陈昆仑 作品数:9 被引量:47 H指数:4 供职机构: 西安交通大学医学部 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 陕西省科技攻关计划 陕西省国际科技合作计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
大鼠骨髓间充质干细胞对RH-35肝癌细胞侵袭能力的影响 被引量:9 2014年 目的观察大鼠骨髓来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对RH-35肝癌细胞侵袭能力的影响。方法密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓MSCs,成骨与成脂诱导分化鉴定其分化能力。收集MSCs条件培养基(MSCs-CM),与RH-35细胞共培养72h,Transwell小室观察MSCs-CM对RH-35细胞侵袭转移能力的影响;Realtime PCR与Western blot法检测Snail与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果分离的MSCs形态均一,具有良好的成骨与成脂分化能力。在MSCs-CM(500mL/L)作用下,RH-35的侵袭能力明显增强;Real-time PCR与Western blot均显示,MSCs-CM处理组中RH-35细胞Snail和MMP-9的表达较对照组显著升高(P<0.05)。结论MSCs在体外能够增强肝癌细胞系RH-35的侵袭转移能力,其促肝癌细胞体外侵袭可能与Snail与MMP-9表达上调有关。 袁博 陈昆仑 张岚 慕为民 王重民 刘保荣 徐心关键词:间充质干细胞 肝癌细胞 基质金属蛋白酶-9 SNAIL RNA结合蛋白La对宫颈癌细胞侵袭转移的影响及其机制 被引量:3 2015年 目的探讨RNA结合蛋白La(La)对宫颈癌细胞侵袭转移的作用及其作用机制。方法采用RNA干扰技术沉默La基因在宫颈癌细胞株HeLa中的表达,并通过G418筛选,构建稳定表达的HeLa的La干扰克隆。采用划痕实验、Transwell小室等检测La对宫颈癌细胞侵袭转移的影响。利用Western blot的方法检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达,并采用明胶酶谱的方法检测细胞培养上清中MMP-2的活性。结果 La干扰后细胞的迁徙和侵袭能力明显降低,对细胞迁徙距离和穿过Transwell小室的细胞数目进行分析后发现,差异有统计学意义;同时发现在细胞中MMP-2的蛋白表达水平及酶活性均降低,而TIMP-2的蛋白表达水平上调。结论 La对宫颈癌的侵袭转移具有促进作用,这种作用可能与其对基质金属蛋白及其抑制剂的调控相关。 陈茜 陈昆仑 刘韡 李牧 高庆关键词:RNA结合蛋白 宫颈癌 RNA干扰 大蒜素对脑胶质瘤细胞U87细胞侵袭能力的影响及其机制 被引量:12 2015年 目的检测大蒜素对脑胶质瘤细胞U87侵袭能力的影响及其可能机制。方法利用MTT法检测大蒜素对U87细胞增殖能力的抑制作用。利用Transwell小室检测大蒜素对U87细胞侵袭能力的抑制作用。采用Real-time PCR和Western blotting方法检测大蒜素对U87细胞中MMP-2和MMP-9表达水平的影响。采用Western blotting的方法检测大蒜素对p38磷酸化水平的影响。结果大蒜素能够明显抑制U87细胞的增殖(浓度>8μg/mL,P<0.05)。且大蒜素(浓度<8μg/mL)能够明显抑制U87细胞的侵袭能力(P<0.05)。在大蒜素作用24h后,U87细胞中MMP-2和MMP-9的表达水平明显降低(P<0.05)。p38的磷酸化水平在大蒜素作用后明显降低(P<0.05)。结论大蒜素能够抑制脑胶质瘤细胞U87的侵袭能力,其机制可能是通过对p38信号的通路活性的调节进而降低MMP-2和MMP-9的表达来实现的,提示大蒜素在脑胶质瘤的治疗中具有潜在的应用价值。 蔡青 秦怀洲 陈昆仑关键词:脑胶质瘤 大蒜素 MMPS P38 U87细胞 PTEN通过AKT介导的细胞代谢途径抑制宫颈癌细胞的增殖 被引量:10 2013年 目的研究PTEN基因与宫颈癌细胞增殖能力的关系,以探索PTEN基因在宫颈癌发生发展中的可能作用及其机制。方法 Western blot检测PTEN基因在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A和CasKi中的表达。利用脂质体法将人工过表达PTEN载体转染低表达PTEN的宫颈癌细胞系HeLa和C33A,通过MTT方法观察转染后PTEN过表达对宫颈癌细胞增殖的影响。采用多功能过程参数分析仪,检测转染PTEN基因后宫颈癌细胞培养基中乳酸、葡萄糖及谷氨酰胺的含量,观察PTEN基因过表达对宫颈癌细胞代谢的影响。Western blot检测PTEN过表达后宫颈癌细胞中丙酮酸激酶(PKM2)、6-磷酸果糖激酶2(PFKFB3)、谷氨酰胺酶(GLS)、AKT和磷酸化的AKT(pAKT)表达情况。结果与正常宫颈上皮细胞相比,PTEN基因在4种宫颈癌细胞系中低表达。与对照组相比,过表达PTEN的HeLa和C33A细胞克隆中,PTEN基因的水平明显升高。细胞计数和MTT法也显示,过表达PTEN能够明显抑制肿瘤细胞的增殖速率(P<0.05);过表达PTEN基因的细胞培养液中葡萄糖及谷氨酰胺含量显著增多,但乳酸含量减少;同时还发现PTEN抑制了AKT的磷酸化水平并使PKM2、PFKFB3及GLS的表达水平降低。结论 PTEN基因可通过AKT途径调节细胞代谢,从而调节宫颈癌细胞的增殖。PTEN基因有可能成为宫颈癌的诊断和治疗的新靶点。 陈昆仑 刘莹 李明利 高艳娥 高庆关键词:PTEN 宫颈癌 细胞代谢 丙酮酸激酶 谷氨酰胺酶 大黄素对骨肉瘤细胞增殖的抑制及相关机制 被引量:5 2014年 目的探讨大黄素对人骨肉瘤细胞增殖的影响及其相关机制。方法培养人骨肉瘤细胞系SOSP9607,分为对照组及不同浓度大黄素组(25、50和100μmol/L)。MTT法检测各组细胞生长抑制率(IR);流式细胞术分析各组细胞凋亡情况;Western blotting法检测各组细胞中caspase-3、caspase-9、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达水平的改变。结果 MTT法检测结果显示,与对照组相比,不同浓度大黄素对骨肉瘤细胞均有抑制作用,呈现明显的量-效关系;流式细胞技术检测结果显示,与对照组相比,大黄素能够明显促进人骨肉瘤细胞SOSP9607的凋亡,细胞凋亡率随其浓度增加而增加。Western blotting法检测结果显示,与对照组相比,不同浓度大黄素组caspase-3和caspase-9蛋白表达明显增加,呈明显的量-效关系。而p-ERK1/2蛋白表达量随着大黄素浓度的增加而减少。结论大黄素能抑制骨肉瘤细胞增殖,其机制可能是通过抑制ERK通路的活化,进一步促进caspase-3和-9蛋白的表达与活化,最终导致肿瘤细胞凋亡。 徐良志 陈昆仑关键词:骨肉瘤 大黄素 细胞凋亡 ERK1 热应激对大鼠肠系膜动脉内皮依赖性NO-、EDHF-介导舒张途径的损伤 被引量:3 2011年 目的探讨热应激对大鼠肠系膜动脉内皮依赖性舒张功能降低的机制。方法使用微血管张力描记系统,观察热应激大鼠肠系膜动脉环5-羟色胺预收缩后加入乙酰胆碱的舒张性改变,考察一氧化氮(NO)途径、内皮源性超极化因子(EDHF)途径以及前列环素(PGI2)途径在热应激后肠系膜动脉舒张功能的改变,反应特征表述为最大松弛百分率(Rmax)和产生一半最大松弛百分率时所需要乙酰胆碱浓度的负对数(pIC50)。结果热应激大鼠肠系膜动脉Rmax和pIC50较正常大鼠肠系膜动脉降低,分别为(97±6)%、(52±8)%和8.67±0.59、7.66±1.33(P<0.01,P<0.05)。正常大鼠肠系膜动脉NO介导的舒张Rmax和pIC50分别为(53±6)%和6.89±0.93,在热应激后分别为(21±8)%(P<0.01)和4.91±0.31(P<0.01);正常大鼠肠系膜动脉EDHF介导的舒张Rmax和pIC50分别为(35±14)%和6.30±0.56,在热应激后分别为(13±3)%(P<0.01)和5.23±1.07(P<0.01);正常大鼠肠系膜动脉PGI2介导的舒张Rmax和pIC50分别为(8±3)%和5.69±0.37,在热应激后分别为(10±6)%(P>0.05)和5.74±0.79(P>0.05)。结论热应激引起的动脉血管内皮依赖性舒张功能降低主要是损伤了NO-和EDHF-途径。 陈昆仑 周光宇 曹永孝 李洁 刘韡 李宗芳关键词:热应激 内皮依赖性舒张 内皮源性超极化因子 C75对肝癌细胞侵袭转移的影响及其机制 2013年 目的观察C75对肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的作用,并探讨其作用机制。方法通过划痕实验和Transwell小室检测C75对肝癌MHCC97H细胞迁徙和侵袭的影响。采用Western blot的方法探讨C75对MMP-2、MMP-9及其抑制物TIMP-2、TIMP-1表达的影响。采用明胶酶谱的方法检测C75对MMP-2和MMP-9蛋白酶活性的影响。结果 C75能够明显抑制MHCC97H细胞迁徙能力和侵袭能力;C75能够抑制MHCC97H细胞中MMP-2、MMP-9的表达水平及酶活性,且能够增高TIMP-1和TIMP-2的表达水平。结论 C75能够抑制肝癌细胞MHCC97H的迁徙和侵袭能力。这种抑制作用可能与其对MMP/TIMP的平衡调节相关。 王益东 陈昆仑 朱海涛 刘仲伟 刘妮 徐心关键词:肝癌 基质金属蛋白酶 MEK1表达载体的构建及其对肝癌细胞ERK通路活性的影响 被引量:1 2013年 目的构建pcDNA3.1(+)-MEK1真核表达载体,体外转染人肝癌MHCC97H细胞,观察MEK1在肝癌细胞中的表达及其对ERK通路活性的影响。方法应用RT-PCR扩增出MEK1基因插入pcDNA3.1(+)中,形成重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1。经测序确认后,利用LipofectamineTM 2000将重组载体转染MHCC97H肝癌细胞,使用含G418的培养基进行筛选;将肝癌细胞分为不转染组、转染空载体组和转染重组载体组,运用Western-blot方法检测MEK1、p-MEK1、ERK1/2、p-ERK1/2在各组细胞中的表达并绘制各组细胞的生长曲线对比其增殖能力。结果重组载体pcDNA3.1(+)-MEK1酶切鉴定电泳条带大小正确,测序结果经Blast比对与人MEK1基因开放性读码框100%吻合;重组载体载体转染肝癌细胞后MEK1表达水平较不转染及转染空载体载体组细胞显著升高,且磷酸化的MEK1及ERK1/2水平也明显升高,转染重组载体载体的肝癌细胞增殖能力得到显著增强。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-MEK1,过表达MEK1蛋白可提高肝癌细胞MAPK/ERK通路活性。 梁容瑞 周蕊 李宗芳 李宝华 陈昆仑 王志东 姬媛媛 杨军 黄辰关键词:肝癌 MHCC97H 基因表达 RNA结合蛋白La在宫颈癌组织中的表达及临床意义 被引量:4 2013年 目的探讨RNA结合蛋白La在宫颈癌组织中的表达及在宫颈癌发生、发展过程中的作用。方法采用免疫组化染色技术分别测定La蛋白在宫颈癌和正常宫颈组织中的表达情况;采用RNA干扰技术沉默La基因在宫颈癌细胞株HeLa的表达,并通过G418筛选,构建稳定表达的HeLa的La干扰克隆。然后使用HeLa-shLa和HeLa-shNC分别进行细胞增殖、体外肿瘤球形成实验,细胞周期检测和Western blot等。结果宫颈癌组织中La蛋白的表达61%明显高于正常宫颈组织9%,差异有统计学意义(P<0.05);且干扰La后,HeLa细胞的增殖能力及肿瘤球形成率(shNC组:17.1%±1.92%,shLa组:6.3%±0.45%)均出现降低,与载体对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外La蛋白干扰后,HeLa细胞发生明显的G0/G1期阻滞,且细胞内CyclinD1的表达降低。结论 RNA结合蛋白La对宫颈癌的形成具有促进作用,可能在宫颈癌的发生、发展中起重要作用。 陈昆仑 吴怡 李牧 李兰 高艳娥 高庆关键词:宫颈癌 LA蛋白 RNA干扰 细胞周期蛋白D1