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N末端缺失萝卜谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶的表达、纯化及结构预测被引量：2: 2008年; 将N末端定位信号缺失萝卜PHGPx(RsPHGPx)的cDNA片段克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化至大肠杆菌内进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了用于晶体学研究的RsPHGPx.其浓度约为10 g/L,纯度超过95%,具有PHGPx活性.三维结构同源建模显示RsPHGPx的结构为典型的硫氧还蛋白折叠形式.; 王丰刘进元; 关键词：萝卜谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶纯化

26S蛋白酶体的结构生物学研究进展被引量：12: 2014年; 26S蛋白酶体是真核细胞内负责蛋白质降解的主要分子机器,通过特异性降解目的蛋白质,几乎参与了生物体的绝大多数生命活动.26S蛋白酶体在结构上可分为19S调节颗粒和20S核心颗粒两部分.19S调节颗粒负责识别带有泛素链标记的蛋白质底物及对其进行去折叠,并最终将去折叠的蛋白质底物传送至20S核心颗粒中进行降解.由于26S蛋白酶体的结构组成复杂,分子量十分巨大,现有的X-ray技术和NMR技术对其完整结构的解析都无能为力,仅能解析出部分单个蛋白成员或分子量较低的亚复合物晶体结构.而冷冻电镜技术在相当一段时间内处于发展的初级阶段,导致其三维结构的研究进展曾经十分缓慢,严重阻碍了人们对其结构和功能的了解.近年来,随着在X-ray技术领域对大分子复合物结构解析的经验积累和冷冻电镜技术领域的技术革命,完整的26S蛋白酶体三维结构解析取得了飞速的发展.本文回顾了近几年在26S蛋白酶体结构生物学领域的重要进展,并展望了该领域未来的发展及面临的挑战.; 王丰施一公; 关键词：26S蛋白酶体结构生物学冷冻电镜

水稻谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶的热稳定性研究: 2007年; 谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶是唯一能够直接还原生物膜上脂类过氧化物的过氧化物酶。利用圆二色光谱(CD)、内源荧光光谱和差示扫描量热仪(DSC)研究了温度对谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶(OsPHGPx)活性及其构象变化的影响。在温度为20～27.5℃期间,随着温度的逐渐升高,OsPHGPx的活性逐渐上升,到27.5℃时达到最大值;在27.5～45℃时,随着温度逐渐升高,其活性迅速下降;当温度超过45℃时,其活性完全丧失。在20～40℃,CD光谱、内源荧光光谱和DSC均没有发生明显变化,暗示OsPHGPx的结构基本保持完整;在40～55℃,CD光谱显示该酶二级结构发生去折叠;内源荧光光谱的变化暗示该酶三级结构发生去折叠。其中在40～45℃,DSC显示该酶可能存在两个去折叠中间体。当温度超过55℃时,整个酶的构象不再发生变化,呈现去折叠状态。; 王丰周惠萍孔宝华范静华陈海如刘进元; 关键词：谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶荧光光谱 CD光谱差示扫描量热法

MecA作为ClpCP蛋白水解体系降解标签的分子机制: ATP依赖的蛋白水解酶所调控的蛋白水解存在于所有生物细胞内。在枯草芽孢杆菌内,负责感受态发育的转录因子ComK的降解是由MecA介导的ATP依赖的ClpCP蛋白水解酶复合物所执行。生化实验表明MecA的C末端98个氨基酸...; 王丰梅子青戚玉涛严创业向思蘅周致远胡奇王佳伟施一公

水稻谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶的表达、纯化及晶体生长条件初筛被引量：1: 2007年; 将水稻PHGPx(OsPHGPx)的编码序列克隆到表达载体pGEX-6P-1上,并转化为大肠杆菌进行表达.通过GST亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析,制备了可用于晶体学研究的OsPHGPx,其纯度超过95%,具备明显的PHGPx活性.质谱显示OsPHGPx的精确分子量为19642.5553,与理论分子量基本一致.OsPHGPx在多个晶体生长条件下出现微晶.三维结构同源建模显示OsPHGPx的结构为硫氧还蛋白折叠形式.; 王丰刘进元; 关键词：水稻谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶纯化晶体生长三维结构建模

蛋白酶体的结构与功能研究: 蛋白酶体是细胞内负责蛋白质降解的主要分子机器,通过特异性降解目的蛋白质,几乎参与了生物体的绝大多数生命活动.根据结构和功能,蛋白酶体主要分为两部分:调节颗粒和核心颗粒.调节颗粒负责识别蛋白质底物及对其进行去折叠,并最终将...; 王丰; 关键词：蛋白酶体; 文献传递

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王丰