刘亚坤
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：新乡医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细胞自噬在骨形成蛋白4促大鼠H9C2心肌细胞肥大中的作用及机制被引量：3
- 2016年
- 目的骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)可诱导大鼠H9C2心肌细胞肥大,为进一步寻求其调控机制,文中探讨细胞自噬在心肌肥大中的作用及其与细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulating kinase,ERK1/2)的相互关系。方法将H9C2心肌细胞随机分为4组:对照组、BMP4组、BMP4+ERK1/2信号通路抑制剂(PD98059)组、BMP4+自噬抑制剂(3MA)组,PD98059与3MA终浓度分别为50μmol/L与5 mmol/L,阻断30 min后加入浓度为50μg/L的BMP4。各组继续培养30 min后提取总蛋白分别检测微管相关蛋白1轻链3(tiny tubes related proteins 1 light chain 3,LC3)与pERK1/2的表达;48h后观察细胞表面积、平均蛋白含量、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的蛋白表达水平。在倒置显微镜下观察细胞的形态,用Image J软件测量细胞表面积,BCA法测细胞总蛋白含量、Western blot检测LC3、ERK1/2、p-ERK1/2及α-SMA的蛋白表达。结果 30 min后,与对照组相比,BMP4组LC3、p-ERK1/2蛋白表达均显著增强[(1.54±0.05)vs(1.95±0.11),(0.94±0.04)vs(1.33±0.06),P<0.01],BMP4+3MA组及BMP4+PD98059组均无明显变化(P>0.05);与BMP4组相比,BMP4+PD98059组、BMP4+3MA组LC3表达与p-ERK1/2均显著降低(P<0.01);而BMP4+PD98059组与BMP4+3MA组比较表达均无明显变化(P>0.05)。48 h后,与对照组相比,BMP4组细胞表面积、平均蛋白含量、α-SMA的蛋白表达水平均显著增加[(644.1±15.01)μm2vs(745.6±14.43)μm2,(240.0±7.26)pg/cell vs(347.1±5.4)pg/cell,(1.22±0.06 vs 1.99±0.03),P<0.01];与BMP4组相比,BMP4+PD98059组、BMP4+3MA组细胞面积、平均蛋白含量、α-SMA的蛋白表达水平均显著减少(P<0.01),而BMP4+PD98059组与BMP4+3MA组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论细胞自噬可能通过ERK1/2信号通路参与了BMP4促大鼠H9C2心肌细胞肥大,阻断细胞自噬或ERK1/2信号通路的激活,可能对心肌肥大有治疗作用。
- 陶业珍李建华刘亚坤王佩佩袁宇
- 关键词：细胞自噬骨形成蛋白4心肌细胞肥大
- 骨形成蛋白4诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大的作用机制被引量：1
- 2018年
- 目的探讨骨形成蛋白4(BMP4)诱导大鼠H9c2心肌细胞肥大的作用机制。方法培养大鼠心肌细胞株H9c2,使细胞同步化。实验分2部分,第1部分取同步化的心肌细胞,加50μg·L-1BMP4 60μL进行干预,分别在干预后0、1、4、8、12、24 h检测磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)蛋白的表达;第2部分将同步化的心肌细胞随机分为对照组、BMP4组、BMP4+LY294002组及BMP4+3MA组。对照组细胞应用体积分数1%胎牛血清培养基培养;BMP4组细胞应用含50μg·L-1BMP4的体积分数1%胎牛血清培养基培养;BMP4+LY294002组细胞先应用25μmol·L-1的LY294002预处理120 min,再以含50μg·L-1BMP4的体积分数1%胎牛血清培养基培养;BMP4+3MA组细胞先应用10 mmol·L-1的自噬抑制剂3MA预处理120 min,再以含50μg·L-1BMP4的体积分数1%胎牛血清培养基培养。各组细胞给予BMP4 48 h后采用Image J软件测量细胞表面积。二喹啉甲酸法检测各组心肌细胞内蛋白含量。采用Western blot检测各组细胞给予BMP4 1 h后磷酸化磷脂酰肌醇3(P-PI3K)、P-Akt及自噬微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的表达,给予BMP4 48 h后检测脑钠肽(BNP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果 BMP4作用心肌细胞0、1、4、8、12、24 h后P-Akt蛋白相对表达量分别为0.56±0.02、0.92±0.12、0.42±0.10、0.63±0.11、0.64±0.23、0.29±0.08,BMP4作用大鼠心肌细胞1 h后P-Akt蛋白相对表达量均高于其他时间点(P<0.05)。BMP4组大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量高于对照组(P<0.01);BMP4+LY294002组与对照组大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+3MA组大鼠心肌细胞表面积大于对照组(P<0.01),BMP4+3MA组与对照组大鼠心肌细胞总蛋白含量比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP4+LY294002、BMP4+3MA组H9c2大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量均低于BMP4组(P<0.05);BMP4+LY294002组与BMP4+3MA组大鼠心肌细胞表面积及总蛋白含量比较差异无统计学意义(P>
- 刘亚坤吕风华司澳洋王卓吴林
- 关键词：骨形成蛋白4心肌肥大自噬
