雷燕
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向CGI-100基因shRNA干扰载体的构建与鉴定
- 2008年
- 目的:构建靶向CGI-100基因的RNAi表达载体并鉴定其抑制效率。方法:设计及化学合成3对靶向CGI-100基因的短发夹结构寡核苷酸,经退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切的PGenesil-1质粒连接,构建表达shRNA的重组质粒,用脂质体2000转染到K562细胞中进行表达,经RT-PCR和斑点杂交检测转染前后CGI-100基因表达的变化。结果:经DNA测序证实3对靶向CGI-100基因的RNA干扰表达载体PGenesil-1-CGI-100构建成功,其中第1对PGenesil-1-CGI-100在mRNA水平抑制白血病K562细胞中CGI-100基因表达的效率最高,达54%。结论:成功构建针对CGI-100基因的RNA干扰的表达载体,并筛选出1对抑制效率较高的重组干扰载体,为进一步研究K562细胞中CGI-100基因的功能奠定基础。
- 汪永强张彦雷燕
- 关键词：RNA干扰SHRNAK562细胞
- 真核蛋白质中G-patch结构域的结构和功能研究被引量：1
- 2008年
- G-patch是广泛存在真核生物蛋白质中的保守结构域,含有六个高度保守的甘氨酸残基,推测它是一种RNA结合结构域,其功能与RNA代谢有关。
- 雷燕张彦
- 针对IER3IP1基因的shRNA真核表达载体的构建和鉴定
- 2009年
- 目的:构建特异性针对IER3IP1基因的shRNA(Short Hairpin RNA)的真核表达载体,观察对IER3IP1基因表达的沉默作用,筛选出抑制效果较好的干扰片段。方法:针对IER3IP1基因,设计合成2对特异性DNA片段以及1对无关序列的阴性对照DNA片断,将它们插入真核表达载体pGenesil-1中构建重组质粒,质粒转染L02正常肝脏细胞株后,以半定量RT-PCR法检测转染后24、48、72hIER3IP1基因的抑制效果。结果:成功构建2个特异性针对IER3IP1的shRNA真核表达载体;所构建的载体中有1对能够特异性的降低L02细胞中IER3IP1的mRNA表达水平,且干扰效果显著,抑制率较高,与空载对照组比在转染后24、48、72h抑制率分别为64%、79%、69%。结论:设计构建的真核表达载体可以特异性干扰IER3IP1基因的表达,为进一步研究IER3IP1基因的功能奠定了基础。
- 雷燕张彦汪永强
- 关键词：RNA干扰
- 大鼠缺血再灌注损伤肢体骨骼肌形态和组织中细胞因子变化及高压氧的干预被引量：7
- 2008年
- 背景：近年有学者提出高压氧对缺血再灌注损伤氧自由基的清除有正性作用，并能提高三磷酸腺苷合酶的活性，调节钠钙平衡，抑制钙内流，从而有效保护细胞，减轻缺血再灌注损伤。目的：从骨骼肌的病理和细胞因子改变角度，观察高压氧对不同时相肢体缺血再灌注的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-04/09在重庆医科大学实验动物中心完成。材料：健康SD大鼠108只，体质量250～300g。随机分为空白对照组12只、缺血再灌注组48只与高压氧组48只，雌雄对等。方法：空白对照组不做缺血再灌注；缺血再灌注组和高压氧组持续缺血8h，分别行再灌注0，4，24，72h。高压氧组造模后连续5d给予高压氧处理。主要观察指标：检测各组大鼠组织萃取液中自细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素8、组织纤溶酶原激活物、组织纤溶酶原激活物抑制剂1含量：以大鼠腓肠肌制备电镜和光镜标本，观察其骨骼肌微血管超微结构和组织形态变化；结果：①再灌注后各个时点，高压氧组组织纤溶酶原激活物含量较缺血再灌注组均显著升高：白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素8、组织纤溶酶原激活物抑制剂1含量较缺血再灌注组均显著降低（P〈0．05）。②再灌注24h，与缺血再灌注组比较，高压氧治疗组骨骼肌细胞肿胀及炎性细胞浸润均较轻，微血管内几乎无微血栓形成，肌小节极少断裂，质膜较少破坏，少数线粒体肿胀，髓样结构形成。结论：损伤后72h之内高压氧对缺血再灌注肢体产生了较显著的保护作用，该作用可能与抑制炎症因子激活释放，促进纤溶系统激活有关。
- 高博任为张彦宋红汪永强雷燕赵渝
- 关键词：再灌注损伤细胞因子高压氧
- shRNA干扰IER3IP1基因表达对K562细胞增殖和红系分化的影响
- 2009年
- 目的探讨靶向干扰IER3IP1基因对K562细胞增殖和红系分化的影响。方法针对IER3IP1基因设计并构建小发夹状（shRNA）真核表达载体，转染K562细胞后用RT—PCR方法鉴定沉默效果。采用MTT实验、联苯胺染色、光镜和电镜观察、流式细胞术以及RT—PCR，观察抑制IER3IP1基因表达后对1（562细胞的影响；采用0．2μmol／L伊马替尼诱导K562细胞2d，观察诱导分化过程中IER3IP1基因表达变化情况，抑制IER3IPl基因表达后对红系分化相关基因Gfi—1B、GPA和γ—globin以及细胞表面GPA蛋白表达的影响。结果成功构建针对IER3IP1基因的shRNA真核表达载体，转染至K562细胞中，该基因mRNA表达水平明显降低，抑制率达76％（P〈0．01）。与对照组细胞相比，K562-shRNA—IER3IP1组bcr—ablmRNA表达升高（P〈0．05）；MTT检测结果显示细胞增殖能力增强（P〈0．01）；流式细胞术检测结果显示S期细胞比例增加，G0／G1期细胞比例减少（P〈0．05）；电镜可见细胞常染色质增加、异染色质减少，内质网部分扩张，囊泡样结构滞留。0．2μmol／L伊马替尼作用48h后，K562-shRNA—IER3IP1组联苯胺染色阳性率由作用前的（44．7±2．5）％降低至（22．7±1．5）％（P〈0．01），且红系分化相关基因Gfi-1B、GPA和γ—globin的mRNA表达水平明显降低，细胞表面GPA蛋白表达水平降低。同时伊马替尼作用过程中IER3IP1基因在作用3h时表达明显升高，6h时降低，12～48h表达水平基本不变。结论干扰IER3IP1基因表达后，K562细胞增殖加快，红系分化过程受阻，提示该基因可能在K562细胞增殖和向红系分化过程中发挥作用。
- 雷燕张彦汪永强
- 关键词：K562细胞RNA干扰细胞增殖细胞分化
