王静
- 作品数：36 被引量：32H指数：3
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金高层次人才科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学医药卫生生物学更多>>
- 绵羊NDRG1基因表达和干扰载体的构建及验证被引量：1
- 2022年
- 为研究NDRG1基因在绵羊生长繁殖中的功能,本实验通过克隆NDRG1基因编码区并分别构建过表达和干扰载体,在细胞水平对其功能进行验证。利用RT-PCR扩增绵羊NDRG1基因CDs区,将其克隆至pcDNA3.1(+)载体构建重组表达载体,设计并构建针对NDRG1CDs区干扰载体,利用内切酶消化法对相关质粒进行鉴定。将构建成功的重组载体转染到HEK293T细胞中,分别利用RT-qPCR和Western Blot方法检测其mRNA和蛋白表达量,确认载体功能。结果显示,NDRG1基因克隆片段为1378 bp,与已发布预测的绵羊NDRG1基因进行比对显示在第1031核苷酸位点发生了G-A突变,氨基酸比对结果显示其同源性为100%。酶切鉴定结果显示,NDRG1表达载体和干扰载体构建成功。RT-qPCR与WesternBlot结果表明,构建的重组载体可介导NDRG1基因在HEK 293T细胞中极显著增高,构建的干扰载体可显著降低NDRG1基因表达水平,其中NDRG1-shRNA3干扰效果极显著且高达90%。本实验成功克隆绵羊NDRG1基因,构建针对该基因的表达载体和干扰载体,并在细胞水平验证其功能,为深入研究NDRG1基因在绵羊细胞中的功能提供基础。
- 龙德智孙楠祯郝科兴陈慧慧王静胡广东
- 关键词：NDRG1基因绵羊
- 益母草碱对绵羊精液低温保存效果的影响
- 2023年
- 【目的】探究益母草碱对绵羊精液低温保存效果的影响,为实际生产中制备适宜的绵羊精液低温保存稀释液提供理论依据。【方法】采用假阴道法采集3只多浪羊公羊精液,在精液低温保存稀释液中分别添加0(对照)、20、40、60、80和100μmol/mL益母草碱,检测精液低温保存过程中精子活率、顶体完整率和质膜完整率等精液品质指标以及总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量等抗氧化指标,筛选精液保存过程中最适益母草碱浓度;添加最适浓度益母草碱后,利用实时荧光定量PCR法检测精液低温保存过程中TNF受体超家族成员6(Fas)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2关联X蛋白(Bax)等相关凋亡基因表达量;采用子宫颈口内输精方式完成两次输精,统计母羊受胎率。【结果】与对照组相比,低温保存48 h,40μmol/mL益母草碱组精子活率、质膜完整率、顶体完整率及T-AOC水平、SOD、GSH-Px、CAT活性均显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05);低温保存144 h,40μmol/mL益母草碱组各项指标与其他益母草碱添加组相比差异显著(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,40μmol/mL益母草碱组Fas、Caspase-3和Bax基因表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2基因表达量显著升高(P<0.05)。添加40μmol/mL益母草碱的低温保存精液输精后,母羊受胎率为75%,达到鲜精阴道输精的平均水平。【结论】低温保存精液稀释液中添加40μmol/mL益母草碱后可明显改善低温保存多浪羊精液品质,提升其抗氧化能力,同时起到抗凋亡作用;含40μmol/mL益母草碱低温保存72 h的精液输精后母羊受胎率为75%,达到了鲜精阴道输精平均水平。
- 李智星卿育洪李志远曹少奇高新梅曾维斌王静胡广东
- 关键词：益母草碱精液品质抗氧化能力受胎率
- 早期断奶转群对仔猪行为、生长性能和血液指标的影响被引量：3
- 2022年
- 【目的】试验旨在研究早期断奶转群对仔猪行为、生长性能和血液指标的影响,探寻适宜的断奶转群模式,为改善仔猪福利水平提供参考。【方法】选择体况良好、体重相近(6.98 kg±0.63 kg)的21日龄杜×长×大三元杂交仔猪216头(公母各半),随机分为3组,每组6窝,每窝12头。Ⅰ组为对照组,仔猪不断奶不转群;Ⅱ组为断奶转群组,仔猪既断奶又转群;Ⅲ组为断奶非转群组,仔猪只断奶不转群。21日龄时实施早期断奶,试验期14 d。试验期间观察、统计仔猪行为表现、皮肤损伤、死亡率和腹泻率,采集仔猪血液,测定血清皮质醇和免疫指标。【结果】与对照组相比,Ⅱ和Ⅲ组仔猪采食、休息、玩耍行为极显著下降(P<0.01),探究、独处、哀叫、抱团、攻击和恐人行为极显著上升(P<0.01)。试验处理后第3~5天,Ⅱ组仔猪的皮肤损伤程度极显著高于对照组(P<0.01);Ⅱ组仔猪35日龄体重和平均日增重显著低于对照组(P<0.05),腹泻率极显著高于对照组和Ⅲ组(P<0.01)。各组仔猪死亡率由低到高的顺序为:Ⅰ组(0)<Ⅲ组(1.32%)<Ⅱ组(4%)。在试验处理当天,Ⅱ组仔猪的皮质醇浓度极显著高于对照组(P<0.01),Ⅲ组皮质醇浓度在等3、5天时极显著高于对照组(P<0.01)而极显著低于Ⅱ组(P<0.01)。Ⅱ和Ⅲ组仔猪在第7天免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白G(IgG)浓度极显著低于对照组(P<0.01),白介素-12(IL-12)和干扰素-γ(IFN-γ)浓度与对照组无显著差异(P>0.05)。【结论】早期断奶转群不仅影响仔猪的行为表现、皮质醇浓度和免疫力水平,而且导致生长性能下降,皮肤损伤程度、死亡率和腹泻率上升,但早期仅断奶不转群仔猪的应激反应相对较低,可减少对仔猪的不利影响。
- 杨志维李智星黄涛郝科兴王静胡广东
- 关键词：断奶仔猪转群应激
- 犊牛源肠外致病性大肠杆菌分离鉴定、致病性及耐药性分析
- 2023年
- 【目的】确定新疆喀什地区某规模化牛场致犊牛死亡的细菌性病原体及其生物学特性,为该地区规模化牛场细菌病的防治和合理用药提供参考。【方法】对死亡犊牛进行病理解剖及病原分离,挑选肝脏(KS-1)与肛拭子(KS-2)来源的单菌落纯化培养,通过形态观察、生化试验、16S rRNA基因扩增及系统进化分群鉴定分离株,并通过毒力基因检测、致病性试验及药敏试验对分离株的致病性和耐药性进行研究。【结果】死亡犊牛肺脏、肝脏、心血、关节液和肠系膜淋巴结以及健康犊牛肛拭子样品接种后菌落生长形态一致,结合选择性培养基上菌落生长形态、革兰染色镜检形态特点、生化特性及大肠杆菌16S rRNA的验证,鉴定分离菌株为大肠杆菌。系统进化分群试验中,KS-1为A群,KS-2为B1群。毒力基因检测结果显示,KS-1携带crl、papC、hlyE、eaeA、ompA、ompC、iucD和iutA共8种毒力相关基因,KS-2携带crl、hlyE和ompF共3种毒力相关基因。致病性试验结果显示,腹腔注射1×108 CFU分离株感染小鼠,KS-1组小鼠在16 h内全部死亡,KS-2组小鼠无死亡现象出现。药敏试验结果显示,KS-1对哌拉西林/他唑巴坦、头孢唑林、头孢呋辛等17种药物敏感,对氨苄青霉素/舒巴坦和哌拉西林中度敏感,对氨苄西林和复方新诺明耐药;KS-2对哌拉西林/他唑巴坦、头孢替坦、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星和呋喃妥英敏感,对妥布霉素中度敏感,对其余14种药物耐药。【结论】本研究分离出2株犊牛源大肠杆菌,其中KS-1毒力较强,且携带丰富的毒力基因,对大部分常用抗生素敏感,对氨苄西林和复方新诺明具有耐药性;KS-2携带毒力基因较少,呈现多重耐药。
- 史唯地康立超刘彩霞寇丽君吕双飞任慧杰钱瑞宣马勋王静蒋建军高盛杰
- 关键词：犊牛毒力基因耐药性
- 基于CDIO理念的动物生理学线上线下混合教学设计与实施
- 2023年
- 动物生理学是石河子大学动物科学与动物医学专业的核心课程之一,为后期专业课程提供理论基础,在学生综合能力培养中起着至关重要的作用。将CDIO教学理念贯穿于动物生理学课程教学改革,从线上自主预习、线下组织教学、课后线上线下互动、全过程考核4个环节进行动物生理学线上线下混合教学模式的改革和尝试,以更好地培养学生的专业素养。
- 刘云芳王静张素华
- 关键词：CDIO理念动物生理学混合式教学
- 手术去势后包扎对仔公猪创口愈合、行为、生产性能和血液指标的影响
- 2021年
- 旨在研究手术去势后包扎对仔公猪创口愈合、行为、生产性能和血液指标的影响。选择体况良好、体重相近的杜长大仔公猪224头,随机分为3组,分别为假去势组(A组)、去势包扎组(B组)和去势不包扎组(C组)。仔公猪在5日龄进行无麻醉手术去势,21日龄断奶时试验结束。分别在仔公猪去势及包扎后对创口愈合、行为表现、死亡率、生产性能、血清皮质醇(COR)和免疫指标进行评估。结果表明:去势后5 d内,C组仔公猪创口愈合程度的评分显著高于B组(P<0.05);去势极显著降低仔公猪站立、玩耍和探究等行为(P<0.01),极显著增加仔公猪独处、惨叫、抱团、异常排尿、站立不稳和恐人等行为(P<0.01),而创口包扎对仔公猪玩耍和恐人行为有明显改善;在整个试验期内,B和C组仔公猪的断奶重和平均日增重(ADG)与对照组均无显著差异(P>0.05),去势造成哺乳期仔公猪的死亡率升高,但通过对创口包扎,B组仔公猪在去势后5 d内死亡率(1.35%)明显低于C组(6.41%);在去势后3 d内,B和C组仔公猪COR浓度均极显著高于对照组(P<0.01),而在第5天时B组COR浓度显著低于C组(P<0.05);在去势后3 d内,B和C组仔公猪血清免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白G(IgG)浓度均极显著低于对照组(P<0.01),而去势后第5天时,B组IgA浓度显著高于C组(P<0.05),白介素-12(IL-12)和干扰素-γ(IFN-γ)浓度在去势前后均无显著差异(P>0.05)。上述结果表明,手术去势造成仔公猪强烈的疼痛应激,而术后包扎可显著降低去势引发的创口红肿出血和感染死亡,加快创口愈合,缓解疼痛造成的行为变化,促进血液指标恢复,从而保障仔公猪的福利水平。
- 杨志维王静王帅黄涛李智星郝科兴谷新利胡广东
- 关键词：手术去势福利水平创口愈合
- 冷冻鸡肉中单核细胞增生李斯特菌2个分离株的毒力及毒力相关因素研究
- 2022年
- 以鸡胚为感染动物,检测2株冷冻鸡肉单核细胞增生李斯特菌(LM)的鸡胚半数致死量(LD_(50))、鸡胚肝脏指数、确定其毒力,同时检测毒力基因、溶血价、生物被膜形成能力,进行毒力相关因素分析。结果显示,与PBS组和无害李斯特菌(L.innocua)组相比,LM873与LM925均能致死鸡胚,鸡胚LD_(50)分别为4.733和1.533;鸡胚肝脏指数均明显大于PBS组和L.innocua组(P<0.05);8个毒力基因除lmo1116仅存在于LM925中外,其余基因分布一致;LM873与LM925的溶血价分别为2^(3)和2^(4);在生物被膜的形成过程中,同一时间段LM925较LM873的生物被膜更致密;LM925在6、8、10、12、24、36 h生物被膜的形成能力显著高于LM873(P<0.05),且在10、24、36 h时差异极显著(P<0.01),但是LM873与L.innocua生物被膜的形成没有明显差异。综上所述,2株冷冻鸡肉LM分离株均能致死鸡胚,且LM925的毒力强于LM873;溶血价素活性及毒力基因分布与菌株毒力呈正相关性。
- 李楠阮婷玉孙天浩康立超彭健王静马勋
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌半数致死量毒力基因生物被膜
- 食源性单增李斯特菌毒力岛4基因缺失株的构建及其体外毒力研究被引量：2
- 2023年
- 为研究单增李斯特菌毒力岛4(LIPI-4)对单增李斯特菌(LM)LM928毒力强弱的影响及其在LM穿越血脑屏障时发挥的作用。本研究利用同源重组技术构建LIPI-4缺失株,将亲本株与缺失株以不同的MOI值感染脑微血管内皮细胞(HCMEC)后,通过细胞增殖与细胞毒性试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,空斑试验检测细胞病变及细菌胞间迁移率以及胞内增殖试验检测LIPI-4缺失后对LM胞内增殖的影响。结果表明:本试验成功构建LIPI-4缺失株。与亲本株相比,LIPI-4缺失株侵染HCMEC后,细胞活性极显著增强(P<0.01);空斑形成数量极显著降低(P<0.01);胞内增殖速度减慢,胞内增殖12 h时菌量极显著减少(P<0.01)。体外细胞实验表明LIPI-4的缺失显著降低了LM的毒力。研究结果可为LIPI-4在LM穿越血脑屏障时的作用机制提供研究基础。
- 阮婷玉康立超刘扬扬李红欢李楠马勋王静
- 关键词：血脑屏障毒力
- 单增李斯特菌Lm4b_02325基因缺失株的构建及其生物学特性研究
- 2023年
- 为研究单增李斯特菌(LM)抗转录抑制因子编码基因Lm4b_02325对LM的生物学特性的影响,本研究采用同源重组技术构建Lm4b_02325基因缺失株LM928ΔLm4b_02325和回补株CLM928ΔLm4b_02325并均经PCR和测序鉴定。同时采用PCR鉴定该菌的遗传稳定性。上述结果表明基因缺失株与回补株均正确构建,且缺失株的遗传稳定性较强。根据培养不同时间的OD600nm值绘制缺失株、回补株和亲本株的生长曲线;对小鼠腹腔注射不同浓度(10^(9) cfu/mL~10^(5) cfu/mL)的3株菌,观察感染后小鼠的临床症状,统计死亡率并计算3株菌对小鼠的半数致死量(LD50)。以MOI 10将上述3种菌分别感染人脑微血管内皮细胞(HBMEC),1 h后裂解各菌,10倍倍比稀释,并涂布于BHI固体培养基,37℃培养1 d后经菌落计数,分析各株菌对HBMEC的粘附力;按照上述方法感染各菌后1 h加入庆大霉素以及感染各菌后不同时间加入庆大霉素杀死未粘附的细菌,裂解各细菌,10倍倍比稀释并涂布于BHI固体培养基,通过菌落计数结果分析各菌株对HBMEC的侵袭力及在该细胞内的增殖能力。生长曲线结果显示3株菌的生长趋势基本相似。小鼠的致病性实验结果显示,接种10^(9) cfu/mL~10^(7) cfu/mL 3株菌的小鼠出现被毛凌乱、厌食或神经症状与昏睡等临床症状,死亡率接近100%。而接种10^(6) cfu/mL~10^(5) cfu/mL 3株菌的小鼠临床症状较轻,死亡率较低。经计算LM928ΔLm4b_02325对小鼠的LD50约10^(5).45 cfu/mL,毒力明显高于LM928株及CLM928ΔLm4b_02325株(P<0.05)。粘附、侵袭力及胞内生存能力结果显示,黏附及侵入HBMEC的LM928ΔLm4b_02325菌株数量极显著(P<0.01)或者显著高于LM928(P<0.01)与CLM928ΔLm4b_02325株(P<0.05);胞内存活试验结果显示,感染后各时间点LM928ΔLm4b_02325较其余两种菌在HBMEC内的增殖速度均显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)加快,且前者在HBMEC中的存活数较后两者均显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)升高
- 曾东东刘彩霞寇丽君秦赫晋瑞婕王静任静静蒋建军马勋
- 关键词：单增李斯特菌
- 哈萨克羊胎盘原代滋养层细胞的分离、纯化与基本特征鉴定
- 2022年
- 为了获得纯度较高的哈萨克羊胎盘原代滋养层细胞,采用组织块培养法、胰酶消化法和胰酶+组织块法分离原代滋养层细胞,通过胰酶差时消化法对细胞进行纯化,显微镜下观察滋养层细胞的形态学特点和生长特性,利用免疫细胞化学染色法对滋养层细胞的特异性表达角蛋白7(cytokeratin 7,CK7)进行鉴定,通过RT-PCR对滋养层细胞标志基因干扰素-τ(IFN-τ)进行检测,同时使用孕酮(P_(4))、雌二醇(E_(2))或P_(4)、E_(2)和IFN-τ处理滋养层细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胚胎附植相关基因的转录水平。结果显示,与其他方法相比,利用胰酶+组织块法细胞生长周期较短,第2天有细胞从组织块中迁出,5~6 d细胞呈单层铺开,细胞均呈上皮样生长。免疫细胞化学染色显示,细胞CK7染色阳性结果大于95%。RT-PCR检测到分离的滋养层细胞可正常表达IFN-τ。此外,通过P_(4)、E_(2)和IFN-τ处理后,胚胎附植相关基因ISG15、CXCL10、RSAD2、CTSL、SPP1和MUC1在滋养层细胞中的表达水平显著上调。本研究通过胰酶+组织块培养法结合胰酶差时消化法成功分离和纯化哈萨克羊胎盘原代滋养层细胞,为哈萨克羊胚胎附植相关调控机制的研究奠定了基础。
- 陈慧慧郝科兴龙德智宋美君海思妤王静胡广东
- 关键词：哈萨克羊滋养层细胞
