王俊茹
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 发文基金：国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种早胚发育促进因子“DPF-1”cDNA的表达、纯化及其抗体的制备被引量：2
- 2001年
- 目的 :表达纯化 GST-DPF-1融合蛋白 ,制备抗 DPF-1抗体 ,用抗 DPF-1抗体进行功能封闭实验。方法 :用 Eco RI和 Not I双酶切 p Bluescript IIKS/ 1 .9kb DPF-1 c DNA,得到1 .9kb DPF-1 c DNA;Hinc II酶切该片段 ,得到 1 .8kb DPF-1 c DNA;Sma I与 Not I双酶切 GST融合基因表达载体 p GEX-4T-3 ,得到线性 p GEX-4T-3载体 ;1 .8kb DPF-1 c DNA与线性 p GEX-4T-3载体连接 ,构建了重组 p GEX-4T-3 / DPF-1 c DNA。带有重组质粒的DE3菌 3 7℃培养 ,IPTG诱导 ,菌体裂解及蛋白纯化。融合蛋白免疫 BAL B/ c小鼠 ,制备抗血清 ,抗血清经 GST吸附。结果 :获得的 GST-DPF-1融合蛋白和针对 DPF-1的抗体具有较好的专一性。经 GST吸附后的抗 DPF-1抗血清可使条件培液中的昆明小鼠受精卵全部被阻断于 2 -细胞期。结论 :该抗体可用于天然 DPF-1的纯化、DPF-1功能及作用机制的研究。
- 潘勇顾正王俊茹左嘉客
- 关键词：抗体胚胎CDNA
