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方永明: 作品数：24 被引量：86H指数：6; 供职机构：浙江大学医学院附属第二医院更多>>; 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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大肠癌高危人群中NAT2多态性初步研究: 在1977年—1980年间,从海宁市≥30岁的人群中筛检到大肠癌高危人群,从该人群中随机抽取52例腺瘤复发二次以上者为复发组,另抽取52例未复发者为对照,研究该两人群 NAT2多态酶分布情况。研究结果表明,复发组与未复发...; 郑树曹江刘希永方永明董琦蔡善荣张行; 关键词：大肠癌 NAT2 多态性; 文献传递

人Maspin cDNA克隆在真核细胞中表达及意义被引量：1: 2005年; [目的]构建表达人Maspin的基因工程细胞。[方法]提取健康人乳腺组织的总RNA,扩增出编码Maspin的全长cDNA,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Maspin,然后转染到正常的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中,应用RT-PCR和Westernblot方法分别验证Maspin基因在CHOI/pcDNA3.1(+)/Maspin细胞中RNA水平和蛋白水平的表达,同时检测细胞培养上清中Maspin的蛋白分泌。[结果]经酶切证实,得到正向插入的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Maspin。Westernblot分析证明Maspin成功转染到CHO中并表达,且分泌到细胞外。[结论]人Maspin基因可在靶细胞表达,并能分泌到细胞外,为进一步了解Maspin的功能和转Maspin基因细胞成为治疗恶性肿瘤的效应细胞奠定了一定的基础。; 潘月龙郑树方永明蒋文智; 关键词：MASPIN 基因克隆基因工程细胞

人Maspin cDNA克隆与真核表达质粒的构建: 导致绝大部分恶性肿瘤病人不良预后的主要因素是复发和广泛远处转移,尤其是主要器官的转移.因此,要提高恶性肿瘤的治疗效果,就必须控制远处转移,这也是目前研究的重点之一.Maspin是Zhou等于1994年通过正常乳腺上皮与乳...; 潘月龙郑树方永明孝作祥蒋文智丁凌赵怀; 关键词：肿瘤复发肿瘤转移 CDNA克隆真核表达; 文献传递

pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP真核表达质粒构建被引量：5: 2011年; 目的:构建pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP与pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP真核表达质粒,并观察pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒在MCF-7和Bcap-37细胞中的表达。方法:①采用RT-PCR技术扩增CYP19 cDNA,插入pcDNA3.1(+)载体中,构建pcDNA3.1(+)-CYP19表达质粒;酶切pcDNA3.1(+)-CYP19(304bp BamHⅠ)-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19质粒,构建pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP表达质粒;②以pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒为模板,采用定点突变技术,构建pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP表达质粒;③pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒通过脂质体介导转染MCF-7和Bcap-37细胞,荧光显微镜观察其在细胞中的表达。结果:①酶切鉴定及测序验证pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP构建成功;②测序验证pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP构建成功;③在经转染的MCF-7和Bcap-37细胞中观察到较强的绿色荧光。结论:pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP真核表达质粒已成功构建,并证实pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒能在MCF-7和Bcap-37细胞中表达,为进一步研究CYP19基因单核苷酸多态性的确切功能奠定基础。; 邵喜英陈占红曹江方永明王晓稼; 关键词：质粒 CYP19基因真核表达质粒 GFP

Shp-2过度表达与人白血病细胞恶性增殖相关性研究: 2005年; 目的研究Shp-2酪氨酸蛋白磷酸酶对白血病细胞恶性增殖的影响。方法应用W estern b lot和RT-PCR技术分析白血病细胞和正常造血细胞样本Shp-2蛋白和mRNA表达水平;采用反义寡核苷酸技术和流式细胞术分析下调Shp-2表达对白血病细胞增殖与凋亡的影响。结果与正常造血细胞相比,磷酸化Shp-2蛋白在白血病细胞中呈过度表达状态,Shp-2与-βactin比值在白血病组(n=36)、正常骨髓造血细胞组(n=8)及正常外周血细胞组(n=12)分别为1.23±0.74、0.163±0.088和0.034±0.045。同样,Shp-2 mRNA在白血病细胞样本中呈高表达状态,其与-βactin比值在白血病组(n=26)和正常造血细胞组(n=25)分别为1.242±1.057和0.046±0.076。用Shp-2特异性反义寡核苷酸阻断Shp-2表达后,白血病细胞出现明显凋亡和生长抑制。结论Shp-2在人白血病细胞中呈过度表达状态,其表达水平可能与白血病细胞增殖程度密切相关。; 虞瑛姿方永明粱云董庆华吕庆华赵小英徐荣臻; 关键词：白血病酪氨酸蛋白磷酸酶

p210 bcr／abl蛋白磷酸化和Hsp90表达在小檗胺诱导K562细胞凋亡中的作用: 目的观察小檗胺对白血病细胞系K562细胞p210 bcr／abl癌性融合蛋白磷酸化及其分子伴侣 Hsp90等影响,以探讨小檗胺诱导白血病细胞凋亡分子机制。材料与实验方法培养表达内源性 p210bcr／abl蛋白的Ph+人...; 孙建荣张晓红何智文古莹虞瑛姿方永明吕庆华董庆华徐荣臻; 文献传递

表达人乳头瘤病毒6b和11型E6/E7基因的小鼠肿瘤细胞株的建立被引量：6: 2004年; 目的构建含有人乳头瘤病毒(HPV)6b和11型E6/E7基因的表达质粒和建立这些基因的转染细胞株。方法分别将HPV6bE6、HPV6bE7、HPV11E6和HPV11E7克隆于含绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.1,经脂质体介导转染B16细胞,以G418筛选阳性克隆,荧光显微镜观察,RT-PCR鉴定mRNA转录。结果通过酶切鉴定和基因测序证实,构建质粒中目的基因片段序列完全正确。转染后荧光显微镜下可观测到B16细胞发出绿色荧光。以G418筛选的抗性细胞克隆提取RNA并经RT-PCR扩增出与目的基因大小一致的基因片段。结论建立的小鼠肿瘤细胞B16表达HPV6bE6、HPV6bE7、HPV11E6和HPV11E7基因。提示转染的细胞株可移植于小鼠,利于体内研究这些基因的生物学作用和免疫学机制。; 赵可佳程浩陈民利丁志山耿礼义方永明; 关键词：人乳头瘤病毒11型 E6基因 E7基因小鼠基因转染

一个新的人大肠癌相关丝氨酸蛋白酶SNC19的研究(英文): 2001年; 目的　研究一个通过减式杂交方法获得的新的人大肠癌相关基因SNC19的结构和功能。方法　对SNC19的cDNA进行了核苷酸序列测定 ,并通过 5’ RACE及联网分析得到了全长cDNA序列 ,并对其编码的蛋白进行了分析及功能预测。利用Northern杂交方法检测了SNC19在各种人正常组织及多种肿瘤细胞系中的表达 ;采用InSitu Max荧光原位杂交方法结合荧光R带技术对SNC19在人染色体上的定位做了研究。结果　对包含全长开放阅读框 (ORF)的 315 2bp的SNC19cDNA序列进行的分析以及预测的编码蛋白序列显示 ,SNC19编码一个与小鼠丝氨酸蛋白酶epithin有极高的同源性的蛋白 ,该基因在正常人肾脏、胰腺、前列腺、小肠、结肠组织中高表达 ,在胎盘、肺、肝脏、脾脏、胸腺、睾丸组织及外周血中中度表达 ,而在心脏、脑、骨骼肌及卵巢组织中低表达。该基因在肠癌细胞SW4 80、SW6 2 0、SW1116、Colo2 0 5、乳癌细胞Bcap37及胃癌细胞MKN2 8、SGC790 1中高表达 ,在宫颈癌细胞HeLa S3、肺癌细胞PAA、口腔上皮癌细胞KB及淋巴瘤细胞Raji中中度表达 ,而在舌鳞癌细胞Tca8113、白血病细胞HL 6 0、K5 6 2、MOLT 4、肺癌细胞A5 4 9和黑色素瘤细胞G36 1中低表达。SNC19定位于人染色体 11q2 4 2 5。结论　SNC19编码一个由 85 5个氨基酸残基组成的新?; 曹江郑树郑雷蔡心涵张颜明耿礼义方永明; 关键词：肿瘤丝氨酸蛋白酶基因表达

胞嘧啶脱氨酶APOBEC3G可能通过G→A突变抑制乙型肝炎病毒的复制被引量：3: 2007年; 目的研究胞嘧啶脱氨酶APOBEC3G（A3G）对HBV复制的影响及作用机制。方法利用脂质体介导A3G和HBV的真核表达质粒瞬时共转染人肝癌细胞株HepG2，以空载体pcDNA3．1与HBV真核表达质粒共转染为对照，同时转染含增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的质粒载体以判定转染效率。共转染两天后用荧光定量PCR方法定量细胞内核壳体（cofe）相关HBV DNA水平，用Western blot检测细胞内A3G和HBcAg的表达，并对细胞内cofe相关HBVDNAX基因进行PCR扩增、T．A克隆和测序，分析X基因中的碱基突变。结果经EGFP判定的转染效率平均为29％。共转染0．5PgA3G和0．5μg HBV的HepG2细胞内core相关HBVDNA量平均下降为对照的8．9％，共转染2μgA3G和0．5μgHBV的平均下降为对照的0．6％。共转染A3G和HBV表达质粒后，HepG2细胞内HBV的X基因中发生G→A突变的数目明显增多，33个克隆中有9个克隆检测到了16-37个G→A突变，突变总数达254个，而对照的33个克隆中仅有2个克隆各检测到2个G→A突变。进一步的分析发现，共转染A3G后发生的G→A突变大多集中于几个热点区域，突变靶点常在GG二核苷酸中的第一个G上。结论胞嘧啶脱氨酶APOBEC3G可能通过诱导HBVDNA的X基因发生G→A超突变，抑制HBV在人肝癌细胞HepG2中的复制。; 张伟张旭照方永明何智文应松成徐荣臻于晓方; 关键词：APOBEC3G 胞嘧啶脱氨酶乙型肝炎病毒突变

大肠癌相关免疫球蛋白新基因SNC73结构与表达研究被引量：13: 2001年; 目的　研究由减式杂交方法获得的人大肠癌相关基因SNC73的结构和功能。方法　对SNC73的cDNA进行了核苷酸序列测定 ,分析得到全长序列 ,并对其编码的蛋白进行了分析及预测 ;采用Insitu Max荧光原位杂交方法结合荧光R带技术对SNC73在人染色体上的定位作了研究 ;利用Northern杂交、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测了SNC73在多种肿瘤细胞系中的表达 ,及在大肠癌组织与正常粘膜中的表达情况 ;应用原位杂交 /原位PCR技术检测SNC73mRNA在肠上皮中的表达情况。结果　对SNC73序列及开放阅读框 (ORF)进行分析 ,发现其与免疫球蛋白IgA高度同源 ,为一免疫球蛋白样基因。该基因定位于人染色体 14q32。SNC73在大肠癌组织与正常肠粘膜的表达有差异 (P <0 .0 5 )。SNC73在肠上皮表达阳性。结论　SNC73在大肠癌中低表达 ,可能为一新的肿瘤标记物 ,并提示上皮细胞、非淋巴细胞存在IgA类的蛋白。; 郑树曹江耿礼义彭佳萍方永明董琦张苏展; 关键词：大肠癌基因表达基因结构

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