吴少峰
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血管内皮生长因子表达载体的构建及在内皮祖细胞中的表达
- 2008年
- 背景:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)具有很强的促进血管生成作用,但构建其真核表达质粒是否可转染血管内皮祖细胞并完整表达还不清楚。目的:构建VEGF表达载体,并观察其在内皮祖细胞中的表达情况。设计、时间及地点:观察性试验,于2007-12/2008-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心实验室完成。材料:质粒PDC315-VEGF165自备,质粒pIRES2-EGFP由美国国立卫生研究院Stanko Stojilkovic教授惠赠。方法:运用DNA重组技术构建VEGF表达载体pIRES2-EGFP-VEGF,应用脂质体包裹的方法将载体转染猪外周血血管内皮祖细胞。主要观察指标:采用荧光显微镜观察VEGF在内皮祖细胞内的表达,反转录-聚合酶链反应法检测VEGFmRNA表达水平,ELISA检测VEGF165蛋白表达情况。结果:成功构建VEGF真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF。转染重组质粒pIRES2-EGFP-VEGF后,在内皮祖细胞内有VEGF的表达,VEGFmRNA和VEGF165蛋白表达水平均明显增加。结论:VEGF表达载体转染猪外周血血管内皮祖细胞后能有效增加VEGF基因的表达,能够获得较高水平的VEGF蛋白。
- 陈柏松张胜利耿红全潘骏吴少峰陈方
- 关键词：血管内皮生长因子真核表达载体内皮祖细胞基因表达
- 内皮祖细胞复合膀胱无细胞基质的生物相容性被引量：1
- 2009年
- 目的应用内皮祖细胞复合膀胱无细胞基质构建组织工程学膀胱。方法分离培养猪外周血内皮祖细胞，制备膀胱无细胞基质。体外检测细胞与膀胱无细胞基质的生物相容性。观察细胞与膀胱无细胞基质的体外复合。结果成功分离培养猪外周血内皮祖细胞，其表面标志分别为CD13325．1％、CD34 55．9％、flk-197．7％、CD31 82．0％、CD144 95．4％。成功制备膀胱无细胞基质。生物相容性检测证明膀胱无细胞基质对细胞无明显的细胞毒性，细胞活力保持在90％以上。体外观察细胞可以复合于无细胞基质，并在其上增殖、生长。结论可以应用内皮祖细胞作为种子细胞，膀胱无细胞基质作为支架材料构建组织工程学膀胱，可能成为提高体内组织工程膀胱血管化的一种新方法。
- 陈柏松张胜利耿红全潘骏吴少峰陈方
- 关键词：内皮祖细胞膀胱生物相容性血管化
- 猪外周血内皮祖细胞的分离培养及生物学特性
- 2008年
- 目的从小型猪外周血中分离、培养内皮祖细胞(EPCs),并进行相关鉴定,分析其生物学特性。方法采用密度梯度离心法获得小型猪外周血单个核细胞并进行体外传代培养,分别采用倒置相差显微镜观察、免疫荧光染色、流式细胞仪分析及Matrigel实验和DiI-acLDL摄取实验,对其细胞表型及功能进行相关鉴定。结果外周血单个核细胞在培养过程中出现梭形贴壁和铺路石样形态;培养第14天,约80%的细胞DiI-acLDL吞噬实验阳性,且CD133、CD34、flk-1、CD31、CD144的表达阳性率分别达到25.1%、55.9%、97.7%、82.0%和95.4%;细胞培养于凝固的Matrigel表面7 d后,形成特征性的网格状结构。结论该实验成功从小型猪外周血单个核细胞中分离培养出EPCs,在其体外扩增诱导的过程中,表达EPCs和成熟内皮细胞的特征性标志。
- 陈柏松张胜利耿红全潘骏吴少峰陈方
- 关键词：细胞培养外周血内皮祖细胞血管新生
