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奶山羊胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特性分析被引量：1: 2015年; 试验分别采用组织块贴壁法和消化分离法对奶山羊胎儿成纤维细胞进行体外培养,通过原代培养、细胞传代、冷冻保存等成功建立了奶山羊胎儿成纤维细胞系,并对该细胞系进行了形态学观察、生长动力学分析、细胞活力测定、核型分析和微生物检测等多种生物学特性分析.结果表明:成纤维细胞原代培养采用贴块培养时所需时间较长,消化培养有较多死细胞;传代细胞生长情况良好,群体倍增时间(PDT)约为40.4h;生长总体趋势呈"S"型;冻存后活力为92.3%,生长状况与冻存前一致;细胞染色体中二倍体(2 n=60)占主体;细菌、真菌和支原体检测结果均为阴性,细胞系的各项指标均达到ATCC细胞系鉴定标准.; 马呈瑞常卫华曹会萍张改平卢清侠张勇; 关键词：奶山羊成纤维细胞系细胞培养生物学特性

绵羊性腺褪黑素受体基因MT2的克隆及其生物信息学分析被引量：1: 2013年; 采用RT-PCR技术,以绵羊性腺(睾丸和卵巢)cDNA为模板扩增褪黑素受体MT2基因,经连接转化,蓝白斑筛选,挑取阳性克隆测序。结果显示,该试验成功克隆了MT2基因(282bp);通过Blast比对,克隆的MT2基因与已知序列(GenBank ID:NM_001130938)的同源性达到100%。生物信息学分析表明,克隆的MT2基因序列属于MT2第二外显子的一部分,富含GC(69.5%);整个MT2总共编码376个氨基酸的肽序列,其中丙氨酸(Ala)比例最高(13.03%);通过对绵羊MT2编码产物的二级结构、亲水性/疏水性、信号肽、亚细胞定位和跨膜结构域等进行预测和分析,发现绵羊MT2基因的编码蛋白是一种脂溶性较强的跨膜蛋白,与山羊MT2的分子进化距离最近,亲缘关系最为密切。MT2基因的成功克隆及其生物信息学分析为进一步研究它与绵羊繁殖季节性的相关性奠定了基础。; 曹会萍常卫华马呈瑞张晶张勇; 关键词：克隆生物信息学

绵羊卵巢microRNA的克隆及表达分析被引量：1: 2014年; miRNA（microRNA）是广泛存在于真核生物中长约18~25个核苷酸的一类非编码RNA,调控基因转录后表达。目前,对miRNA的鉴定、功能分析及机理调控的研究已成为生物学领域的热点。为丰富绵羊miRNA数据库、研究miRNA对季节性繁殖动物繁殖活动的调控作用及调控机理提供基础。本研究通过克隆法构建绵羊卵巢miRNA cDNA文库,并进行生物学分析;利用Real time PCR检测miRNA在卵巢组织中的表达。试验成功构建绵羊卵巢miRNA的cDNA文库,获得30条绵羊miRNA序列。miRBase数据库序列比对,20条miRNA序列与绵羊已知miRNA同源保守,鉴定为绵羊已知miRNA。其中oar-miR-3955-5p在其它物种中未注释,鉴定为绵羊特异性miRNA。通过比对及二级结构分析鉴定了绵羊10条新miRNA,其中ovis-aries-ovary-m0001-5p只与牛bta-miR-2285具有一定的同源性。Real Time PCR结果表明10个miRNA（5个已知miRNA及5个新miRNA）在绵羊卵巢组织中均有表达,但ovis-aries-ovary-m0003-3p的表达量显著高于其它9个,推测该新miRNA对绵羊卵巢发育或功能发挥具有重要的调控作用。试验结果对绵羊miRNA的进一步研究具有一定的理论指导和现实意义。; 常卫华胡俊杰王娟红曹会萍马友记张勇赵兴绪; 关键词：绵羊卵巢 MICRORNA 生物信息学实时荧光定量PCR

中草药对奶牛隐性乳房炎的体外抑菌试验被引量：8: 2014年; 为了寻求对奶牛隐性乳房炎有良好疗效的中草药,选取具有抗菌消炎作用的13种中草药,运用水煎法提取其有效成分;从兰州周边6个奶牛场采集奶样,从中分离得到4种引起乳房炎的主要致病菌;利用提取的中草药有效成分对这4种致病菌做体外抑菌试验,运用试管稀释法测定中药单味药和复方的最小抑菌浓度.结果表明:黄连、大黄、蒲公英、鱼腥草4味中药对引起奶牛隐性乳房炎的4种病原菌的抑菌效果良好;板兰根、金银花、连翘、黄柏、大青叶、紫花地丁具一定抑菌效果,而王不留行、黄芪、天花粉抑菌效果较差.同时还发现,复方中同时含有黄连、大黄、蒲公英、鱼腥草4种药物的复方抑菌效果较好.; 胡少辉阚威周长卿马呈瑞张连梅徐燕霞曹会萍赵兴绪张勇; 关键词：奶牛中草药隐性乳房炎病原菌抑菌试验

苦椿皮提取物对小鼠腹泻防治作用研究: 为了探讨苦椿皮提取物对小鼠腹泻防治作用，取体重相近的实验小鼠64只，随机分为低剂量组、高剂量组、模型组和空白对照组，每组16只，采用番泻叶灌胃建立动物腹泻模型，测定各组小鼠碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、淀粉酶和脂肪酶活性。结果...; 程富胜刘宇张霞王慧董鹏程曹会萍; 关键词：番泻叶腹泻模型消化酶

不同培养条件对绵羊卵母细胞体外成熟的影响被引量：2: 2014年; 通过使用不同的卵母细胞采集方法、不同的培养液、培养时间和细胞因子对绵羊卵母细胞的体外成熟培养的影响进行了研究.结果表明：切卵法和抽吸法对卵母细胞成熟的影响前者优于后者,差异极显著（P〈0.01）；培养液中添加FSH、LH 及FBS对绵羊卵母细胞的影响显著高于添加发情羊血清的且差异极显著（P〈0.01）；绵羊的卵母细胞培养20 h的成熟率极显著低于培养22 h和24 h的成熟率（P〈0.01）,培养22 h和24 h的成熟率差异不显著（P〉0.05）,培养24 h和培养26 h的成熟率差异极显著（P〈0.01）,培养26 h卵母细胞老化对随后的体外受精不利；成熟液（培养液＋FBS、LH、FSH、E2）中分别加入骨形态发生蛋白15（bone morphogenetie protein,BMP15）和成纤维细胞生长因子8 b（fibroblast growth factor 8b,FGF8b）2种细胞因子,成熟液中添加 BMP15组与添加FGF8b组卵母细胞的成熟率差异极显著（P〈0.01）,成熟液中添加 BMP15和对照组卵母细胞成熟率的差异极显著（P〈0.01）,加入 FGF8b组与对照组卵母细胞成熟率差异不显著（P〉0.05）.利用切卵法在培养液中加入 FSH、LHE2和细胞因子BMP15,培养22~24 h可以大大提高绵羊卵母细胞体外培养的成熟率.; 徐燕霞曹会萍马呈瑞阚威李展张小宇胡少辉张连梅常卫华张勇; 关键词：绵羊卵母细胞体外成熟 BMP15

重离子束辐照对绵羊卵母细胞及体外受精卵早期发育的影响被引量：2: 2014年; 试验探索重离子束辐照对绵羊卵母细胞的体外成熟及体外受精卵早期胚胎发育的影响。用不同剂量的重离子束辐照绵羊卵母细胞和精液,观察卵母细胞体外成熟率及体外受精后早起胚胎的卵裂率、桑椹胚率及囊胚率。试验结果显示:与对照组相比,1.0、1.5Gy辐射可以明显提高绵羊卵母细胞的体外成熟率(p<0.01);重离子辐照绵羊精液和卵母细胞并做体外受精后,早期胚胎发育有着显著变化。当用0.5、1.0Gy剂量辐照精液时,绵羊早期胚胎的卵裂率和桑葚胚率显著升高(p<0.05),囊胚率无显著变化,1.5 Gy剂量,卵裂率显著提高(p<0.05),2.0 Gy剂量,卵裂率、桑葚胚率、囊胚发育率均极显著降低(p<0.01);当重离子束辐照卵母细胞时,0.5、1.0Gy剂量组的卵裂率、桑葚胚率和囊胚发育率显著升高(p<0.05),而2.0Gy剂量组的卵裂率和桑葚胚发育率极显著降低(p<0.01),而囊胚发育率为0。结果表明低剂量的重离子辐照绵羊精液、卵母细胞,对体外受精和早期胚胎发育具有明显的促进作用,而高剂量辐照则抑制细胞的生长发育。; 常卫华徐燕霞王珂胡俊杰张红曹会萍马呈瑞张晶张勇; 关键词：重离子辐射卵母细胞体外受精早期胚胎

绵羊卵巢组织microRNA的研究: MiRNA（microRNA）是广泛存在于真核生物中长约18~25个核苷酸的一类非编码RNA分子，对基因转录后表达有调控作用。对miRNA的鉴定、功能分析及调控机理的研究已成为当前生物学领域的热点。目前miRbase数据...; 曹会萍; 关键词：绵羊卵巢 MICRORNA CDNA文库; 文献传递

奶牛乳房炎无乳链球菌的分离及PCR鉴定被引量：11: 2014年; 利用THB(Todd-Hewitt Broth)固体培养基和色素试验培养基选择培养无乳链球菌,参照GenBank中无乳链球菌参考菌株(Accession:AF015927.1、JQ289582.1)16SrRNA和种属特异性基因cfb(CAMP因子)序列设计引物,对奶样中分离的12株疑似无乳链球菌进行鉴定。结果显示,经PCR扩增后,被检测的12株细菌均可扩增出预期大小的16S rRNA基因序列,而12株中有8株可以扩增出预期大小的cfb基因序列,条带单一,特异性好。序列BLAST显示,12株菌的16S rRNA基因序列与NCBI上报道的无乳链球菌相应序列高度同源(>99.0%),各分离菌株间的16S rRNA基因序列也高度同源(99.0%～100.0%);cfb基因序列与NCBI上已报道的无乳链球菌相应序列具有高度同源性(>99.0%),各菌株间cfb基因序列也高度同源(100.0%)。经选择培养与PCR鉴定结果可以确定12株疑似菌株中有8株为无乳链球菌。; 阚威樊杰武小虎赵兴绪张晶晶周长卿王华曹会萍李展; 关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌 PCR鉴定 RRNA

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曹会萍

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