李硕然
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 葡萄糖氧化酶基因在黑曲霉中的分泌表达被引量：2
- 2012年
- 通过PCR扩增从一株葡萄糖氧化酶生产菌黑曲霉中克隆得到1818bp葡萄糖氧化酶基因GOD,将GOD基因与糖化酶基因的5’同源臂、3’同源臂进行重叠延伸,构建葡萄糖氧化酶基因的表达框。将此表达框插入载体pSZH中,构建黑曲霉同源重组表达载体pSZH-GOD。将载体pSZH-GOD通过冻融法转化农杆菌AGL1,进而通过农杆菌介导法转化高产糖化酶的黑曲霉。经潮霉素筛选和PCR鉴定获得8株重组菌株。对8株重组菌株的发酵液上清液进行酶活测定,结果表明葡萄糖氧化酶基因在高产糖化酶的黑曲霉中得到了分泌表达,静置培养6d后其分泌表达的葡萄糖氧化酶酶活最高可达1.166U/mL,而在出发菌株中检测不到葡萄糖氧化酶的分泌表达。同时,重组菌株胞内表达的葡萄糖氧化酶最高酶活可达11.45U/mL,是出发菌株的266倍。此研究结果为简化葡萄糖氧化酶发酵生产工艺、提高酶产量提供了新的途径。
- 张谷楠李硕然汪天虹钟耀华韩建春李杰
- 关键词：葡萄糖氧化酶黑曲霉分泌表达
- 农杆菌介导pepA基因对黑曲霉菌丝体的遗传转化被引量：3
- 2013年
- 通过重叠延伸PCR将宇佐米曲霉中1 347 bp的酸性蛋白酶基因pepA与黑曲霉糖化酶基因5'同源臂和3'同源臂进行拼接,构建pepA基因表达框。将此表达框插入载体pSZH中,构建黑曲霉同源重组表达载体pSZH-pepA。将载体pSZH-pepA通过冻融法转化农杆菌AGL1,进而通过农杆菌介导法转化高产糖化酶的黑曲霉菌丝体。以PDA作为共培养培养基,乙酰丁香酮(简称AS)浓度200μmol.mL-1的条件下,28℃恒温静置培养48 h,经潮霉素筛选和PCR鉴定获得3株重组菌株。以出发菌株作为对照,对3株重组菌株静置培养7 d后的发酵液上清进行酶活测定,结果发现酸性蛋白酶酶活最高达45.56 U.mL-1,而出发菌株的酸性蛋白酶酶活仅为3.72 U.mL-1,表明酸性蛋白酶基因pepA在高产糖化酶的黑曲霉中得到表达。研究建立了农杆菌介导的pepA基因导入黑曲霉菌丝体的转化体系,为实现酸性蛋白酶在黑曲霉菌丝体中高效表达奠定基础。
- 李杰李硕然张谷楠汪天虹钟耀华赵宁
- 关键词：酸性蛋白酶黑曲霉重叠延伸PCR
- 宇佐美曲霉酸性蛋白酶基因在黑曲霉中表达的研究
- 酸性蛋白酶是一类最适pH为2.5-5.0的天冬氨酸蛋白酶。真菌酸性蛋白酶能在低pH条件下,有效水解蛋白质,被广泛应用于酒精、酿酒、食品加工、饲料添加、皮革加工等行业中,是酶制剂产业的一个重要产品,具有很好的商业开发价值。...
- 李硕然
- 关键词：酸性蛋白酶黑曲霉
- 文献传递
