杨红艳
- 作品数：13 被引量：48H指数：4
- 供职机构：郑州大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人食管癌Eca-109细胞膜蛋白分离纯化方法的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 建立人食管癌细胞株Eca 10 9细胞膜蛋白分离和初步纯化方法。方法 使用改良的Neville法提取细胞膜 ,在pH 6.3的条件下 ,用去垢剂TritonX 10 0和辛基 β 葡糖苷把细胞膜上的蛋白溶解下来 ,以超滤法纯化膜蛋白并分组。 结果 在pH6.3的条件下 ,适当的去垢剂与膜蛋白之比 (即mg去垢剂 /mg膜蛋白 ) ,使用辛基 β 葡糖苷时为 6∶1;使用TritonX 10 0时为 2∶1。超滤法将膜蛋白分为 <3KD、3～ 10KD、<10KD、10～ 3 0KD、3 0～ 10 0KD、>10 0KD共 6个组。结论 为进一步研究食管癌Eca 10
- 李付广孙涛董子明杨红艳
- 关键词：食管癌ECA-109细胞膜蛋白分离纯化方法
- 人野生型DNA聚合酶β在NIH3T3细胞中的定位
- 2005年
- 目的:研究人野生型DNA聚合酶β(wtDNApolβ)在NIH3T3细胞内的定位。方法:将携带人wtDNApolβ的真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-polβ,用脂质体介导的方法转染NIH3T3细胞株,用荧光倒置显微镜观察转染细胞,观察wtpEGFP-C3-polβ融合基因表达。以转染空质粒pEGFP-C3的NIH3T3细胞为对照。结果:转染细胞均有GFP表达,说明转染成功。转染pEGFP-C3-polβ的细胞胞核荧光强度较胞浆强,而空质粒转染细胞胞浆胞核荧光强度无差别。结论:wtDNApolβ在NIH3T3细胞中定位于胞核内。
- 赵军赵勤赵国强秦冰路静宋谦崔自由赵继敏杨红艳黄幼田汤黎明董子明
- 关键词：转染蛋白质定位NIH3T3细胞
- 食管正常、癌前及癌变组织中DNA聚合酶βmRNA检测被引量：5
- 2005年
- 目的:观察不同演进过程食管组织中DNA聚合酶β(polβ)mRNA的表达。方法:采用含有内对照的半定量RT-PCR方法,检测31例食管浸润癌(鳞癌27例,腺癌4例)、4例原位癌、6例不典型增生以及31例正常食管黏膜组织中polβmRNA的表达。结果:食管浸润癌、原位癌和不典型增生组织中polβmRNA的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),但均高于正常食管黏膜组织中的表达水平(P均<0.05)。食管鳞癌和腺癌组织中polβmR-NA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结果:在食管癌组织中存在着polβ的高表达,且发生于癌变早期。
- 赵国强王涛赵明耀何炜杨红艳王明臣汤黎明赵继敏赵勤董子明
- 关键词：DNA聚合酶Β食管肿瘤
- 外周血T淋巴细胞纯化方法的研究被引量：1
- 2004年
- 目的 外周血T淋巴细胞初步纯化方法的建立。方法 用流式细胞术检测淋巴细胞培养过程中细胞表面标志的改变。结果 健康人PBMC ,只在IL - 2维持下 ,用流式细胞术检测发现 :B细胞于第 1周时基本死亡 ,第 3周时完全消失 ;NK细胞于第 1周时明显增加 ,第 4周时大部分死亡 ;第 4周时 ,所培养的细胞绝大多数为T细胞。T细胞亚群的整体变化趋势为 :随着培养时间的延长 ,CD4 + 百分数稍增加 ,CD8+ 百分数明显增加 ,CD4 + /CD8+ 比值明显降低 ,CD3+ CD16 + CD5 6 + 百分数明显增加。结论 在IL - 2维持下 ,人PBMC培养 4周时 ,收获培养细胞为初步纯化的T细胞。
- 李付广靳静孙涛董子明杨红艳
- 关键词：外周血T淋巴细胞纯化流式细胞术
- 枸杞多糖对荷H22肝腹水瘤小鼠免疫功能的影响被引量：14
- 2011年
- 目的:观察枸杞多糖(LBP)对荷H22肝腹水瘤小鼠免疫功能的影响。方法:昆明小鼠40只,分成4组(n=10),腹腔注射200μL的H22肝腹水瘤细胞(106mL-1),24h后分别以5、10或20mg/(kg·d)的LBP和等体积生理盐水灌胃,记录各组小鼠成瘤期和生存期。另取40只,随机分成4组(n=10),同上处理,连续喂养14d后处死小鼠,分别计算胸腺指数和脾指数;分离小鼠骨髓树突状细胞(DC),流式细胞术检测CD86、CD11a的表达,Westernblot检测白介素12(IL-12)P40的表达;诱导培养小鼠脾脏T淋巴细胞,MTT法检测分别以4组小鼠骨髓DC致敏的T淋巴细胞对H22肿瘤细胞的杀伤活性。结果:LBP可延缓荷瘤小鼠的成瘤期,延长其生存期(χ2=28.808和35.410,P均<0.001);提高其胸腺指数和脾指数(F=262.396和126.976,P均<0.001);使骨髓DCCD86、CD11a和IL-12P40的表达升高(F=3122.694,1469.946和252.590,P均<0.001);DC致敏的T淋巴细胞杀伤活性增强(F=122.539,P<0.001)。结论:LBP可以促进荷H22肝腹水瘤小鼠骨髓DC的成熟。
- 郝习赵明耀杨红艳黄幼田郑智敏董子明
- 关键词：枸杞多糖抗原提呈小鼠H22肿瘤
- 全反式维甲酸诱导的食管癌细胞DNA聚合酶β的表达被引量：2
- 2004年
- 目的 :了解食管癌细胞分化过程中DNA聚合酶 β(polβ)基因的表达。方法 :采用全反式维甲酸 (ATRA)诱导人食管癌Eca1 0 9细胞分化 ,应用甲基绿 派洛宁染色、原位杂交、免疫组化和Westernblot方法分别检测细胞分化和polβ基因的表达。 结果 :ATRA作用 5d后可以诱导Eca1 0 9细胞分化。wt polβ和mt polβ(截短的 )基因的表达随着Eca1 0 9细胞的分化而降低。结论 :ATRA可下调Eca1 0 9细胞wt polβ和mt polβ的表达 。
- 金戈赵继敏吴景兰杨红艳赵勤赵国强郑乃刚董子明
- 关键词：DNA聚合酶Β全反式维甲酸细胞分化
- 人食管癌Eca-109细胞膜抗原筛选的初步研究被引量：3
- 2004年
- 目的 从人食管癌Eca 10 9细胞入手 ,寻找能引起CTL免疫反应的肿瘤抗原 ,筛选出高效肿瘤抗原的大致范围。方法 采用敏感的序列特异性引物 聚合酶链反应 (PCR SSP)来确定Eca 10 9细胞HLA基因分型 ,用HLA血清学分型技术 (Terasaki改良的微量细胞毒试验 )筛选健康志愿者 ;用MTT法测定致敏T细胞的细胞毒活性。结果 Eca 10 9细胞的HLA的基因分型为A 0 3 ,A 2 4;B 3 5 ,B 3 7;DRB1 0 1,DRB1 12 ;DRB3 ;筛选到一例表型为A0 3杂合子的健康志愿者。根据MTT检测 ,Eca 10 9细胞小于 10KD膜蛋白免疫原性较未使用去垢剂的总膜蛋白的免疫原性高 ,小于 3KD膜蛋白的免疫原性最高。结论 Eca 10 9细胞膜蛋白中存在能引起特异性的抗肿瘤CTL免疫反应的肿瘤抗原 ,其中小于
- 李付广孙涛董子明杨红艳
- 关键词：食管癌抗原树突状细胞膜蛋白
- TSA联合基因工程腺病毒H101治疗食管癌皮下移植瘤的研究
- 2011年
- 目的研究曲古霉素A(TSA)对基因工程腺病毒H101杀伤食管癌EC9706细胞作用的影响,探讨HDAC抑制剂在腺病毒载体基因治疗中应用的可能性和作用机制。方法 1)先成瘤后治疗组,构建裸鼠食管癌移植瘤模型,待肿瘤长至肉眼可见的肿块(约8 mm×7 mm)后分组。TSA治疗组:每只每次瘤内注射1.0μmol/L TSA;H101治疗组:瘤内注射50×108vp/d H101;TSA联合H101治疗组:即先注射TSA,第2天注射H101,注射剂量同上。另设空白对照组,以上治疗持续2周,治疗结束取瘤组织检测;2)先处理后成瘤组:分别采用浓度为4.0μmol/L TSA体外处理EC9706细胞48 h,浓度200×108vp/d H101处理EC9706细胞48 h及两者联合处理EC9706细胞48 h,同样设置不做处理的空白对照组,将处理后的细胞种植于裸鼠左上肢腋下构建裸鼠食管癌移植瘤模型。待肿瘤长至肉眼可见的肿块(约8 mm×7 mm)后,取瘤组织用RT-PCR、W estern b lot和免疫组化法检测柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在移植瘤中的表达,测量肿瘤体积。结果无论是先处理后成瘤组还是先成瘤后治疗组,TSA组和TSA联合H101组均可上调裸鼠食管癌移植瘤组织中CAR蛋白的表达,与空白对照组和H101组比较差异均有统计学意义(P<0.05),但TSA组和TSA联合H101组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。而TSA联合H101组对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤大小影响与TSA、H101组比较差异均有统计学意义(P<0.05),TSA与H101组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各治疗组与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TSA能增强H101治疗人食管癌裸鼠皮下移植瘤,其作用机制之一是TSA上调了食管癌CAR蛋白的表达。
- 冯婷刘霞马俊芬杨红艳李沛董子明
- 关键词：柯萨奇-腺病毒受体曲古菌素AEC9706
- 人食管癌Eca-109细胞膜蛋白的分离和纯化被引量：1
- 2006年
- 目的:建立人食管癌Eca109细胞系膜蛋白分离和初步纯化方法。方法:使用改良的Neville法提取细胞膜,在pH6.3的条件下,用去垢剂TritonX100和辛基β葡糖苷把细胞膜上的蛋白溶解下来,以超滤法纯化膜蛋白并分组。结果:在pH6.3的条件下,适当的去垢剂与膜蛋白质量之比使用去垢剂辛基β葡糖苷时为61;使用TritonX100时为21。超滤法将膜蛋白分为相对分子质量<3000、3000～10000、<10000、10000～30000、30000～100000、>100000共6个组分。结论:获得适当的去垢剂与膜蛋白质量比,并获得了不同的膜蛋白组分,为进一步研究人食管癌Eca109细胞肿瘤抗原奠定了基础。
- 李付广杜英孙涛杨红艳董子明
- 关键词：食管癌细胞株膜蛋白
- PTEN基因表达对EC9706细胞增殖、侵袭、凋亡能力的影响被引量：13
- 2013年
- 目的:观察PTEN基因表达水平的变化对食管癌EC9706细胞增殖、侵袭、凋亡能力的影响。方法:构建2个靶向PTEN的siRNA载体及1个PTEN表达载体,分别转染EC9706细胞。实验分沉默1组、沉默2组、siRNA载体对照组、PTEN表达组、表达载体对照组和未转染组。RT-PCR、Westernblot法检测转染后各组细胞PTEN基因mRNA和蛋白表达水平。采用CCK-8试验、软琼脂克隆形成实验、流式细胞术和Transwell试验分别检测各组细胞增殖、克隆形成能力、细胞凋亡率及侵袭能力。结果:与未转染组比较,沉默1组、沉默2组PTENmRNA和蛋白表达量均降低,PTEN表达组PTENmRNA相对表达量升高(F=25.762,P<0.001);与未转染组比较,PTEN表达组细胞软琼脂克隆形成数和穿透细胞数均降低,细胞凋亡率增加(F=50.752、29.981、32.193,P均<0.001)。结论:上调PTEN的表达水平可以有效抑制EC9706细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移能力,同时促进细胞凋亡。
- 黄丽艳王娜汤黎明许燕黄幼田杨红艳董子明
- 关键词：PTENEC9706细胞增殖细胞侵袭凋亡
