王海涛
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 供职机构：塔里木大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划新疆生产建设兵团博士基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 皮肤创伤愈合过程中短暂扩增细胞增生及皮肤干细胞迁移被引量：8
- 2016年
- 目的研究皮肤疤痕组织形成过程中皮肤干细胞分布、增殖分化迁移特征,初步探讨这些特征与皮肤创伤修复的关系。方法利用眼科显微外科剪对2日龄昆明小鼠背部皮肤进行人工统一造创,定期获取皮肤创面样品,常规病理染色观察创面愈合形态;应用免疫荧光染色法,以细胞转录因子Sox2和角蛋白14抗体分别检测皮肤干细胞的分布及干细胞增殖分化时所形成的短暂扩增细胞,并结合细胞增殖EdU荧光染色初步分析皮肤干细胞的迁移方向。结果创面愈合过程中表皮层中表达Sox2的阳性细胞逐渐连贯,并且发现真皮乳头层中Sox2和角蛋白14同时大量表达,可见致密细胞网和向下凸起的新生毛囊样结构形成。同时,创面愈合初期细胞迁移主要由创面底部开始,向上迁移并填充创面。结论创面愈合过程中,创面底部皮肤干细胞首先开始大量分裂增殖,并向创面迁移,创面上部皮肤干细胞分裂增殖迟于创面底部;迁移的皮肤干细胞以不对称分裂的形式增殖形成大量短暂扩增细胞,并在增厚的疤痕乳头层部位形成毛囊样结构填充皮肤疤痕。
- 王海涛朱梓赫李树伟郭景旭王洪阳
- 关键词：皮肤创面SOX2迁移
- 胎鼠皮肤无瘢痕愈合培养液优化及皮肤细胞增殖活跃区研究被引量：2
- 2017年
- 目的 优化昆明远交系（KM）胎鼠皮肤无瘢痕愈合模型的培养液，定位并分析皮肤创伤愈合中细胞增殖活跃区。方法 取60只胎龄15 d小鼠背部皮片180块，用无菌微创器在皮片上统一造创，随机等分到6组培养液中培养3 d，包括高糖改良Eagle培养基（DMEM）组、DMEM ＋ 5%胎牛血清（FBS）组、DMEM ＋ 10% FBS组、低糖Eagle培养基（MEM）组、MEM ＋ 5% FBS组、MEM＋ 10% FBS组。HE染色后观察各组皮肤创口愈合情况，筛选最适培养条件。在最适培养条件下采用EdU细胞标记物定位皮肤创口愈合处细胞增殖活跃区，并用免疫荧光检测其中AP？1蛋白表达。结果 胎鼠微创皮片培养3 d后，DMEM组、DMEM ＋ 5% FBS组、DMEM ＋ 10% FBS组、MEM组、MEM ＋ 5% FBS组、MEM ＋ 10% FBS组皮片愈合率分别为0、3.33%、6.67%、3.33%、46.67%、26.67%，6组皮片愈合率差异有统计学意义（χ^2 = 41.39，P 〈 0.05）。两两比较显示，MEM ＋ 5% FBS组皮片愈合率显著高于除MEM ＋ 10% FBS组外的其他4组（均P 〈 0.01）。logistic回归分析显示，MEM（OR = 11.717，95% CI 3.274 ~ 41.934，P 〈 0.001）及FBS浓度（5% FBS：OR = 24.625，95% CI 3.027 ~ 200.299，P = 0.003；10% FBS：OR = 13.449，95% CI 1.618 ~ 111.813，P = 0.016）均是促进胎鼠微创皮片愈合的因素。在MEM ＋ 5% FBS培养条件下，真皮和表皮愈合形态最好，且创面处表皮无增厚现象。EdU细胞增殖标记分析显示，胎鼠皮肤的真皮乳头层和表皮基底层是创面愈合过程中两个主要的细胞增殖活跃区，同时AP？1蛋白在这两个细胞增殖活跃区也有大量表达。结论 MEM ＋ 5% FBS为体外培养胎鼠皮肤创伤愈合的最适培养液。胎鼠皮肤的真皮乳头层和表皮基底层是皮肤创伤愈合中两个主要的细胞增殖活跃区，在创面愈合过程中起到重要作用。
- 王海涛姜仁军李树伟
- 关键词：伤口愈合瘢痕转录因子AP-1无瘢痕愈合胎鼠
- EdU体外标记毛囊外根鞘干细胞的实验研究被引量：2
- 2017年
- 目的:探寻一种简单有效的追踪定位毛囊干细胞的分裂增殖标记的方法,为后期毛囊干细胞增殖分化迁移机制的研究打下基础。方法:体外无菌条件下获取昆明乳鼠触须毛囊外根鞘,以5%FCS+MEM作为基础培养液,添加4种不同浓度EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)细胞标记物,进行毛囊外根鞘再生培养,冰冻切片,H.E染色,使用Key Fluor488对EdU所标记的再生细胞进行检测。结果:H.E染色和EdU标记染色结果发现EdU细胞标记物浓度越高,毛囊外根鞘再生形态越差,同时当EdU浓度为20μmol/L时,毛囊外根鞘增殖细胞标记效果是最好的。结论:EdU细胞标记物对毛囊外根鞘中的干细胞增殖活性具有一定的毒副作用,可能会影响细胞的正常生理代谢功能,浓度为20μmol/L EdU可以有效的标记毛囊干细胞增殖,并对毛囊再生结构影响较小。
- 王海涛朱梓赫王丽王泽鹏李树伟
- 关键词：毛囊干细胞U
- C57BL/6J近交系脱毛小鼠与正常小鼠毛囊形态学观察及AP-1表达的差异
- 2017年
- 为了观察并分析C57近交系脱毛小鼠与正常小鼠毛囊形态学的差异,以及对背部皮肤毛囊进行AP-1表达的鉴定,并初步分析AP-1在皮肤毛囊表达的意义,试验通过外科解剖法获取C57近交系脱毛小鼠与正常小鼠背部皮肤,制作石蜡切片并进行Sacpic染色,观察C57近交系脱毛小鼠与正常小鼠毛囊形态学的差异,采用冰冻切片免疫荧光染色鉴定AP-1在皮肤毛囊中的表达。结果表明:C57近交系脱毛小鼠毛囊结构不完整,毛囊结构出现中空,毛囊与皮肤组织之间连接松散;激活蛋白AP-1在正常皮肤毛囊中的表达强于脱毛小鼠皮肤中的毛囊。说明C57近交系脱毛小鼠皮肤毛囊结构被破坏,毛囊稀疏,且毛囊细胞中激活蛋白AP-1的表达弱于正常皮肤毛囊。
- 王丽王海涛李树伟
- 关键词：C57BL/6J小鼠脱毛毛囊
- 小鼠触须毛囊外根鞘再生的体外培养液优化及α-SMA的表达鉴定被引量：2
- 2016年
- 【目的】为建立小鼠毛囊体外培养模型,筛选适合小鼠触须毛囊外根鞘离体培养的培养液,并进行α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)表达的免疫荧光鉴定。【方法】选择出生5 d内的乳鼠断颈法处死,利用显微解剖技术,分离触须毛囊外根鞘。并分别培养于无血清、含5%FCS、10%FCS的DMEM、MEM共计6种不同培养液中,在37℃,5%CO2培养箱中培养4 d后,制作冰冻切片并进行H.E.染色,在显微镜下观察乳鼠触须毛囊外根鞘的再生情况,筛选培养液。在最适培养液中培养乳鼠触须毛囊外根鞘,利用α-SMA抗体进行乳鼠触须毛囊外根鞘再生部位α-SMA表达的荧光鉴定。【结果】观察到小鼠触须毛囊外根鞘中段再生的初期结构特征,并且5%FCS MEM培养液是最适合小鼠触须毛囊外根鞘的体外培养液,免疫荧光检测发现α-SMA在毛囊外根鞘再生部位有表达。【结论】5%FCS MEM培养液是比较适合小鼠触须毛囊外根鞘的体外培养液,α-SMA的表达可以作为毛囊再生的检测指标之一。
- 唐瑶邓梅成王海涛付灵慧李树伟
- 关键词：免疫荧光
- 新疆南部和田羊、卡拉库尔羊、多浪羊MSTN基因的真核表达
- 2016年
- 旨在构建新疆南部4个地方品种(品系)绵羊,即平原型和田羊(HP)、山区型和田羊(HS)、卡拉库尔羊(KL)和多浪羊(DL)的肌生成抑制素(myostatin,MSTN)基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合表达质粒并在真核细胞中表达。从4种绵羊骨骼肌中提取总RNA,逆转录获得c DNA,PCR扩增MSTN后与p MD18-T载体连接构建重组质粒并测序分析,然后将MSTN(HP、HS、DL和KL)基因插入到融合表达载体p EGFP-N1中,构建真核融合表达重组质粒p EGFP-N1-MSTN,在细胞铺满80%时用脂质体法转染到CHO中,观察EGFP与MSTN蛋白在CHO细胞内融合表达的绿色荧光。结果显示,平原型和田羊、山区型和田羊、卡拉库尔羊和多浪羊MSTN的ORF序列都是1 125 bp(不含终止密码子),编码375个氨基酸;与Gen Bank中MSTN序列比较,与田羊(HS、HP)没有差异;卡拉库尔羊有2个碱基差异,造成2个氨基酸变异;多浪羊有6个碱基的差异,造成4个氨基酸变异。成功构建EFGP和MSTN共表达重组质粒并在真核细胞CHO中得以表达。
- 王海涛金波李树伟
- 关键词：和田羊多浪羊肌生成抑制素CHO细胞绿色荧光蛋白
