朱娟
- 作品数：24 被引量：17H指数：2
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 家蚕滞育关联基因的研究进展被引量：1
- 2021年
- 昆虫滞育是受基因控制与外界环境多种因素影响的生物学过程,涉及基因众多,调控网络复杂,目前其分子机制仍未清晰。国内外滞育调控的相关研究多数基于家蚕、果蝇、麻蝇等模式昆虫。介绍了家蚕滞育关联基因的研究现状及进展,包括分类、生理功能、基因间互作、部分基因涉及的信号通路及研究热点等,为促进其在农林害虫的防治途径或天敌保护利用等方面的应用提供参考。
- 陈艳荣朱娟朱娟
- 关键词：家蚕滞育生物钟基因
- 家蚕不同化性品系间DNA甲基转移酶基因转录特性及胚胎早期甲基化水平差异分析
- 2023年
- DNA甲基化修饰参与昆虫胚胎发育。家蚕是典型的胚胎滞育昆虫,为探明家蚕DNA甲基化在胚胎发育及滞育调控中的作用,以不同化性家蚕品系为材料,包括一化性品系安康4号(V^(1)AK4)和鲁一(V^(1)Lu1)、二化性品系秋丰(V^(2)QF)和P50(V^(2)P50)、有滞育多化性品系四海(V^(3)SH)、无滞育多化性品系Nistari(V^(3)Nistari),利用qRT-PCR技术分析家蚕甲基化酶基因BmDnmt在家蚕不同化性品系的表达水平,并利用免疫荧光法测定胚胎发育早期DNA甲基化水平。结果显示,在胚胎发育早期BmDnmt1和BmDnmt2在V^(1)AK4、V^(2)P50和V^(3)Nistari品系中表达水平较高,在V^(3)Nistari品系中BmDnmt1的表达水平显著高于V^(3)SH品系;在幼虫期,BmDnmt1和BmDnmt2在多化性家蚕卵巢或精巢组织中表达水平显著高于二化性家蚕,且它们在V^(3)Nistari中的表达水平显著高于V^(3)SH。采用免疫荧光法测定子代蚕卵的DNA甲基化水平,发现不同化性品系中DNA甲基化水平整体呈上升趋势,在产卵后96 h,多化性品系的DNA甲基化水平显著高于二化性品系。以上结果表明,BmDnmt在家蚕不同化性品系胚胎发育早期的表达水平和DNA甲基化水平均存在差异,推测家蚕幼虫期卵巢组织及胚胎发育早期的DNA甲基化水平与家蚕滞育性及化性有关联。研究结果为进一步解析DNA甲基化在家蚕胚胎发育和滞育中的调控机制提供了新的见解。
- 胡超超朱娟陈艳花王梅仙鲁月蒋涛沈兴家
- 关键词：家蚕DNA甲基转移酶滞育
- 天宫二号航天蚕后代小茧突变体sc的发现与基因定位
- 2021年
- 【目的】从2016年天宫二号空间实验室经历33 d后返回的1头成活“秋丰×白玉”杂交后代雌蚕Bombyx mori与地面“白玉”雄蚕交配的后代个体中,发现有结小茧突变体,进而分离并建立了飞天蚕(space silkworm)正常茧品系TG和小茧突变体品系sc。本研究通过对sc进行遗传分析和基因定位,旨在揭示产生小茧突变体的基因。【方法】对TG和sc进行表型分析;以sc,TG和正常大茧品系0223V_(1)为试验材料,组配(sc♀×0223V_(1)♂)F_(1)及回交群体BC1F——(sc♀×0223V_(1)♂)F_(1)♀×sc♂和BC1M——sc♀×(sc♀×0223V_(1)♂)F_(1)♂。以sc,0223V_(1)和F1基因组DNA为模板,每个连锁群随机选10个SSR引物进行PCR扩增,筛选多态性SSR标记。利用雌性家蚕减数分裂染色体不交换的特点,用BC1F确定sc基因所属连锁群;再根据家蚕SSR分子标记连锁图谱,用BC1M进行基因定位。【结果】表型分析表明sc幼虫体型小于TG幼虫的,蚕茧重约为TG的1/2。遗传分析表明突变受一对隐性基因sc控制;基因定位结果表明该基因位于家蚕基因组第3连锁群S2930-363和S2930-289 SSR标记之间,物理距离为684 kb,包含33个候选基因。【结论】飞天蚕小茧突变受位于家蚕基因组第3连锁群的一对隐性基因sc控制。
- 沈广胜沈兴家沈兴家张龙高梦杰赵巧玲黄静怡陈艳花唐顺明朱娟王梅仙
- 关键词：太空诱变SSR标记基因定位
- 家蚕滞育关联山梨醇脱氢酶基因的启动子活性分析被引量：2
- 2018年
- 【目的】明确家蚕Bombyx mori滞育关联基因山梨醇脱氢酶基因BmSDH(BmSDH-1,BmSDH-2a和BmSDH-2b)的转录特性。【方法】用5'RACE技术确定家蚕3个BmSDH基因的转录起始位点。利用PCR技术克隆3个BmSDH基因约1 kb及BmSDH-2a不同长度的启动子区序列,分别构建带有萤火虫荧光素酶报告基因的载体pGL3-BmSDH-P-luc,并与pRL-CMV报告质粒(含海肾荧光素酶报告基因)共转染家蚕BmN细胞,通过双荧光素酶检测系统检测BmSDH基因启动子活性;分别在BmN细胞培养基中添加昆虫保幼激素、蜕皮激素和滞育激素,通过双荧光素酶检测系统检测不同浓度激素处理对BmSDH-2a基因启动子活性的影响。【结果】BmSDH-1的转录起始位点为A(-41),BmSDH-2a的转录起始位点为C(-41),BmSDH-2b的转录起始位点为A(-40)(翻译起始位点为+1)。双荧光素酶检测结果表明,BmSDH-2a启动子活性极显著高于BmSDH-1和BmSDH-2b启动子,BmSDH-2a 355 bp长度片段的启动子活性极显著高于674 bp和1 117 bp长度片段。用不同浓度滞育激素处理BmN细胞后,BmSDH-2a的1 117 bp启动子活性随着滞育激素浓度的升高有上升的趋势,当浓度高于100 ng/mL时启动子活性有所降低但仍保持在较高水平;用保幼激素进行处理后,随着激素浓度的升高启动子活性逐渐降低;蜕皮激素处理后,0.1 ng/mL激素显著增强启动子活性,当激素浓度继续升高启动子活性逐渐降低。【结论】确定了BmSDH基因的转录起始位点。BmSDH-2a启动子活性显著高于BmSDH-1和BmSDH-2b启动子,一定浓度的蜕皮激素能显著提高BmSDH-2a启动子活性。研究结果有助于阐明BmSDH基因在家蚕滞育中的功能。
- 朱娟朱娟陈艳荣谢雨辰易咏竹沈兴家
- 关键词：家蚕启动子滞育转录起始位点
- Bmo-miR-2788对家蚕丝胶蛋白基因Ser-1的表达调控
- 2019年
- 通过生物信息学分析发现,家蚕丝胶蛋白基因BmSer-1的3′非翻译区(3′-UTR)存在微小RNA Bmo-miR-2788的结合位点。半定量PCR结果显示,Bmo-miR-2788在家蚕5龄第4天幼虫的8个受试组织中均有表达,但在中部丝腺中表达水平最高;而BmSer-1仅在中部丝腺中被检测到。分别构建BmSer-13′-UTR和Bmo-miR-2788的表达载体pGL3.0(A3-luc-BmSer-1-3′-UTR-SV40)和pcDNA3.0(ie1-egfp-pri-Bmo-miR-2788-SV40),共转染BmN细胞,结果表明Bmo-miR-2788上调BmSer-1表达(P<0.01);当将上述载体与合成的Bmo-miR-2788抑制剂共转染BmN细胞时,BmSer-1表达显著下调(P<0.05)。为验证Bmo-miR-2788在蚕体内对BmSer-1表达的调控作用,将Bmo-miR-2788表达质粒与其阴性对照(pcDNA3.0)分别注射到家蚕5龄第3天幼虫体内,qRT-PCR分析结果显示,与阴性对照相比,注射Bmo-miR-2788后36 h中部丝腺中的BmSer-1表达显著上调(P<0.01)。上述结果表明Bmo-miR-2788正向调控BmSer-1基因的表达。
- Rehana Kandhro陈艳花钱平钱平沈兴家
- 关键词：MIRNA基因调控
- 二化性家蚕滞育、非滞育和即时浸酸卵中糖代谢相关酶mRNA水平和活性的变化被引量：1
- 2020年
- 【目的】探究家蚕Bombyx mori胚胎发育早期卵内糖代谢与滞育的关系。【方法】以家蚕二化性品种"秋丰"活化越年卵为材料,一部分于17℃暗催青,孵化后常规饲养,制备非滞育命运卵(ND);另一部分于25℃明催青,孵化后常规饲养,制备滞育命运卵(DD),再用盐酸溶液处理部分DD卵制备即时浸酸卵(IA)。在卵产下或浸酸后0,2,6,12,24,48,72和96 h分别取样,利用qRT-PCR测定家蚕卵中己糖激酶(hexokinase,HK)、磷酸果糖激酶(phosphofructokinase,PFK)、山梨醇脱氢酶(sorbitol dehydrogenase,SDH)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和海藻糖酶(trehalase,TRE)5种糖代谢相关酶基因的mRNA表达水平,利用紫外-可见分光光度法测定家蚕卵中这5种酶的活性。【结果】家蚕糖酵解途径关键酶己糖激酶(BmHK)和磷酸果糖激酶(BmPFK),以及糖分解代谢关键酶山梨醇脱氢酶(BmSDH-1)和海藻糖酶(BmTRE)在ND和IA中的mRNA水平和活性均普遍高于在DD中的;而糖异生途径相关的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(BmPEPCK)在DD中的mRNA水平和活性均高于在ND和IA中的。【结论】结果提示,DD因胚胎滞育的需要,胚胎发育早期卵内糖代谢以能量和物质的贮存为主;而ND和IA由于胚胎发育进程较快,糖代谢以物质分解代谢为主。本研究初步揭示了家蚕卵内糖代谢与滞育的关系,有助于更好地理解家蚕滞育的分子机制。
- 许瑾蒋涛薛鹏沈广胜黄静怡朱娟朱娟唐顺明沈兴家
- 关键词：家蚕滞育转录水平
- 联吡啶在家蚕蝇蛆病防治中的应用
- 本发明公开了联吡啶在家蚕蝇蛆病防治中的应用，本发明以无水乙醇或二甲亚砜为溶剂将联吡啶(5,5′‑二甲基‑2,2′‑联吡啶)配制成药剂通过浸泡或者体喷等方式进行家蚕蝇蛆病防治，对家蚕蝇蛆病有很好的治疗效果。本发明将已有药物...
- 唐顺明王闪闪王耒耒刘吉银沈中元沈兴家朱娟王梅仙
- 文献传递
- 家蚕追寄蝇谷胱甘肽硫转移酶GST1-1的特性分析及其在灭蚕蝇胁迫下的活性变化被引量：1
- 2022年
- 家蚕追寄蝇(Exorista sorbillans Wiedemann)寄生家蚕幼虫导致蝇蛆病的发生。谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase, GST)是一类多功能酶家族,对昆虫在解毒、杀虫剂抗性、氧化应激保护等方面起到重要的作用。本文以家蚕追寄蝇为实验材料,使用RACE技术,获得了家蚕追寄蝇谷胱甘肽硫转移酶基因的全长cDNA序列,将其命名为EsGST1-1(GenBank:OK104864)。EsGST1-1全长813 bp,包含一段627 bp完整开放阅读框(ORF),编码208个氨基酸残基,分子质量为23.58 kD,等电点为5.498,该蛋白属于GST的Delta类家族。序列比对结果显示,EsGST1-1与丝光绿蝇(Lucilia sericata)的GST基因亲缘关系最近。进一步检测了家蚕追寄蝇EsGST1-1基因在不同发育时期和不同组织的表达模式,结果显示在卵产后0 h、幼虫脂肪体和表皮、蛹期第6天以及雌雄成虫的腹部与足部中EsGST1-1高量表达。此外,利用原核体外诱导表达获得了EsGST1-1的重组蛋白。酶活试验结果显示EsGST1-1酶活性为0.820 4 U/mg。热稳定性实验结果显示EsGST1-1在30~40℃时活性最高,随温度的升高活性下降。对灭蚕蝇胁迫下的GST活性测定发现:杀虫活性呈剂量依赖效应;寄蝇谷胱甘肽硫转移酶活力与灭蚕蝇剂量呈负相关;EsGST1-1基因的表达量与灭蚕蝇剂量呈负相关。上述研究结果为进一步开发防治蝇蛆病新型药剂提供基础信息。
- 王闪闪王耒耒陈诺婧依Zufan Bekele Kassa张彩红王梅仙朱娟朱娟沈中元沈兴家
- 关键词：酶学特性活性分析
- 基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统及其应用
- 本发明公开了基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统，所述系统包括Cas9突变体表达载体pHS‑BCR‑LW062‑cas9(全长8654bp)和sgRNA(指导序列)产生载体pHS‑BPR‑LC00...
- 沈兴家陈艳荣朱娟蒋涛唐顺明赵巧玲
- 文献传递
- 家蚕山梨醇脱氢酶基因与蜕皮激素合成途径基因Shadow的功能研究
- 家蚕（Bombyx mori）是重要的经济昆虫和鳞翅目模式生物。滞育和变态发育是家蚕重要的特性，其分子机制的研究一直是蚕业科学领域的难点和热点，迄今仍未完全阐明。家蚕是典型的卵滞育昆虫，根据其在自然条件下1年发生的世代数...
- 朱娟
- 关键词：家蚕变态发育基因功能
