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郜原: 作品数：16 被引量：16H指数：3; 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国际科技合作与交流专项项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>

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猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达: 2011年; 【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段,与预期结果一致;原核表达载体pGEX-PKR和真核表达载体pDsRed1-PKR经双酶切和核酸测序分析,表明载体构建成功;SDS-PAGE检测结果表明,pGEX-PKR重组质粒在大肠杆菌中成功表达;Westernblot检测到pDsRed1-PKR重组质粒在SUVECs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结PKR基因,并在体外初步表达成功。; 孙岩胡健温俊歌郜原薄联锋徐志坤吴耀丽张德礼; 关键词：克隆原核表达真核表达

猪圆环病毒2型抗体快速检测层析试纸条及制备方法: 本发明涉及一种猪圆环病毒优势抗原表位肽建立快速检测层析试纸条及制备方法，可用于快速检测猪血液或血清中的抗体。试纸条包括支撑层，以及在所述支撑层上依次设置的加样层、金标蛋白释放垫、检测层和吸收层。金标抗体释放垫包埋有胶体金...; 孙世琪张韵郭慧琛智晓莹魏衍全常艳燕郜原; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒相关猪microRNA的初步筛选: 2012年; 本试验旨在初步筛选出与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染相关的猪microRNA(miRNA)。采用生物信息学方法预测可能与PRRSV 3′非编码区(3′utr)产生相互作用的猪miRNA,构建PRRSV 3′utr的双荧光素酶报告基因载体psi-CHECK-utr,同时合成预测到的miRNA(ssc-miR-323、ssc-miR-105-1)及其相应的抑制物,共转染猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVEC),检测双荧光素酶活性。结果发现,ssc-miR-323与psiCHECK-utr共转染后,荧光比率略有升高,ssc-miR-105-1与psiCHECK-utr共转染后,荧光比率降低。初步判定ssc-miR-323对PRRSV 3′utr没有抑制作用,而ssc-miR-105-1对PRRSV3′utr有一定的抑制作用。; 郜原薄联锋武小椿孙柏温俊歌孙岩徐志坤张德礼

猪Akirin2基因的定位及其影响IL-1β和IL-6 mRNA表达的研究被引量：4: 2011年; 本研究旨在研究猪新天然免疫相关基因Akirin2所表达的蛋白在细胞中的定位,以及在受到外源刺激物LPS刺激时,对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达的影响。本试验用实验室构建好的pEGFP-Akirin2真核表达载体转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),用激光共聚焦显微镜分析Akirin2在SUVEC的定位,并用LPS作为外源刺激物刺激转染Akirin2基因的细胞,荧光实时定量分析细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达量的变化。结果表明,Akirin2基因编码的蛋白严格定位于细胞核之内,并在核仁区有明显表达,在LPS刺激后,Akirin2基因对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达量都具有明显上调作用。本研究证实了Akirin2蛋白的亚细胞定位及其对细胞因子表达的影响,为Akirin2基因的作用机制的进一步研究奠定了基础。; 徐志坤薄联峰温俊歌孙岩郜原吴江张德礼; 关键词：LPS 细胞定位细胞因子 QRT-PCR

口蹄疫病毒样颗粒在作为重组质粒运载载体中的应用: 本发明公开了口蹄疫病毒样颗粒(VLPs)在作为重组质粒运载载体中的应用。本发明尝试将口蹄疫VLPs作为质粒运载载体，应用其潜在的运载能力和控释特性，将Asia1型口蹄疫病毒重组质粒成功运载并能在动物体内释放，最终刺激机体...; 郭慧琛孙世琪郜原靳野魏衍全张韵刘湘涛李杰林马军武冯霞; 文献传递

CD44受体分子对口蹄疫病毒感染的影响被引量：4: 2016年; 为探索CD44分子在口蹄疫病毒(FMDV)感染中的作用,揭示FMDV的感染机制,为开发阻断FMDV入侵的药物和高效疫苗提供新靶点。采用Western-blot、TCID50检测、激光共聚焦显微镜检测等方法,检测FMDV感染BHK21细胞后CD44的表达水平,以及用抑制剂MβCD抑制CD44表达后对FMDV增殖的影响。Western-blot结果显示,FMDV感染BHK21细胞后,CD44的表达量显著上升(P<0.05);用MβCD抑制内源性CD44表达后,FMDV的增殖水平显著降低(P<0.05)。TCID50检测结果显示,用MβCD抑制CD44表达后,FMDV的表达显著降低(P<0.05)。激光共聚焦结果显示,FMDV感染BHK21细胞后CD44的表达量上升。表明,CD44分子参与FMDV的感染过程,可能作为调控分子直接或间接参与FMDV的入侵过程,仍需要进一步研究。; 谷玲军郭慧琛郜原韩世充孙世琪杨玉莹; 关键词：CD44 TCID50 WESTERN-BLOT

猪新基因P58^IPK的分子克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3: 2011年; 目的:分子克隆出猪P58IPK新基因,制备其多克隆抗体,为下一步研究流感病毒与宿主相互作用机制提供条件。方法:根据猪EST数据库,利用生物信息学方法,电子克隆猪P58IPK新基因;采用RT-PCR方法从猪淋巴组织分子克隆P58IPK基因完整开放阅读框(ORF),全长1 518 bp,编码505个氨基酸(GenBank登录号:HQ287801),并对其进行初步生物信息学分析;构建P58IPK原核表达载体pET-P58IPK,诱导表达并纯化重组的his-P58IPK融合蛋白,后免疫兔子制备多克隆抗体。结果:成功制备P58IPK多克隆抗体,通过双向琼脂扩散实验检测抗体有活性,ELISA鉴定血清中多抗效价达到1∶20 000,Western blot与免疫荧光检测反应特异性良好。结论:成功克隆猪新基因P58IPK,并制备了其多克隆抗体。; 温俊歌宋豪孙岩郜原徐志坤薄联锋张德礼; 关键词：多克隆抗体 WESTERN BLOT 免疫荧光

Thr-Ser-Ser位点对猪BCL10募集功能的影响被引量：1: 2011年; 在完整克隆出猪BCL10基因的基础上,用大引物PCR法构建3个真核表达载体:pEGFP-B(完整猪BCL10)载体、pEGFP-D(缺失CARD结构域)载体和pEGFP-P(缺失Thr-Ser-Ser位点)载体,转染猪血管内皮细胞(SU-VEC),观察其表达情况,以此研究Thr-Ser-Ser位点(富含TS区)对猪BCL10募集功能的影响。结果显示,pEGFP-B仅在胞质中表达,并呈短棒状,而pEGFP-D与pEGFP-P则在胞质和核内均有表达。表明CARD结构域参与猪BCL10募集过程,且Thr-Ser-Ser为CARD结构域中关键氨基酸位点,这为进一步研究猪BCL10功能和作用机制奠定了基础。; 薄联锋徐志坤郜原孙岩温俊歌张德礼

维生素C促进小鼠胚胎干细胞多能性维持的研究: 胚胎干细胞（Embryonic stem cells, ESCs）主要来源于胚胎囊胚期的内细胞团，具有分化的多潜能性和自我更新能力。转录因子调控网络和表观修饰调节，包括microRNA（miRNA）调控，在ESC的多能性...; 郜原; 关键词：维生素C 胚胎干细胞 MIRNA 多潜能性; 文献传递