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旋毛虫抗C57BL/6小鼠体内Hepa1-6肝癌细胞作用的研究被引量：14: 2009年; 目的观察旋毛虫对C57BL/6小鼠体内Hepa1-6肝癌细胞生长的抑制作用。方法将C57BL/6小鼠随机分成8组,每组10只。第1和5、2和6、3和7组分别感染未处理旋毛虫、60Co处理和紫外线处理旋毛虫,4和8组为不感染旋毛虫对照组,1～4组和5～8组分别于接种旋毛虫前7 d和接种后11 d接种Hepa1-6肝癌细胞。荷瘤后25 d后处死小鼠,测量肿瘤体积、重量及脾脏CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞数量。结果未处理旋毛虫组、60Co处理组和紫外线处理组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于对照组(P<0.05);脾脏CD3+、CD4+百分率和CD4+/CD8+、CD4+/CD3+的比值显著高于对照组(P<0.01或P<0.05)。结论未处理的旋毛虫、经60Co和紫外线处理的旋毛虫对C57BL/6小鼠体的Hepa1-6肝癌细胞的生长均有抑制作用,未处理旋毛虫的抑瘤效果最好。; 张媛媛宫鹏涛张西臣李建华杨举张国才; 关键词：旋毛虫 C57BL/6小鼠抑瘤效果

EGF与Gastrin联合应用对糖尿病大鼠胰岛β细胞再生的影响被引量：2: 2014年; 表皮生长因子（EGF）是肽类生长因子，许多研究证明，EGF 参与体外诱导干细胞向胰岛样细胞分化。已有文献证实 Gastrin 是一种介导胰岛新生的生长因子［1］，观察转导胰岛素启动子调控 Gastrin 基因的小鼠，虽然没有观察到实验组小鼠胰岛细胞数量的变化，但表达 TGF、Gastrin 的胰岛细胞数增多。在大鼠的胰腺导管结扎模型中发现 Gastrin 可促进胰岛β细胞再生，推测可能在该模型中，外源性的 Gastrin 可能是促进胰岛β细胞再生必要因子［2］。本文通过联合应用 Gastrin、EGF，观察 Gastrin、EGF 对糖尿病大鼠胰岛β细胞增殖作用影响。; 孟召祥孙中华张媛媛刘静秋杨丽高静倪劲松; 关键词：GASTRIN 糖尿病大鼠 EGF 肽类生长因子表皮生长因子

短裸甲藻毒素单克隆抗体的制备及其鉴定被引量：1: 2009年; 采用混合酸酐法将短裸甲藻毒素(brevetoxins,BTX)分别与卵清蛋白(OVA)和牛血清蛋白(BSA)偶联制备人工抗原。以BTX-BSA作为免疫抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合-ELISA筛选抗短裸甲藻毒素的单克隆抗体,并对其特异性和灵敏性进行了鉴定。结果获得了1株可分泌短裸甲藻毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株3B4,该株杂交瘤细胞腹水抗体效价达10-5,与其他类似物没有交叉反应。该抗体为建立短裸甲藻毒素免疫学检测方法奠定了基础。; 张俊辉周玉张媛媛李兆辉王心蕊刘静秋; 关键词：单克隆抗体

我国东海沿海鱼类异尖科线虫RPA检测方法的建立被引量：1: 2023年; 异尖科线虫病(Anisakiasis)是一种重要的食源性人兽共患线虫病,主要因食用生的或未煮熟的含异尖科线虫Ⅲ期活的幼虫的海鱼而引起。本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA)建立了异尖科线虫RPA的检测方法,首先对东海沿海舟山、温州、宁波、平潭、嘉兴市的九种鱼体内获得的线虫进行分离鉴定,获得了派氏异尖线虫、简单异尖线虫、典型异尖线虫、宫脂线虫和对盲囊线虫,然后根据获得的五种线虫的ITS区设计特异性引物。结果显示:本研究建立的RPA方法可特异性扩增出异尖科线虫340 bp左右的目的基因片段,可特异性检测出异尖科线虫,而对阔节裂头绦虫、华支睾吸虫、东方次睾吸虫、棘颚口线虫检测结果为阴性;优化后在35℃、25 min即可完成检测,其灵敏度可达1 pg/μL,人工污染实验结果显示呈阳性。此方法操作简单、便捷,对现场快速检测具有重要的意义。; 张春玲张媛媛邱阳元郝朔白雪刘明远刘晓雷; 关键词：RPA ITS 特异性灵敏性

梅花鹿朊蛋白核心片段的基因克隆与高效表达被引量：1: 2012年; 本试验根据梅花鹿朊蛋白基因序列设计引物,利用PCR的方法从梅花鹿基因组DNA中扩增朊病毒蛋白酶抵抗区域PrPres,将该片段分别与表达载体pET-Trx和pET-His连接,构建重组表达载体pET-Trx-PrPres和pET-His-PrPres。分别将两个重组表达载体转入E.coli BL21(DE3)plys宿主菌中,37℃诱导4h,经SDS-PAGE分析,Trx-PrPres和His-PrPres表达量分别为38.2%和30.1%。; 刘东卢士英李岩松李兆辉王光明张媛媛周玉宋杰柳增善任洪林; 关键词：梅花鹿朊蛋白朊病毒原核表达

贾第虫硫氧还蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞炎性细胞因子分泌的影响被引量：1: 2022年; 目的研究贾第虫硫氧还蛋白(Giardia duodenalis thioredoxin,GdTRX)对小鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMs)炎性细胞因子分泌的影响。方法通过原核表达获得重组贾第虫硫氧还蛋白(rGdTRX),并进行纯化。将纯化的rGdTRX与PMs共孵育,CCK-8法检测rGdTRX的安全浓度;ELISA法检测炎性细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α分泌水平;Western blot法检测PMs丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的激活情况。结果表达的r GdTRX相对分子质量为20000;50μg/mL(安全浓度)rGdTRX与PMs共孵育能显著促进IL-6、IL-12和TNF-α分泌,并激活p38MAPK和ERK信号通路;p38MAPK/ERK抑制剂预处理后,rGdTRX诱导的IL-6、IL-12和TNF-α的分泌量显著降低。结论rGdTRX通过激活PMs的MAPK信号通路促进炎性细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α分泌,参与贾第虫激活宿主先天免疫的进程。; 梁敏赵盼盼王晓岑李新张楠张西臣李建华宫鹏涛张媛媛; 关键词：丝裂原活化蛋白激酶细胞因子

十二指肠贾第虫端粒酶逆转录酶RNA结合域TRBD互作蛋白的筛选及验证被引量：1: 2022年; 目的利用酵母双杂交系统筛选十二指肠贾第虫端粒酶逆转录酶RNA结合域TRBD的互作蛋白,并验证其是否存在互作关系。方法通过分子克隆技术构建诱饵质粒pGBKT7-TRBD,应用酵母双杂交技术将诱饵质粒与贾第虫酵母双杂交cDNA质粒文库共转化至Y2H Gold酵母感受态细胞中,通过不同营养缺陷型培养基筛选杂交成功的菌落。对筛选出的阳性克隆进行回返试验,并通过双分子荧光互补试验及GST-Pull down试验进一步验证二者存在的互作关系。结果诱饵质粒pGBKT7-TRBD经双酶切和测序鉴定证明构建正确。该诱饵质粒在贾第虫酵母双杂交cDNA质粒文库中初步筛选得到5个阳性克隆,即histone acetyltransferase type B subunit 2、bZIP family protein、WD-repeat protein、NHL repeat-containing protein、heat shock protein 90(Hsp90),经回返验证、双分子荧光互补和GSTPull down试验确定阳性基因Hsp90与TRBD存在互作关系。结论利用酵母双杂交技术成功筛选出与十二指肠贾第虫端粒酶TRBD存在相互作用的Hsp90,为进一步探索贾第虫端粒酶调控机制奠定了基础。; 明珠张西臣赵春艳张楠程淑琴王晓岑李新李建华宫鹏涛张媛媛; 关键词：端粒酶逆转录酶酵母双杂交蛋白相互作用

堆型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的制备及其免疫效果评价被引量：3: 2022年; 目的制备堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)重组亚单位疫苗,并评价其免疫效果。方法将堆型艾美耳球虫的保护性抗原基因cSZ1克隆至酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-cSZ1,转化毕赤酵母菌株GS115,构建重组菌GS115-pPICZαA-cSZ1,经甲醇诱导表达重组蛋白cSZ1。按20、40、60μg/只(低、中、高剂量)经雏鸡肌肉注射重组蛋白,7 d后进行加强免疫,加强免疫7 d后经口感染E.acervulina孢子化卵囊,剂量为1×10^(4)个/只,同时设阳性对照组(未免疫仅攻虫)和阴性对照组(未免疫未攻虫)。攻虫后7 d检测雏鸡的抗球虫指数(anticoccidial index,ACI);初次免疫后7 d及加强免疫后7 d,经雏鸡心脏采血,分离血清,间接ELISA法检测血清抗体水平;攻虫后7 d,无菌取雏鸡脾脏,CCK-8法检测T淋巴细胞增殖情况。结果经双酶切及测序鉴定,证明重组表达质粒构建正确;经菌落PCR及测序鉴定,证明重组菌构建正确。重组蛋白cSZ1的相对分子质量约19000,可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合。低、中、高剂量免疫组的ACI分别为171.25、176.42、174.33;与阴性对照组比较,低、中、高剂量免疫组雏鸡于初次免疫后7 d及加强免疫后7 d,血清抗体水平明显升高(P<0.01),攻虫后7 d,T淋巴细胞增殖率显著升高(P<0.01)。结论制备的堆型艾美耳球虫重组亚单位疫苗对雏鸡有较好的免疫效果。; 毕天奇肇英池马丹程淑琴王晓岑李新李建华张西臣宫鹏涛张楠张媛媛; 关键词：堆型艾美耳球虫毕赤酵母重组蛋白免疫保护

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张媛媛

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