罗凯
- 作品数：27 被引量：51H指数：4
- 供职机构：广州医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省中医药管理局基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EGFR基因T790M突变COLD-PCR扩增体系的Tc值筛选被引量：1
- 2016年
- 目的筛选表皮生长因子受体(EGFR)基因T790M突变PCR扩增体系的Tc值并初步建立具T790M突变富集效果的低变性温度下的复合聚合酶链反应(COLD-PCR)体系,同时探讨Tc值的筛选策略以及注意事项。方法以肺癌MSTO-211H、NCI-H1975细胞为T790M突变野生型和突变型标准样品,通过目标片段关键变性温度筛选实验、COLD-PCR反应模式比较实验以及Tc值的验证实验,确定COLD-PCR体系的Tc值并初步验证其效果。结果本实验体系T790M突变的目的扩增片段关键变性温度低于野生型片段,据此体系反应模式选择为快速COLD-PCR反应模式,同时确定Tc值为89.6℃,验证实验显示本体系可检出1%的T790M突变,较常规PCR提高5倍。至此T790M突变富集COLD-PCR扩增体系已成功建立。结论成功完成体系Tc值的筛选并建立T790M突变富集COLD-PCR扩增体系。
- 罗凯王倩仇秦威贺智敏
- 关键词：表皮生长因子受体基因
- 人CDK14基因表达荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2017年
- 目的建立一种人细胞周期蛋白依赖性激酶14(CDK14)基因表达荧光定量PCR检测方法。方法利用Trizol法提取不同人肺癌细胞株中总RNA,以β-Actin和CDK14分别为内参和目的基因,分别设计特异性扩增引物,建立人CDK14基因表达荧光定量PCR检测系统并评估其检测性能。同时将其应用于不同细胞系siRNA干扰前后的CDK14基因相对表达水平检测。结果经电泳分析、熔解曲线、产物测序确认人CDK14基因表达荧光定量PCR检测系统已建立,其特异性良好,重复性佳(CV=7.13%),线性范围较宽(CDK14与β-Actin分别在Ct值范围22.47~32.96与15.14~27,55间具有良好的相关性,r^2=0.9844。)。利用该体系检测发现:在HCC827 D5和H1650细胞中CDK14基因高表达;在1~3号干扰片段中,1号片段为有效片段。结论人CDK14基因表达荧光定量PCR检测方法已成功建立。
- 罗凯黎谢梦丹石兴源贾晓婷王倩邓敏仇秦威张志杰贺智敏
- 关键词：基因实时荧光定量PCR
- 185例华南地区非小细胞肺癌EGFR基因突变分析被引量：8
- 2012年
- 目的探讨华南地区非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变特点及与临床特征的关系。方法收集本院185例NSCLC肿瘤组织，分别提取DNA，采用荧光PCR法扩增EGFR基因第18、19、20、21号外显子，对扩增片段进行DNA正反向测序并分析。结果185例NSCLC中，62例（33．5％）EGFR基因突变，其中18、19、20、21外显子突变分别为2例、41例、5例、14例；共见突变类型16种，热点突变类型为19外显子DelL747→P752（P753S）（构成比8．1％）、DelE746→A750（构成比45．1％）和21外显子L858R（构成比22．6％）；其中4例19外显子突变正、反向测序结果不一致。见20外显子2361G→A沉默突变（28．1％）；女性突变率显著高于男性（46．2％vs24．3％，X2=9．670，P=0．002）。不吸烟者突变率高于吸烟者（41．4％vs17．1％，X2=7．380，P=0．007）。腺癌患者突变率高于鳞癌患者（38．3％vs6．3％，X2=6．426，P=0．011）。临床Ⅲ期患者突变率显著低于临床Ⅱ期、Ⅳ期患者（10．8％vs53．8％，X2=8．026，P=0．003；10．8％vs41．3％，X2=9．518，P=0．002）。同时，未发现EGFR基因突变率与年龄相关。结论华南地区NSCLC患者EGFR基因突变以19、21外显子突变为主。突变率以女性、不吸烟、腺癌者较高。
- 罗凯王金龙王倩赵健周明邹青峰谭小军贾小婷贺智敏
- 关键词：受体突变
- DNA直接测序技术检测EGFR基因及突变分析
- 2013年
- 目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的情况及EGFRTKI的治疗效果。方法:从94例晚期NSCLC患者的肿瘤组织中提取DNA,采用DNA直接测序技术检测EGFR基因18、19、20、21外显子的突变情况。对EGFR基因突变可评估患者采用TKI口服治疗(吉非替尼250 mg/d、厄洛替尼150mg/d),评价客观有效率(RR)、疾病控制率(DCR)及无疾病进展时间。结果:94例患者中39例(41.5%)存在EGFR基因突变,其中27例外显子19突变,2例外显子20突变,9例外显子21突变、1例外显子18突变。女性患者突变率显著高于男性(56.1%vs 30.2%,P<0.05);腺癌患者突变率高于非腺癌患者(48%vs 15.8%,P<0.05);不吸烟者突变率显著高于吸烟者(50.8%vs20.7%,P<0.05)。16例患者口服TKI后部分缓解5例、疾病稳定7例、疾病进展PD4例,客观有效率为31.2%,疾病控制率为75.0%,截至随访结束,仍有14例患者生存,无疾病进展时间为(11.31±4.44)个月,1年生存率为43.8%。结论:DNA直接测序检测晚期NSCLC患者EGFR基因突变具有高度敏感性,以EGFR基因突变结果为依据,应用TKI治疗晚期NSCLC疗效明显。
- 容毓罗凯薛兴阳贺智敏
- 关键词：表皮生长因子受体基因测序基因突变
- 姜炭在宫颈癌放射治疗所致的放射性直肠炎中的止血作用及机制研究
- 2014年
- 放射性直肠炎是妇科肿瘤及其他盆腔、腹腔、腹膜后恶性肿瘤接受放射治疗后常见的急性和慢性并发症。急性期多在放射治疗后1～2周，可见腹泻、里急后重、便血等症状；慢性放射性直肠炎是指由急性放射性直肠炎迁延而来或直接照射半年后引起间质纤维化，闭塞性血管内膜炎而引起局部组织缺血所致，多发生在放射治疗的6个月至数年，可出现便血，甚至合并直肠宫颈瘘或直肠阴道瘘，给患者生活造成很大痛苦与不便。它是盆腹部肿瘤放射治疗常见并发症之一，可造成永久性迁延不愈的严重放射性损伤。而放射治疗是宫颈癌的主要治疗方法，5年生存率50％，随着放射剂量的增加，放射线可直接损害肠黏膜细胞而出现放射性直肠炎，给患者带来很大的痛苦，严重影响患者的生活质量。本课题拟通过姜炭在放射性直肠炎动物模型上止血及止泻作用机制研究的基础上，进一步探讨宫颈癌常规放射治疗后出现放射性直肠炎，并应用于放射性直肠炎患者在常规治疗方案基础上联合姜炭口服同时结合灌肠，观察其对止血及止泻效果，期望对提高宫颈癌放射治疗后直肠炎患者治愈率提高起到一定的推进作用。对于减轻患者的痛苦，提高患者的生存质量具有极其重要的意义。
- 邹红玲陈丽贤罗凯
- 关键词：急性放射性直肠炎止血作用宫颈癌姜炭腹膜后恶性肿瘤局部组织缺血
- ErbB3、IGF1R在乳腺癌Herceptin耐受中的作用及机制
- 2017年
- 目的探讨与表皮生长因子受体3（ErbB3）、胰岛素样生长因子I受体（IGFIR）在乳腺癌Herceptin耐受中的作用机制。方法在Hereeptin敏感的ErbB2阳性乳腺癌细胞株SKBR3、BT474中外源性增加HRG（表皮生长因子受体ErbB3配体）、IGF2（胰岛素样生长因子I受体IGF1R配体）后，用四唑氮化合物（MTS）法检测细胞对Herceptin的敏感性；在Herceptin耐受的乳腺癌细胞SKBR3／POOL2、BT474／HR20中采用HRG、IGF2中和抗体阻断其与相应的受体结合，MTS法检测细胞对Herceptin的敏感性。在ErbB2阳性乳腺癌细胞BT474中外源性加入HRG、IGF2，免疫共沉淀及蛋白印迹检测与ErbB2蛋白结合的ErbB3及IGF1R蛋白表达量的改变。结果在Herceptin敏感的乳腺癌细胞中，HRG、IGF2处理组较对照组细胞对Herceptin的敏感性明显下降；而在Herceptin耐受的乳腺癌细胞中，HRG、IGF2抗体处理组较对照组对Herceptin的敏感性增加。在ErbB2阳性乳腺癌细胞中加入HRG、IGF2后，与ErbB2结合的ErbB3以及IGF1R的表达增加。结论ErbB2／ErbB3及ErbB2／IGF1R异源二聚体的形成增加了乳腺癌对ErbB2靶向药物Herceptin的耐受。
- 张瑞鑫邓敏柳柏林罗凯贺智敏
- 关键词：受体受体药物耐受性
- 一种EGFR基因突变检测方法的建立及初步应用被引量：4
- 2014年
- 目的建立一种表皮生长因子受体(EGFR)基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并初步探讨其临床应用价值。方法以EGFR基因热点突变区域19、21外显子为研究位点设计特异性扩增、测序引物,利用已知野生型、突变型样品,以TA克隆技术构建相应质粒作为标准品,建立EGFR基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并进行方法学和应用评估。结果成功构建了EGFR基因19、21外显子野生型、突变型质粒。建立了EGFR基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,该方法灵敏度高(101 copy/μL),重复性好(19、21外显子实时荧光定量PCR部分批内、批间变异系数分别为1.42%、3.52%和0.97%、2.44%)。该法与传统Sanger测序法同时检测20份临床样品,结果完全相符。结论成功建立了可用于临床样品检测的EGFR基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法。
- 王倩罗凯
- 关键词：突变基因测序实时荧光定量聚合酶链反应
- 人非小细胞肺癌NCI—H1975细胞的异质性研究
- 2016年
- 目的探讨人非小细胞肺癌NCI-H1975细胞的异质性及其与药物反应性的关系。方法利用有限稀释法获得NCI-H1975细胞单克隆化子细胞，并对母细胞和部分单克隆化子细胞行表型、药物反应性和表皮生长因子受体（EGFR）基因突变检测，分析NCI-H1975细胞的克隆异质性特征及其与药物反应性的关系。结果获得13个单克隆化的NCI-H1975子细胞，与母细胞相比，各子细胞在细胞增殖能力、吉非替尼敏感性和顺铂敏感性方面差异有统计学意义（P〈0．05），在EGFR基因突变状态方面未见差异。结论NCI-H1975细胞存在细胞增殖能力等表型指标和药物反应性指标的异质性，并与药物治疗的反应性和耐药相关。
- 罗凯王倩仇秦威彭聪邓应根黎谢梦丹贾小婷张志杰郑国培谷依学贺智敏
- 关键词：遗传异质性生物学标记药理学
- CEA电化学发光免疫分析法的建立被引量：4
- 2012年
- 目的建立人癌胚抗原(CEA)的电化学发光免疫分析法(ECLIA)。方法生物素标记的CEA McAb、钌复合物标记配对的CEA McAb、链霉亲和素包被的磁性微粒组成CEA ECLIA试剂,用ECLIA仪检测CEA并做方法学评价。用本法与进口的同类ECLIA试剂对119例结直肠癌、150例肺癌、45例胃癌、32例胰腺癌和34例肝细胞癌患者的血清CEA检测结果进行分析。调查218名志愿者血清CEA正常参考值。结果本法检测CEA的批内CV为1.6%～7.1%,批间CV为2.3%～11.7%,灵敏度为0.2 ng/mL。与CA19-9和AFP无交叉反应。自建ECLIA检测CEA浓度范围为0.2～1000.0ng/mL,正常参考值低于5.6ng/mL。结论自建CEA ECLIA与进口试剂比较(r=0.9641,P<0.05),正常参考范围接近进口同类方法。具备产业化的潜能。
- 王金龙叶伟成邹红玲罗凯陈舒颖
- 关键词：癌胚抗原电化学免疫分析电化学发光免疫分析
- 微阵列芯片Meta分析序列相似家族72成员A mRNA水平与乳腺癌预后关系被引量：1
- 2017年
- 目的探讨序列相似家族72成员A(FAM72A)mRNA表达水平与乳腺癌患者预后的关系。方法在NCBI的GEO数据库中检索乳腺癌基因表达谱的数据集,对数据进行预处理后,对数据集进行标准化合并。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用单因素Cox模型分析乳腺癌患者以及不同分型乳腺癌患者的总体无事件生存期与FAM72A mRNA表达的相关性。结果总共纳入10个微阵列数据集,包含1 720例乳腺癌患者癌组织样本。在所有乳腺癌患者中,FAM72A mRNA高表达者无事件生存期低于FAM72A mRNA低表达者(P<0.05);在雌激素受体阳性乳腺癌患者中,FAM72A mRNA高表达者无事件生存期低于FAM72A mRNA低表达者(P<0.05);在乳腺管腔B型患者中,FAM72A mRNA高表达者无事件生存期低于FAM72A mRNA低表达者(P<0.05)。结论 FAM72可以作为预测乳腺管腔B型乳腺癌患者预后的潜在标志物。
- 仇秦威余丽华罗凯张志杰黎谢梦丹贺智敏
- 关键词：乳腺癌微阵列
