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肝细胞癌高表达基因TPT1真核报告表达载体的构建及鉴定被引量：2: 2005年; 目的构建TPT1真核报告表达载体pEGFPN3TPT1,为进一步研究其功能奠定基础。方法通过PCR和酶切的方法获取具有黏性末端的TPT1基因的全长开放读码框,将其定向连入真核表达载体pEGFPN3绿色荧光报告基因的氨基侧,构成pEGFPN3TPT1的真核报告表达载体,通过酶切和测序鉴定TPT1的正确插入。结果酶切和测序均证实TPT1正确插入了真核报告表达载体pEGFPN3TPT1中。结论成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFPN3TPT1。; 高天慧段芳龄马军周云孙嫣孙艳王晓薛乐勋; 关键词：高表达基因肝细胞癌真核表达载体开放读码框报告基因

大鼠移植骨髓细胞向肝细胞转化的实验研究被引量：14: 2003年; 目的探讨体内骨髓细胞向肝细胞转化的可行性。方法将雌性 SD大鼠随机分为3组,每组15只。①R+BMT(全身照射+骨髓移植);②2-AAF+R+BMT:③2-AAF+PH(部分肝切)+BMT。进行交叉性别骨髓细胞移植,雄性骨髓植入雌性受体,分别于第5、10、20天处死雌鼠。以雄性性别决定基因sry作为细胞标记,用原位杂交和FISH作为检测方法对骨髓细胞的肝细胞转化进行分析。结果 PCR移植效果初步分析可见,R+ BMT组11例中有10例PCR阳性;2AAF+PH+BMT组11例中有7例阳性,2AAM+R+BMT组10例中有6例阳性。sry原位杂交染色发现,第5天各组雌性受体肝索中均未见sry阳性的肝细胞。第10天R+BMT组可见1例sry阳性的细胞位于肝细胞索,FISH染色可见这一细胞白蛋白mRNA阳性。第20天各组PCR阳性各例均可在肝索中检测到sry阳性的细胞。FICH染色可见白蛋白mRNA阳性。经统计学分析第20天各组sry阳性细胞数无明显差异。结论在R+BMT、2-AAF+PH+BMT和2-AAF+R+BMT模型中移植的骨髓细胞均可以植入肝脏,并存在于肝细胞索。植入肝索的骨髓细胞最早可见于移植后第10天,并发生转分化,表达白蛋白mRNA。不经过全身照射的2-AAF+PH+BMT组,移植的骨髓细胞也可以进入肝脏发生转分化,因此全身照射并不一定是移植骨髓细胞活化、植入和转化的必须条件。; 马军段芳龄李文晰颜伏归王晓王智卿朱武凌陈香宇高天慧; 关键词：骨髓细胞肝细胞转化原位杂交骨髓干细胞骨髓移植

TPT1真核表达载体的构建及在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达被引量：1: 2005年; 目的:构建TPT1真核表达载体,并转染肝癌细胞系SMMC-7721,为进一步研究奠定基础。方法:通过PCR的方法在TPT1 ORF(open read ing fram e,开放读码框)两侧添加EcoR I和BamH I的识别序列,将其定向插入真核报告表达载体pEGFP-N3中,构成pEGFP-N3TPT1重构体,卡那霉素筛选阳性克隆,碱裂解法抽提质粒,Sanger法测序,VecScreen和BLAST分析测序结果,lipofectAM INE转染肝癌细胞系SMMC-7721,荧光显微镜及RT-PCR方法检测表达效率。结果:成功扩增了带有特异性核酸内切酶识别位点的TPT1 ORF片段,双酶切后连入pEGFP-N3,测序结果证明TPT1正确插入pEGFP-N3中,转导SMMC-7721后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率在30%左右。RT-PCR分析显示,pEGFP-N3TPT1转导的细胞,TPT1mRNA水平较对照高0.78倍(P<0.05)。结论:成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1,pEGFP-N3TPT1可在SMMC-7721细胞内高效表达。; 高天慧段芳龄周云孙艳孙嫣王晓; 关键词：肝细胞癌真核表达

TPT1基因转染对肝癌细胞系SMMC-7721生物学行为的影响被引量：3: 2005年; 目的:观察TPT 1转染对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:用Q IAGEN超纯质粒抽提试剂盒抽提TPT 1的真核表达质粒pEGFP-N 3TPT 1和pEGFP-N 3,通过lipofectAM INE,在24 h内连续3次转染肝癌细胞系SMM C-7721,通过荧光显微镜、RT-PCR观察转染、表达效率,通过M TT实验、软琼脂克隆形成实验、细胞周期分析,研究TPT 1转染对肝癌细胞系SMM C-7721生物学行为的影响。结果:用此重构体转染后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率约在30%左右。RT-PCR分析显示,pEGFP-N 3 TPT 1转染的细胞,TPT 1 mRNA水平升高0.78倍(P<0.05)。与对照组相比,pEGFP-N 3TPT 1转染可明显增强肝癌细胞系的增殖能力和软琼脂克隆形成能力(P值均<0.05),使G 2+S/M期细胞数增多。结论:pEGFP-N 3 TPT 1可在肝系细胞内高效表达,TPT 1可增强肝癌细胞系SMM C-7721的恶性表型。; 高天慧段芳龄周云尚佳孙嫣孙艳王晓; 关键词：转染细胞系肿瘤

肝细胞癌差异表达基因P-02反义寡核苷酸抑瘤作用的体外实验研究被引量：3: 2003年; 目的 :通过全硫代修饰的肝细胞癌差异表达基因P 0 2反义寡核苷酸对人肝癌细胞系SMMC 772 1增殖活性的影响 ,探讨P 0 2基因的功能。方法 :以脂质体为载体 ,采用MTT法、RT PCR、流式细胞术检测P 0 2AS ODN(antisenseoligonucleotide)对SMMC 772 1细胞生长、增殖、细胞周期的作用。结果 :脂质体介导的P 0 2基因反义寡核苷酸可抑制SMMC 772 1增殖 ,RT PCR结果显示P 0 2基因的扩增条带明显减弱 ,流式细胞术显示G1期细胞增多 ,M期及S期细胞数减少。结论 :脂质体介导的AS ODN可抑制SMMC 772 1的恶性表型 ,证实P 0; 韩娜段芳龄朱武凌高天慧陈香宇王晓李蔚颜伏归李文晰; 关键词：遗传学遗传学寡核苷酸类反义

部分肝切除后的肝损伤血清和肝细胞生长因子促进大鼠骨髓细胞表达甲胎蛋白和白蛋白被引量：13: 2004年; 目的检测大鼠骨髓中是否存在肝脏干细胞,并用肝损伤血清和肝细胞生长因子(HGF)刺激骨髓细胞向肝细胞转化。方法 SD大鼠骨髓单个核细胞分3组进行培养:(1)单纯培养基对照组;(2)肝损伤血清组(15％,血清来自于2-AAF+75％肝切除大鼠);(3)HGF(20ng/ml)组。用甲胎蛋白(AFP)和白蛋白作为细胞标志,用免疫组织化学、逆转录-聚合酶链反应(PCR)、巢式PCR和western blot方法,观察大鼠肝损伤血清和HGF对骨髓细胞转化的促进作用。结果肝损伤血清组和HGF组培养后10d和20d AFP免疫组织化学和western blot染色阳性;RT-PCR AFP mRNA阳性,新鲜骨髓细胞和单纯IMDM/F12培养基组AFP蛋白和mRNA均阴性。新鲜骨髓细胞存在白蛋白mRNA表达,在肝损伤血清组和HGF组培养后10d和20d,白蛋白mRNA表达增强。结论大鼠肝损伤血清和HGF可促使体外培养骨髓细胞表达AFP mRNA和AFP。骨髓中可能存在骨髓源性肝干细胞,并微弱表达白蛋白mRNA;肝损伤血清和HGF可以促进骨髓细胞表达白蛋白mRNA。; 马军段芳龄颜伏归李文晰王晓陈香宇高天慧朱武凌王智卿; 关键词：部分肝切除甲胎蛋白白蛋白骨髓源性肝干细胞

骨髓间充质干细胞多能性的研究进展被引量：3: 2003年; Digestive Institute, Zhengzhou University, No. 2, Jingha road, Zhengzhou; 王晓李蔚段芳龄; 关键词：骨髓间充质干细胞多能性干细胞横向分化

人骨髓多能成体祖细胞的分离培养及向肝细胞样细胞分化的研究被引量：14: 2003年; 目的培养人骨髓多能成体祖细胞(multipotent adult progenitor cells,MAPCs)并研究其向肝细胞样细胞的分化。方法应用体外细胞培养技术将人骨髓中的单个核细胞从无血液疾病患者的髂嵴骨髓中分离出来后,用磁式细胞分离仪分离富集骨髓单个核细胞中的CD45^-HLA-DR^-细胞,把其接种于DMEM培养基中进行培养,到达对数生长期时,加入成纤维细胞生长因子-4(fibrob-last growth factor-4,FGF-4)并改用维持液来诱导其向肝细胞样细胞分化,最后用免疫细胞化学方法检测其分化情况。结果成功地进行了人骨髓MAPCs的原代和传代培养,并在体外成功地把其诱导分化为具有肝细胞表型特征的细胞。结论 FGF-4可诱导人MAPCs向具有肝细胞表型特征的细胞发生分化。; 王晓段芳龄高天慧朱武凌陈香宇颜伏归韩娜李文晰李蔚; 关键词：人骨髓多能成体祖细胞细胞培养体外培养单个核细胞

IFN-γRα、ICAM-1在大鼠肝卵圆细胞增殖模型中的表达及其意义被引量：4: 2003年; 目的探讨γ干扰素受体α(interforon gamma receptor alpha IFN-γRα)及细胞间黏附分子I(intercelluar adhesion moleeule I.ICAM-1)在大鼠肝卵圆细胞增殖模型中的表达情况及其生物学意义。方法采用二乙酰氨基笏(2-acetaminofluorene AAF)加三分之二肝切建立大鼠肝卵圆细胞增殖的模型,并以大鼠单纯三分之二肝切后的再生肝纠织、单纯灌AAF4天后的肝组织及正常大鼠肝细胞作对照,采用RT-PCR检测IPN-γRα、ICAM-1及甲胎蛋白(alpha-fetoprotein AFP)mRNA在模型组及对照组肝组织中的表达情况。结果 AFP,IFN-γRα及ICAM-1mRNA 表达水平在模型组肝切后4天及9天明显上调,AFP在肝切后9天、IFN-γRa及ICAM-1在肝切后4天的表达均显著高于对照组(P<0.05),在肝切后20天复常。结论 AFN-γRα和ICAM-1mRNA的高表达与肝卵圆细胞的增殖及分化过程密切相关。; 颜伏归段芳龄朱武凌马军高天慧陈香宇王晓李蔚李文晰韩娜; 关键词：ICAM-1 肝卵圆细胞

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王晓

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