- 2015年
- 目的观察C-fos、TERT、Survivin、E2F1、Cox2及CMV启动子在人胶质瘤细胞株U87、U373、U251中的转录活性以及C-fos、CMV启动子在正常组织中的转录活性。方法设计引物并应用PCR法从人胶质瘤基因组中克隆C-fos、TERT、Survivin、E2F1、Cox2启动子。将上述5种启动子以及CMV启动子序列插入到pGL4-Basic报告载体中。将构建的pGL4-Cfos、pGL4．TERT、pGL4-Survivin、pGL4．E2F1、pGL4．Cox2、pGL4-CMV重组质粒和内参质粒pRL—TK瞬时共转染胶质瘤细胞U87、U373、U251，双荧光素酶实验检测各启动子的转录活性；C57BL／6J小鼠10只，分为C-fos组、CMV组，每组5只，分别由尾静脉注射600μL含40μg pGL4-Cfos-luc、pGL4．CMV-luc质粒的生理盐水，24h后检测小鼠心、肝、脾、肺组织中荧光素酶的活性。结果各启动子基因序列经测序确认正确；TERT、Survivin、Cox2、E2F1、C-los启动子的转录活性（相对于CMV启动子1在U87细胞中依次为0．03％、0.33％、0．38％、0．24％、3．73％；在U373细胞中依次为0．95％、65．34％、0．32％、9．07％、70．83％，在U251细胞中依次为0．41％、15．57％、0．15％、0．51％、17．30％；CMV组小鼠心、肝、脾、肺组织荧光素酶活性依次为（93．40±75．06）RLU／mg蛋白、（12．33±6．49）RLU／mg蛋白、（22．60±7．50）RLU／mg蛋白、（950．47±538．74）RLU／mg蛋白；C—los组小鼠心、肝、脾、肺组织荧光素酶活性依次为（2．13±1．92）RLU／mg蛋白、（1．11±0．95）RLU／mg蛋白、（2．07±1．51）RLU／mg蛋白、（29．24±25．89）RLU／mg蛋白，与CMV组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论C-fos启动子在人胶质瘤细胞株中的转录活性高于TERT、Survivin、E2F1、Cox2，在正常组织中的转录活性低于CMV启动子。
- 王浩潘建青胡继良冯诣宋伟健罗杰刘欣民魏强国洪全球翟宝进
- 关键词：神经胶质瘤转录活性靶向治疗
- 基因表达谱芯片技术筛选颅内动脉瘤相关基因的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的寻找动脉瘤患者外周血中基因表达谱特征并探讨其意义。方法对120例研究者（包括60例患者和60例对照）的外周血样本进行全基因表达谱分析。提取颅内动脉瘤患者的总RNA，然后应用BiostarH-140s基因芯片技术和GenePixPro3．0软件分析颅内动脉瘤患者和正常对照组的基因表达谱，发现差异表达基因，应用RT—PCR方法对差异基因进行验证。结果颅内动脉瘤患者与正常对照组比较，发现85个差异表达基因，其中表达下调的基因31个，表达上调的基因54个。RT—PCR结果证实了基因芯片技术的准确性和可靠性。结论基于患者外周血基因表达谱分析所得的差异基因，有望成为颅内动脉瘤早期诊断最有潜力的标记物。
- 翟宝进刘欣民王俊妨崔刚董俊强常斌鸽薛得友焦德让
- 关键词：颅内动脉瘤白细胞基因表达谱寡核苷酸序列分析
