唐璐
- 作品数：7 被引量：4H指数：1
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- 鼻疽诺卡菌感染小鼠足垫后组织病理变化以及细胞因子分泌情况的初步研究
- 2017年
- 目的了解鼻疽诺卡菌感染动物模型小鼠足垫后不同时间的组织病理进展变化以及细胞因子分泌情况,为鼻疽诺卡菌致病机制研究提供依据。方法应用对数生长期的鼻疽诺卡菌注射于小鼠足垫,建立感染模型。将感染1、3、7、14 d后小鼠分别脱臼处死,用手术刀片切取感染小鼠的足垫,制备切片,应用HE染色观察组织不同时间的病理变化,通过免疫组化研究感染过程中IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF表达分泌情况。结果通过HE染色观察到感染后第1天中性粒细胞浸润,炎症形成;感染后第3天中性粒细胞脓肿形成,进入急性感染时期;感染后第7天肌肉组织间大量肌纤维母细胞及血管内皮细胞增生,感染转入慢性感染时期;感染后第14天肌肉组织间大量肌纤维母细胞及血管内皮细胞增生,见局灶小脓肿,周围见片状增生的泡沫样巨噬细胞,进入感染修复期。组织免疫组化结果显示,在炎症形成时期,组织中的IL-6和TNF表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在急性感染期,组织中仅可见TNF表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在慢性感染期,组织中IL-6、IL-12、IFN-γ和TNF表达量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);在感染修复期,组织中的IL-6、IFN-γ和TNF表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论鼻疽诺卡菌感染小鼠足垫后出现明显的病理变化周期,在感染第3天开始进入急性感染时期,感染后第7天转入慢性感染时期,感染后第14天进入组织修复期,并且IL-6、IFN-γ、TNF参与了炎症反应,尤其是IL-6表达量最高,主要促进Th0向Th1和Th17亚群分化,激活巨噬细胞、树突状细胞和NK细胞等,增强其吞噬和杀伤功能,以杀伤胞内鼻疽诺卡菌。
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- 关键词：HE染色免疫组化细胞因子
- 克隆、表达和纯化具有生物学活性的巴西诺卡菌P61蛋白
- 2017年
- 目的构建巴西诺卡菌P61基因原核重组表达载体,在大肠杆菌中表达具有生物活性的P61蛋白,为P61蛋白的进一步相关研究提供实验基础。方法通过基因合成的方法合成P61基因,将其插入到质粒pET30a(+)载体并导入BL21大肠杆菌,应用IPTG进行诱导表达。通过Western Blot对表达产物进行分析。应用过氧化氢酶检测试剂盒检测其过氧化氢酶活性。结果 P61蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,且具有较高的过氧化氢酶活性,能被感染巴西诺卡菌的小鼠血清识别。结论成功构建了巴西诺卡菌P61蛋白的原核表达质粒,并能在原核表达宿主E.coli BL21中进行高效表达,且表达产物具有过氧化氢酶活性。
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- 关键词：过氧化氢酶原核表达
- 一种成纤维细胞生长因子21-透皮肽融合蛋白、制备方法及其应用
- 本发明公开了一种成纤维细胞生长因子21‑透皮肽融合蛋白、制备方法及其应用，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，并且进一步通过大肠杆菌表达生产高纯度的蛋白的制备方法。本发明提供的融合了TP1的FGF21，能提高...
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- 低危型HPV-11E6在小鼠骨髓源树突细胞中的定位表达及其诱发凋亡的研究
- 2017年
- 目的采用绿色荧光蛋白表达系统追踪低危型HPV-11E6蛋白在树突细胞(dentritic cell,DC)内的表达,探讨低危型HPV-11E6在树突细胞中的定位,观察低危型HPV-11E6蛋白诱导的树突细胞凋亡。方法构建真核表达载体pGFP-11E6,转染小鼠骨髓源树突细胞,荧光显微镜动态观察E6蛋白的定位和表达水平。采用流式细胞术检测转染后24 h低危型HPV-11E6蛋白的凋亡。结果树突细胞在分别转染pGFP-11E6和p EGFP-C1质粒后,GFP-11E6主要定位于细胞质内;而对照组的只表达GFP的蛋白则均匀分布于树突细胞。蛋白表达水平的检测表明,在转染树突细胞12 h,GFP-11E6和GFP蛋白开始表达(荧光强度分别为73.22,84.34),转染24 h蛋白表达均到达高峰(荧光强度分别为98.25,126.77),转染48 h蛋白表达荧光强度分别为87.46和103.56,转染72 h蛋白表达荧光强度分别为72.11和97.45。Annexin-Ⅴ/PI流式细胞仪检测可见,GFP-11E6转染的细胞发生了凋亡。结论低危型HPV-11E6主要定位于树突细胞质内,并且可以诱导树突细胞凋亡。
- 孙丽娜唐璐吉兴照司晨琛李振军
- 关键词：GFP树突细胞凋亡
- 高糖高脂对鼻疽诺卡菌作用于RAW264.7巨噬细胞的影响被引量：1
- 2018年
- 目的在体外培养巨噬细胞RAW264.7的基础上以高糖高脂刺激，检测巨噬细胞与鼻疽诺卡菌作用后的免疫指标，探讨高糖高脂对巨噬细胞免疫功能的影响。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞，分为5组，对照组为常规培养，实验组分为4组：高糖组以50 mmol/L葡萄糖培养，高脂1组以10 mg/L溶血卵磷脂培养，高脂2组以25 mg/L溶血卵磷脂培养，高脂高糖组以50 mmol/L葡萄糖＋25 mg/L溶血卵磷脂培养。检测不同条件培养6、12、24、36 h后各组巨噬细胞的细胞活性。5组巨噬细胞分别用以上条件培养24 h后与鼻疽诺卡菌作用，动态追踪检测巨噬细胞与鼻疽诺卡菌作用1、2、3、4、5、6 h后的吞噬率，及作用1、3、6 h后诺卡菌对不同细胞组的细胞毒性大小和细胞因子IL-10、TNF-α的分泌量。结果高糖高脂培养使巨噬细胞活性降低，培养24 h后各实验组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）。高糖高脂的刺激降低了巨噬细胞对鼻疽诺卡菌的吞噬能力，高糖组、高脂2组在1、2 h，高脂1组在1、2、3 h，高糖高脂组在1、2、3、4 h处对鼻疽诺卡菌的吞噬率低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）。与对照组比较，鼻疽诺卡菌对各实验组的细胞毒性减低（P〈0.05或P〈0.01）。与对照组相比，高脂1组、高脂2组、高糖高脂组在作用3 h后IL-10的分泌量低于对照组（P〈0.05）；高糖组、高脂1组在作用1 h后TNF的分泌量低于对照组（P〈0.05）。结论高糖高脂培养可降低巨噬细胞的活性，降低巨噬细胞对鼻疽诺卡菌的吞噬能力，并影响鼻疽诺卡菌对巨噬细胞的毒性作用以及巨噬细胞细胞因子IL-10、TNF-α的分泌量。
- 唐璐李振军郭建春李和桥孙丽娜吉兴照楼永良
- 关键词：RAW264.7巨噬细胞高糖溶血卵磷脂
- 鼻疽诺卡菌菌体蛋白的免疫蛋白质组学研究
- 2018年
- 目的通过鉴别鼻疽诺卡菌菌体蛋白中具有免疫原性的蛋白,为筛选鼻疽诺卡菌特异诊断抗原提供线索。方法提取鼻疽诺卡菌菌体蛋白进行双向电泳,结合免疫印迹法筛选与抗鼻疽诺卡菌兔血清发生免疫反应的蛋白点。结果在鼻疽诺卡菌菌体蛋白的免疫杂交膜上,共发现9个具有抗原活性的蛋白,其中8个可在考马斯蓝染色胶上找到匹配点,通过介质辅助激光解吸电离飞行时间质谱成功鉴定8个蛋白,全部定位于胞内。结论本研究成功建立鼻疽诺卡菌免疫蛋白质组学方法,在鼻疽诺卡菌菌体蛋白中发现新的具有免疫原性的蛋白,可作为鼻疽诺卡菌特异性诊断候选抗原,用于诊断试剂的研究。
- 徐帅侯雪新孙丽娜张景山吉兴照唐璐韦超李和桥王雪冰李振军
- 关键词：菌体蛋白
- secA1基因用于诺卡菌菌种鉴定分型的研究被引量：3
- 2016年
- 目的研究secA1基因在诺卡菌菌种的鉴定分型能力。方法对59株诺卡菌的secA1基因进行聚合酶链反应扩增,扩增片段纯化后测序,并从Gen Bank数据库下载32株诺卡菌secA1基因序列进行补充,采用DNAStar软件对所有序列计算种内与种间相似度水平,并用Mega 6.06软件的邻接法构建诺卡菌菌种系统发育进化树。结果 91株受试诺卡菌secA1基因的种内相似度为97.2%-100.0%,平均相似度达98.6%;种间相似度为85.2%-98.4%,平均相似度达91.8%。以secA1基因构建的系统发育进化树中,16种诺卡菌被准确分离为16个独立的分支,诺卡菌近缘种新星诺卡菌复合体、少食/短链诺卡菌复合体均可有效分离。结论 secA1基因序列分析为诺卡菌菌种的鉴定分型提供了一种新方法,在诺卡菌近缘种的分型方面有独特的优势。
- 司晨琛李振军唐璐韦超吉兴照徐帅楼永良
- 关键词：诺卡菌
