王念
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 三种方法培养大鼠结肠平滑肌细胞的比较被引量：1
- 2016年
- 的 比较3种不同方法培养大鼠结肠平滑肌细胞（CSMC）的生长情况.方法 分离大鼠末端结肠,剥离浆膜层和黏膜层获得平滑肌组织层,将平滑肌组织层剪成小块,采用3种不同方法原代培养大鼠CSMC：（1）贴壁法：将组织块直接接种于培养瓶中.（2）酶解法①：使用0.1％Ⅱ型胶原酶和0.01％大豆胰蛋白酶抑制剂消化组织块2次,然后接种于培养瓶中.（3）酶解法②：使用0.25％胰蛋白酶消化组织块,然后用0.1％Ⅱ型胶原酶和0.01％大豆胰蛋白酶抑制剂消化2次,接种于培养瓶中.按上述3种方法进行大鼠CSMC的原代培养,待细胞长成致密单层后进行传代,观察细胞生长情况并进行免疫荧光检测鉴定细胞类型.结果 贴壁法培养6d可以见细胞从组织块周围游出,但由于细胞数少无法进行传代;酶解法①培养36 h可见少量细胞贴壁,培养15～20 d可以进行传代;酶解法②培养36 h可见较多细胞贴壁生长,培养l0d可以进行传代.酶解法①和酶解法②培养的细胞传代后,细胞形态和生长速度无明显区别.免疫荧光检测显示,3种方法培养的细胞均为α-平滑肌肌动蛋白阳性,90％以上为CSMC.结论 3种培养方法均可得到急性分离的大鼠CSMC,在细胞质量方面无明显差别,实验中可根据具体情况选用不同的培养方法.
- 王璐陈凤英吴雄灏王念梁恒瑞赵磊
- 关键词：结肠肌细胞平滑肌细胞培养技术
