刘晓明
- 作品数：24 被引量：67H指数：5
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 大肠杆菌不耐热性肠毒素LT_B基因的克隆及其核苷酸序列分析被引量：15
- 1997年
- 用内切酶ＳａｃⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切大肠杆菌质粒ｐＥＷＤ２９９，回收５０５ｂｐ的ＬＴＢ基因片段，再将载体ｐＵＣ１８用ＳａｃⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，最后将ｐＵＣ１８ＤＮＡ与５０５ｂｐ的ＬＴＢＤＮＡ进行连接，转化至受体菌ＤＨ５α中，经ＳａｃⅠ／ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲⅠ／ＨｉｎｄⅢ酶切反应鉴定重组子，得到了理想重组子质粒ｐＸＬＴ１。再将ｐＸＬＴ１进行ＥｃｏＲⅠ酶切、大肠杆菌聚合酶ⅠＫｌｅｎｏｗ大片段补平、ＨｉｎｄⅢ酶切处理，然后与用ＨｉｃⅡ和ＨｉｎｄⅢ酶切的ｐＵＣ１８连接，转化至受体菌ＤＨ５α中，经ＸｂａⅠ／ＨｉｎｄⅢ酶切反应鉴定重组子，得到了理想重组子质粒ｐＸＬＴ１－１。将质粒ｐＸＬＴ１－１进行核苷酸序列分析。
- 许崇波卫广森吴广谋张立国冯书章张立国
- 关键词：大肠杆菌LTB基因基因克隆核苷酸序列分析
- 含绿脓杆菌外毒素A受体结合区重组蛋白的纯化被引量：5
- 1998年
- 将表达含绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区基因的质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，经ＩＰＴＧ诱导表达了含ＰＥＡ受体结合区的重组蛋白（称ＰＥ３４）。ＰＥ３４主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中，用溶菌酶－脱氧胆酸钠法结合超声波裂解法破碎细菌，离心制备包涵体。用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包涵体后，包涵体纯度可达７５％，在８ｍｏｌ／Ｌ脲存在条件下，ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶滤过，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化，获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ１条带的ＰＥ３４，纯度达９５．８％，得率为２４．５％。
- 刘晓明郭学军马从林朱平孟锐奇李吉平
- 关键词：绿脓杆菌外毒素A大肠杆菌包涵体纯化
- 重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白的初步复性及细胞生物学活性检测
- 1998年
- 用逐步稀释透析法将纯化的大肠杆菌表达的重组绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区蛋白初步复性，复性后的可溶性蛋白用于竞争抑制ＰＥＡ的细胞毒性实验。将１０ｎｇ／ｍｌ的ＰＥＡ与其敏感细胞Ｌ９２９共孵育，３６ｈ左右可见细胞发生病变死亡，而同时加入复性的重组ＰＥＡ受体结合区蛋白的培养细胞孔与未加ＰＥＡ阴性对照培养细胞一样仍分裂增殖，这种ＰＥＡ细胞毒性抑制作用可持续到所有培养细胞老化死亡。由此可见，重组ＰＥＡ受体结合区蛋白可在体外竞争抑制ＰＥＡ对Ｌ９２９细胞的毒性。
- 刘晓明马从林郭学军朱平王瑾琪甄英凯
- 关键词：细胞毒性
- 重组绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白的初步复性及细胞生物学活性检测被引量：3
- 1998年
- 用逐步稀释透析法将纯化的大肠杆菌表达的重组绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）受体结合区蛋白初步复性，复性后的可溶性蛋白用于竞争抑制ＰＥＡ的细胞毒性实验。将１０μｇ／Ｌ的ＰＥＡ与其敏感细胞Ｌ９２９共孵育，３６ｈ左右可见细胞发生病变死亡，而同时加入复性的重组ＰＥＡ受体结合区蛋白的培养细胞孔与未加ＰＥＡ阴性对照培养细胞一样仍分裂增殖，这种ＰＥＡ细胞毒性抑制作用可持续到所有培养细胞老化死亡。结果表明，重组ＰＥＡ受体结合区蛋白可在体外竞争抑制ＰＥＡ对Ｌ９２９细胞的毒性。
- 刘晓明马丛林郭学军朱平王瑾琪甄英凯
- 关键词：绿脓杆菌外毒素A细胞毒性
- 人细胞间粘附分子1基因功能区Ⅰ、Ⅱ的克隆及高效表达
- 1997年
- 近几年的研究已表明,鼻息肉是一种以嗜酸性细胞浸润为主的鼻粘膜慢性炎症,如果抑制了嗜酸性细胞浸润,也就抑制了鼻息肉的生长。因而对嗜酸性细胞的生物学作用研究受到重视。在嗜酸性细胞选择性粘附。
- 孔红董震杨占泉卜国铉任晓燕孟锐奇朱平刘晓明姚湘燕柳增善曹春霞
- 关键词：细胞间粘附分子1鼻息肉嗜酸性细胞细胞浸润头颈外科生物学作用
- HIV-1核心蛋白的表达与纯化
- 2000年
- 将编码人I型免疫缺陷病毒(HIV1)核心蛋白p24gag的基因序列克隆到原核表达载体pET28(b)中,高效表达了N,C端融合His·Tagp24蛋白,所表达的重组p24蛋白占菌体总蛋白的46%。在变性条件下,使用NiNTA亲和层析法纯化了p24蛋白,纯度为94%。菌体中及纯化、复性后的目的蛋白均能与抗HIV1p24单克隆抗体发生特异性反应。用纯化的p24蛋白免疫小鼠,4周时小鼠血清抗p24抗体效价达1∶400。实验结果表明:大肠杆菌表达的HIV1p24蛋白纯化后可用作HIV1检测试剂的原料。
- 金宁一李体远刘晓明王玉红王宏伟郭志儒安汝国殷震
- 关键词：大肠杆菌纯化基因表达核心蛋白
- 重组含绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白的表达、纯化、复性及细胞生物学活性研究
- 1997年
- 绿脓杆菌是烧伤及外科手术感染的主要病原菌之一,而绿脓杆菌外毒素A(PEA)是该菌的最主要的毒力因子之一,极微量的PEA便可引起肝、肾等组织细胞死亡,进而导致肝、肾等多器官功能衰竭,这是临床上绿脓杆菌感染后高死亡率的主要原因。同时,PEA还严重影响创口的愈合。目前临床上对于绿脓杆菌感染的控制以及对PEA毒血症的防治尚无有效的方法与手段。
- 刘晓明马丛林郭学军朱平石瑾琪
- 关键词：绿脓杆菌感染外毒素A包含体复性毒力因子
- 绿脓杆菌外毒素A的纯化被引量：4
- 1996年
- 用绿脓杆菌ＰＡ１０３株接种于ＴＳＡ甘油培养基３２℃培养，产生绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ），经流水透析除盐、ＤＥ－５２纤维素阶段洗脱、硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５除盐、ＤＥ－５２纤维素梯度洗脱、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００分子筛层析，纯化了绿脓杆菌外毒素Ａ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，纯化后的毒素为单一蛋白带，分子量约６６０００；对普通小鼠ＬＤ５０为０．２４μｇ蛋白。用ＰＥＡ抗血清作免疫印迹分析，进一步证实纯化的蛋白为ＰＥＡ，毒素约纯化了５００倍，总蛋白回收率约０．０２４％，毒素回收率约１１％。
- 刘晓明朱平刘子马从林
- 关键词：绿脓杆菌外毒素A纯化
- 抗E．coli RecA单克隆抗体的制备与鉴定
- 1995年
- 本研究用纯化Ｅ．ｃｏｌｉＲｅｃＡ蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０融合，以粗制Ｅ．ｃｏｌｉＲｅｃＡ包被酶标反应板，间接ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性孔，经有限稀释法４次克隆化，建立了两株分泌抗ＲｅｃＡ蛋白ＭｃＡｂ的细胞系２Ｄ６和３Ｂ１。免疫印迹表明ＭｃＡｂ只对细菌的ＲｅｃＡ有反应，不与细菌其它成分发生反应。间接ＥＬＩＳＡ进一步表明，ＭｃＡｂ２Ｄ６、３Ｄ１只对细菌ＲｅｃＡ类蛋白有反应，不与小鼠肝、心、肺、脾等和ＢＨＫ细胞的内外蛋白反应。
- 刘晓明马从林刘子朱平
- 关键词：大肠杆菌单克隆抗体
- 表达大肠杆菌耐热性肠毒素Ⅰ融合蛋白基因工程菌株的免疫原性研究被引量：5
- 1995年
- 已构建的能表达大肠杆茵耐热性肠毒素１（ＳＴ＿１）－β－半乳糖苷酶融合蛋白基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）经轧鼠灌胃试验证实没有毒性反应。采用超声波粉碎法裂解菌体，再辅以氢氧化铝胶制冬抗原，免疫接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠，获得抗融合蛋白抗体，乳鼠灌胃中和试验结果表明，该抗体能中和天然ＳＴ＿１肠毒素活性，具有较好的免疫保护作用。以该菌株免疫的雌性ＥＡＬＢ／ｃ鼠产下的乳鼠吮吸初乳后，能够抵抗１个鼠活性单位ＳＴ＿１肠毒素的攻击。Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ（ｐＸＳＴ＿１）工程菌株可作为预防大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的侯选菌株。
- 许崇波冯书章刘刘晓明王淑华王玉炯黄培堂
- 关键词：兽医大肠杆菌免疫原性
