涂小林
- 作品数：19 被引量：62H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 激活BMP信号的骨细胞对骨髓基质细胞成骨及成脂分化的作用研究
- 2021年
- 目的激活骨细胞系MLO-Y4细胞中BMP信号检测培养上清对骨髓基质细胞系ST2成骨、成脂分化的影响,进一步探讨其机制。方法0.5‰DMSO,0.5μmol/L BMP激动剂FK506分别处理MLO-Y424 h后,使用CCK-8检测细胞活力变化,实时荧光定量PCR检测BMP下游靶基因ID1及ID2 mRNA表达变化;用20%MLO-Y4培养上清与80%新鲜培养基混合后培养ST2细胞,分为DMSO组、FK506组。碱性磷酸酶染色代表其成骨分化能力,通过实时荧光定量PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(OCN)、骨唾液酸蛋白(BSP)、Runx2等成骨细胞标志基因,过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)和C/EBP成脂分化标志基因。免疫印迹试验(Western blotting)检测ST2细胞内Wnt信号下游β-catenin、BMP信号下游p-smad5蛋白表达水平。结果与DMSO作用的MLO-Y4细胞相比,FK506激动的MLOY4细胞内BMP信号靶基因ID1、ID2上调,但不影响细胞活力。FK506组ST2细胞同DMSO组对比,成骨分化相关标志物,包括ALP、OCN、BSP、Runx2(P<0.001)均显著升高;成脂分化标志物PPARγ及C/EBP表达则显著降低(P<0.001);ST2细胞内β-catenin蛋白表达量上调(P<0.05)。结论BMP信号激动后MLO-Y4细胞上清可以促进ST2细胞成骨分化、抑制成脂分化,其成骨能力增强与细胞内Wnt信号增强有关。
- 赵怡心曾继涛涂小林刘宏
- 关键词：骨形态发生蛋白WNT成脂分化
- 骨细胞Wnt-Jag1信号增加骨髓间充质干细胞和成骨细胞分化
- 目的：Wnt信号的增强和降低,已被突现为影响骨质稳定的重要机制之一。然而,在小鼠模型上发现Wnt信号对成骨细胞的作用是由细胞本质决定,即对成骨细胞发育不同阶段上的系列细胞有不同的作用。在早期,在间充质干细胞及其前期细胞,...
- 涂小林袁威代光明KevinMcAndrewsTerasitaBellido黄伟邓忠良
- 关键词：骨细胞WNT信号间充质干细胞成骨细胞分化
- 体外激活骨细胞Notch信号对骨髓基质细胞成骨分化的影响被引量：3
- 2020年
- 目的探究体外激活骨细胞Notch信号对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化的影响。方法设置Cre重组腺病毒(Ad-Cre)及对照腺病毒GFP(Ad-GFP),分别转染RosaNotch小鼠骨细胞后与野生C57BL/6小鼠BMSCs共培养为Ad-Cre组及Ad-GFP组,设置仅BMSCs为Blank组。碱性磷酸酶染色及生化定量测定碱性磷酸酶(ALP);qPCR检测转染后骨细胞Notch信号靶基因及共培养产物成骨相关标志物、Notch信号配体及成血管相关标志物,茜素红染色检测成骨诱导21 d钙盐沉积水平。结果Ad-Cre成功激活RosaNotch小鼠骨细胞Notch信号,ALP染色及生化定量结果显示Ad-Cre组ALP表达相较Ad-GFP组及Blank组显著降低(P<0.05),Ad-GFP组与Blank组间无统计学差异;qPCR结果显示Ad-Cre组共培养产物成骨标志物ALP、核心结合因子a1(Runx2)、特异性骨转化因子(Ostrix)及Notch配体Dll4 mRNA转录水平相较Ad-GFP组及Blank组显著降低(P<0.05),Jag1 mRNA转录水平显著降低(P<0.05);血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子(hypoxia-inducible factor 1α,HIF1α)、血小板内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31/PECAM-1)及内皮粘蛋白(endomucin,EMCN)mRNA转录水平相较Ad-GFP组及Blank组显著增高(P<0.05);茜素红染色结果显示Ad-Cre组在成骨诱导培养基作用21 d后钙盐沉积水平相较Ad-GFP组及Blank组显著降低。结论体外激活骨细胞Notch信号抑制骨髓基质细胞成骨分化。
- 谢映春涂小林
- 关键词：骨细胞NOTCH信号骨髓基质细胞成骨分化
- 过表达Notch配体Delta-like基因的MLO-Y4骨细胞株的建立及其对骨髓基质细胞成骨分化的作用被引量：4
- 2020年
- 目的建立稳定表达外源Dll1、Dll3、Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株,研究骨细胞Notch信号Delta-like配体Dll1、Dll3、Dll4对骨髓基质细胞成骨分化的影响。方法用过表达Dll1、Dll3、Dll4基因的重组慢病毒液感染MLO-Y4样骨细胞,嘌呤霉素筛选分别稳定表达Dll1、Dll3及Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株。采用实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative,qPCR)对筛选出来的MLO-Y4骨细胞株中Dll1、Dll3及Dll4基因的表达进行鉴定。将3种细胞株分别与野生型小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)进行共培养,采用碱性磷酸酶(ALP)染色及ALP定量检测共培养3 d ALP活性变化;qPCR检测共培养3 d成骨相关标志基因及Notch信号靶基因的表达水平,在使用Notch信号抑制剂DAPT后检测上述指标。结果与阴性对照组相比,Dll1、Dll3及Dll4转染组中Dll1、Dll3及Dll4 mRNA的水平显著增加(P<0.05)。共培养3 d后,骨细胞中Dll4基因的过表达促进了BMSC的ALP活性,与阴性对照组相比有统计学差异(P<0.05)。qPCR结果显示,MLO-Y4-Dll4组的ALP、Runx2、OPN及CollagenⅠ成骨相关标志基因的表达均有所升高(P<0.05),Notch信号靶基因Hey1、HeyL、Hes1及Hes7的表达也有所升高(P<0.05)。而在加入DAPT后,MLO-Y4-Dll4组的ALP活性下降,成骨相关标志基因及Notch信号靶基因的表达有所下降(P<0.05)。结论建立了稳定表达外源Dll1、Dll3或Dll4基因的MLO-Y4骨细胞株,在骨细胞中过表达Dll4能促进骨髓基质细胞的早期成骨分化,经典Notch信号通路在其中可能发挥了重要作用。
- 冯玮谢正松罗岑涂小林
- 关键词：过表达DAPT
- Smad4促进成骨分化的机制研究被引量：4
- 2019年
- 目的探讨Smad4基因促进成骨分化的作用机制。方法采用条件性基因敲除技术Cre/loxp,制备骨细胞特异性敲除Smad4小鼠(Smad4^(ot)cko),小鼠胚胎骨骼透明染色分析胚胎期小鼠长骨生长状况;待小鼠成长至1月龄,X-ray检测突变小鼠与对照组小鼠的骨密度差异;静态骨组织形态学分析检测突变鼠及对照鼠的骨量变化、成骨细胞数量变化等差异;实时荧光定量PCR检测Smad4突变鼠股骨成骨细胞相关因子Runx2、ALP、OSX及OCN;qPCR检测突变鼠股骨破骨吸收标志基因RANKL、OPG,并计算RANKL/OPG比率。结果 Smad4基因敲除小鼠在胚胎期未出现骨生长异常。X线结果显示,1月龄时,与对照组小鼠相比,Smad4突变鼠的骨密度降低(P<0.05),静态骨组织形态学分析表明突变鼠松质骨减少,皮质骨变薄,骨小梁数量减少(P<0.05);Smad4突变鼠成骨细胞标志基因表达量显著降低,成骨细胞的数量明显减少(P<0.05);RANKL作为破骨吸收标志物表达上调、作为其拮抗剂的OPG表达量下调,RANKL/OPG比率增高(P<0.05)。结论 Smad4基因通过促进成骨分化维持骨稳态。
- 刘俊银冯玮涂小林
- 关键词：骨细胞SMAD4成骨分化
- 骨细胞Wnt/β-Catenin通过Notch信号促进BMSCs成骨分化被引量：19
- 2018年
- 目的探讨骨细胞Wnt信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用及其分子机制。方法采用条件性基因敲出Cre/loxp技术制备特异性激活骨细胞Wnt/β-Catenin信号通路的小鼠;体外分离其和野生对照组小鼠的骨细胞,并分别与野生型小鼠骨髓间充质干细胞共培养;碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量、茜素红(Alizarin red)染色检测共培养早期成骨分化和晚期钙盐沉积;Real-Time PCR检测骨细胞Notch信号配体Jag1、Jag2、Dll1、Dll4及共培养后成骨分化特异标志物Runx2、ALP、Osteocalcin的mRNA表达水平。随后于共培养中加入Notch信号通路化学抑制剂DAPT(对照组加DMSO),再次行碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量和Real-Time PCR检测成骨分化特异标志物表达水平。结果 Wnt/β-Catenin激活的骨细胞其自身Jag1、Jag2、Dll4 mRNA表达较对照组骨细胞明显升高(P<0.05),与BMSCs共培养后成骨转录因子Runx2,成骨分化特异标志物ALP、Osteocalcin mRNA的表达较野生型明显升高(P<0.05),钙盐沉积增加。加入DAPT后,骨细胞Wnt激活组成骨转录因子Runx2、ALP、Osteocalcin mRNA的表达明显下降(P<0.05)。结论骨细胞调控骨的代谢,激活其Wnt/β-Catenin信号通路将通过上调Notch信号而促进BMSCs的成骨分化。
- 任磊代光明林枭张东力田冕贺尧许文娟涂小林黄伟
- 关键词：骨细胞WNT/Β-CATENINNOTCH成骨分化
- 骨再生修复中的骨形态发生蛋白信号通路:精准调节与治疗靶点被引量：4
- 2019年
- 背景:骨的修复再生是治疗骨类疾病的难点,骨形态发生蛋白具有强大的调控骨量的功能,是调控骨稳态及骨再生的重要蛋白分子。目的:对骨形态发生蛋白信号通路在骨再生修复中的研究进展进行综述。方法:以"骨形态发生蛋白,Smad分子,组织工程,骨缺损,骨修复,骨类疾病,研究进展,bone morphogenetic protein,Smads,Tissue engineering,Bone defect,bone repair,bone disease,Progress in research"为关键词,检索CNKI、PubMed、Elsevier ScienceDirect、Web of Science等数据库1990至2018年发表的与骨形态发生蛋白信号通路及骨再生修复中相关的文献,将所有文章进行初筛后,对保留的文献进一步的归纳和总结分析。结果与讨论:骨形态发生蛋白分子在长骨、软骨、关节以及肌腱的生长发育中均发挥着重要的作用,骨形态发生蛋白2、7已投入临床上应用,用来治疗骨折不愈合、延迟愈合骨不连以及脊柱融合手术等,但骨形态发生蛋白对于骨再生修复中的强大的调控功能仍然值得进行更深一步的研究。骨形态发生蛋白及其相关分子在促进骨再生中取得了巨大进展,实现对骨形态发生蛋白信号的精准调节可能成为治疗骨类疾病的潜在治疗靶点。
- 刘俊银冯玮谢映春李豫皖曾继涛刘子铭涂小林
- 关键词：骨形态发生蛋白质类骨修复软骨再生骨形态发生蛋白BMP骨不连
- FSHβ在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用研究被引量：3
- 2019年
- 目的探讨卵泡刺激素β亚基(follicle-stimulating hormoneβ-subunit,FSHβ)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化中的作用及可能的机制。方法利用细胞化学染色方法检测处理因素(重组腺病毒或γ促分泌酶抑制剂DAPT)作用于间充质干细胞5 d后细胞中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色的变化。通过实时定量PCR(quantitative real-time PCR,Q-PCR)检测BMP9 mRNA、FSHβmRNA和Notch信号通路靶基因(Hey1) mRNA的表达水平。利用茜素红S(alizarin red S,ARS)染色检测腺病毒感染间充质干细胞21 d后细胞中钙盐的沉积情况。结果 FSHβ处理组ALP表达较GFP对照组无明显改变,BMP9处理组ALP表达较GFP对照组明显增加,而BMP9与FSHβ联合处理组ALP表达较BMP9处理组显著增加。另外,BMP9处理组晚期成骨标志物钙盐结节、Notch信号靶基因Hey1 mRNA表达水平较GFP对照组显著增加(P<0.01),而BMP9与FSHβ联合处理组较BMP9处理组表达显著增加(P<0.01)。使用药物DAPT抑制Notch信号后,BMP9与DAPT联合处理组较BMP9单独处理组,ALP染色、Hey1 mRNA表达显著降低(P<0.05);且BMP9+FSHβ+DAPT联合处理组较BMP9+FSHβ联合处理组ALP染色、Hey1 mRNA表达也显著降低(P<0.05)。结论 FSHβ可增强BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化,Notch信号通路可能在其中发挥重要作用。
- 成亚琳曾继涛黄敏刘俊银涂小林刘宏
- 关键词：卵泡刺激素间充质干细胞NOTCHDAPT
- 铁过载对Wnt信号诱导的ST2细胞成骨分化的作用及机制被引量：2
- 2021年
- 该研究探究铁过载对Wnt信号诱导的小鼠骨髓基质细胞(ST2)成骨分化的作用及其可能的机制。采用柠檬酸铁铵(FAC)模拟铁过载微环境,用碱性磷酸酶(ALP)染色及生化定量检测成骨分化水平,qRT-PCR检测成骨分化标志基因Alp、Runx2、Osx、Col1以及Wnt信号靶基因Smad6、CyclinD1、Lef1、BMP4的mRNA表达水平,免疫荧光法检测β-catenin入核情况。结果显示,铁过载剂量依赖性抑制Wnt信号诱导的ST2成骨分化,同时显著降低Wnt信号诱导的成骨分化标志基因及Wnt信号靶基因的表达(P<0.05),且铁过载抑制Wnt信号诱导的β-catenin入核。综上所述,铁过载抑制Wnt信号诱导的ST2细胞成骨基因和Wnt靶基因的表达,并通过抑制β-catenin入核而抑制ST2细胞成骨分化。
- 罗岑武异洵刘忻钰涂小林
- 关键词：铁过载WNT信号成骨分化
- 全反式维甲酸与VEGF联合应用诱导小鼠胚胎成纤维细胞定向成骨分化被引量：4
- 2020年
- 目的研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)与VEGF联合应用对于小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)定向成骨分化的影响。方法取NIH孕鼠(孕12~15 d)子宫内的胎鼠,去掉头、心、肝等器官后,采用胰蛋白酶消化贴壁法分离培养MEFs。利用HEK-293细胞采用反复冻融法扩增重组腺病毒红色荧光蛋白(recombinant adenovirus-red fluorescent protein,Ad-RFP)及Ad-VEGF。采用ALP染色和ALP定量检测法检测单独ATRA或VEGF以及ATRA和VEGF联合应用培养MEFs第3、5天ALP活性变化。将第3~4代MEFs分为A、B、C、D 4组,分别加入DMSO+Ad-RFP、ATRA、Ad-VEGF、ATRA+Ad-VEGF。实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测第3、7天成骨相关标志物ALP、Ⅰ型胶原、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)及成血管相关标志物VEGF、血管生成素1(angiopoietin 1,ANGPT1)、内皮黏蛋白(endomucin,EMCN)mRNA表达;免疫组织化学染色检测各组第3、5、7天OPN、VEGF蛋白表达;茜素红染色检测各组成骨诱导14、21 d钙盐沉积水平。取15只4~6周龄无胸腺雌性裸鼠,随机分为3组,每组5只,分别于背侧与腹侧皮下注射经ATRA、Ad-VEGF、ATRA+Ad-VEGF处理后的MEFs。植入后5周行X线片观察、大体观察及组织学染色(Masson、HE及番红O-固绿染色),观察各组裸鼠体内异位成骨情况。结果成功分离培养MEFs;扩增后的Ad-RFP及Ad-VEGF成功转染MEFs,转染效率约为50%和20%。ALP活性检测示,单独使用ATRA或VEGF均能增强MEFs中ALP活性,且ATRA作用较VEGF强;ATRA和VEGF联合使用较单独使用显著增强了MEFs中ALP活性(P<0.05)。qRT-PCR检测示,ATRA联合Ad-VEGF使用上调了早期成骨分化相关标志物ALP、OPN、Ⅰ型胶原mRNA相对表达量(P<0.05);7 d时成血管相关标志物VEGF、EMCN及ANGPT1 mRNA相对表达量有所上升(P<0.05)。免疫组织化学染色示,ATRA联合Ad-VEGF不仅增强了OPN蛋白表达,VEGF蛋白表达在第7天也有所�
- 冯玮涂小林
- 关键词：全反式维甲酸VEGF小鼠胚胎成纤维细胞成骨分化
