张鹏
- 作品数：12 被引量：70H指数：6
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- 重楼活性单体PP-26抑制结肠癌SW620细胞增殖并诱导细胞凋亡被引量：11
- 2015年
- 目的:探讨重楼活性单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用及其机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用;PI单染及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blotting检测PP-26对细胞周期、细胞凋亡相关蛋白以及Akt和ERK蛋白的表达.结果:与正常肝LO2细胞相比,重楼单体PP-26能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-26浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组相比有显著差异;不同浓度PP-26作用后,细胞阻滞于G1期;PP-26作用细胞24 h后,CDK4、CDK6表达下降,P15、cyclin D1表达增加;不同浓度PP-26作用后,细胞晚期凋亡率增加,随浓度增加有上升趋势;PP-26作用细胞24 h后,线粒体相关凋亡信号通路蛋白Caspase-9、Caspase-3表达下降,PARP切割条带增加,细胞促凋亡蛋白Bax的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x L减少,p-Akt和p-ERK蛋白表达均下降.结论:重楼活性单体PP-26通过上调p15促进结肠癌SW620细胞阻滞于G1期,通过抑制P13K/Akt信号通路及ERK信号通路,活化线粒体凋亡通路,诱导细胞凋亡.
- 陈家劲王娟娟张鹏王莉王国才蒋建伟王跃春
- 关键词：重楼结肠癌SW620细胞凋亡
- 水飞蓟宾通过上调 P15INK4B 和 P21WAF1／CIP1活化 JNK 诱导人胰腺癌细胞 G1期阻滞及细胞凋亡被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:MTT法和克隆形成抑制实验观察水飞蓟宾对人胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达.结果:不同浓度的水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应和时间-效应关系(P<0.05),水飞蓟宾作用于As PC-1细胞48、72 h的IC50浓度分别为224.20、87.25μmol/L;克隆形成抑制实验显示,随着水飞蓟宾浓度增加,As PC-1细胞克隆形成逐渐减少.细胞周期检测结果显示,随着水飞蓟宾浓度的增加,胰腺癌As PC-1细胞出现明显G1期阻滞;水飞蓟宾处理组细胞的周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E2、Cyclin A、Cyclin B1表达下降,细胞周期蛋白激酶CDK4、CDK6表达不变,细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达升高,与流式检测的结果相一致.不同浓度水飞蓟宾作用48 h后,出现明显的凋亡细胞群;同时发现Caspase-9、Caspase-3活化降解,Caspase3下游效应蛋白PARP出现切割条带.JNK蛋白表达增加并磷酸化活化,Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变,BH3-only蛋白Bclxs、Bid、Bim表达增加.结论:水飞蓟宾明显抑制胰腺癌细胞增殖,通过诱导P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达阻滞细胞周期在G1期,并通过诱导JNK活化激活线粒体细胞凋亡途径,进而诱导胰腺癌As PC-1细胞凋亡.
- 王莉张晓凯张鹏王娟娟吴志慧林晨蒋建伟
- 关键词：水飞蓟宾胰腺癌细胞
- 超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A对活化T细胞端粒长度影响及其相关机制研究
- 2011年
- 目的:研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对T细胞端粒长度的作用及机制。方法:SEA、K562细胞、SEA联合K562细胞以及抗CD3单克隆抗体分别刺激脐带血单核细胞,SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测端粒、hTERT及IL-7R表达。结果:SEA组、K562细胞组、SEA联合K562细胞组及抗CD3单抗组活化T细胞的端粒相对长度比值为1.63±0.08、1.06±0.06、3.24±0.61、1.37±0.07;hTERT的表达差异倍数为1.88±0.07、1.95±0.05、3.93±0.23、1.30±0.06;IL-7R表达差异倍数为6.61±0.52、12.81±0.34、17.42±0.50、4.87±0.66;SEA联合K562细胞组均明显高于其他3组(P<0.01),SEA组对端粒长度影响大于单纯K562细胞组。结论:超抗原SEA可以直接刺激T细胞的端粒酶活性及上调表达IL-7R,联合特异性抗原K562细胞株诱导T细胞活化上调效果更明显。
- 秦雅楠王冠明张鹏林晨高永鹏田红霞李扬秋
- 关键词：肠毒素类端粒长度
- 盐酸去氢骆驼蓬碱诱导人胰腺癌AsPC-1细胞凋亡被引量：10
- 2013年
- 目的:探讨盐酸去氢骆驼蓬碱对人胰腺癌AsPC-1细胞的增殖抑制作用及其可能的作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法及克隆形成抑制实验观察盐酸去氢骆驼蓬碱对胰腺癌AsPC-1细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞凋亡及自噬相关蛋白的表达水平。结果:盐酸去氢骆驼蓬碱作用人胰腺癌AsPC-1细胞后,不同浓度的药物对其生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.01),24、48及72h的IC50分别约为116.5、66、22.3μmol.L-1;与对照组相比随着盐酸去氢骆驼蓬碱浓度的增加,细胞克隆逐渐减少;不同浓度盐酸去氢骆驼蓬碱作用后,均出现明显的晚期凋亡及坏死细胞群,且呈剂量-效应关系;盐酸去氢骆驼蓬碱作用后,胰腺癌AsPC-1细胞出现Caspase-3、PARP酶切活化,同时自噬标记性蛋白LC3Ⅱ增加,P62减少。结论:盐酸去氢骆驼蓬碱通过诱导细胞凋亡及自噬的方式抑制人胰腺癌AsPC-1细胞的生长。
- 张晓凯曹明溶张鹏李强刘志龙蒋建伟
- 关键词：盐酸去氢骆驼蓬碱凋亡自噬
- 超抗原SEA对Molt-4细胞线粒体膜电位的影响
- 2012年
- 目的:超抗原葡萄球菌肠毒素A(SEA)诱导Molt-4细胞活化与线粒体膜电位变化的关系。方法:应用CCK-8法体外检测不同浓度和时间SEA刺激传代T细胞株Molt-4细胞增殖活性,应用JC-1标记细胞线粒体,利用流式细胞术测定比较不同时间点SEA刺激对Molt-4细胞线粒体膜电位的影响。结果:经CCK-8检测,SEA的浓度在1 mg/L时Molt-4细胞的增殖最显著,以该浓度的SEA作用于Molt-4细胞180、60、30、10 min,10 min时间点膜电位升高明显高于其他时间点。SEA刺激10、30 min后线粒体膜电位升高低于有丝分裂原PHA刺激的结果。结论:SEA可诱导Molt-4细胞线粒体膜电位升高,且升高作用主要发生在细胞增殖的早期阶段。其升高作用略低于有丝分裂原PHA。
- 秦雅楠田红霞王冠明张鹏林晨李扬秋
- 关键词：MOLT-4细胞超抗原线粒体膜电位
- 榕叶冬青叶的化学成分研究
- 目的：研究冬青科冬青属植物榕叶冬青Ilex ficoidea叶的化学成分.
方法：采用多种色谱技术进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据进行结构鉴定.
结果：从榕叶冬青叶95％乙醇提取物中分离得到16个...
- 李路军杜鹏张鹏吴继洲吴正治
- 关键词：化学成分生物活性
- 去甲斑蝥素抑制胃癌MGC-803细胞生长并诱导其凋亡被引量：12
- 2013年
- 目的:探讨去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)法及克隆形成抑制实验观察去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用,碘化丙锭(propidium iodide,PI)单染色检测细胞周期改变,膜连蛋白-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果:去甲斑蝥素作用MGC-803细胞后,不同浓度的去甲斑蝥素对胃癌细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.05),去甲斑蝥素作用于胃癌MGC-803细胞48 h和72 h的IC_(50)浓度分别为69.92μmol/L和31.27μmol/L;与对照组相比随着去甲斑蝥素的浓度增加,细胞克隆逐渐减少;细胞周期检测结果显示,随着去甲斑蝥素浓度的增加,胃癌MGC-803细胞出现明显G2/M期阻滞;不同浓度去甲斑蝥素作用后,出现明显的凋亡细胞群;Western blotting检测结果显示,去甲斑蝥素处理组细胞的Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变。Casepase-9、Caspase-3活化降解,PARP蛋白出现切割条带。结论:去甲斑蝥素能够抑制胃癌MGC-803细胞生长,使细胞周期抑制在G2/M期,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞发生凋亡。
- 张鹏林晨张晓凯李宝霞谭丹丹王莉蒋建伟
- 关键词：去甲斑蝥素胃癌MGC-803细胞增殖抑制凋亡
- 重楼活性单体pp-10通过抑制PI3K/Akt通路诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡和自噬被引量：5
- 2015年
- 目的:探讨重楼/七叶一枝花(Paris polyphylla)的醇提物单体pp-10诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡和自噬及其分子机制。方法:采用MTT法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体pp-10对人胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用;Hoechst33342染色法检测pp-10作用于人胃癌BGC-823细胞后细胞核形态的改变;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting检测重楼单体pp-10对细胞凋亡和自噬相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、(ADP-核糖)聚合酶(PARP)、Bax、Bcl-2、LC3、P62以及PI3K/Akt信号通路相关蛋白(Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、P70s6k、p-P70s6k)表达的影响。结果:重楼单体pp-10能显著抑制BGC-823细胞的生长,作用呈时间-效应关系及剂量-效应关系;克隆形成抑制实验表明随着pp-10浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与对照组相比有显著差异;在荧光显微镜下观察可见其细胞核固缩、边聚、裂解等细胞凋亡形态学变化;流式细胞术检测显示,随着作用药物浓度的增高,其凋亡率逐渐升高;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,线粒体相关凋亡信号通路蛋白Caspase9、Caspase3及PARP均出现酶切活化条带,细胞促凋亡蛋白Bax的表达水平增加,抗凋亡蛋白Bcl-2减少,自噬相关蛋白Ⅱ型LC3增加,P62蛋白减少,p-Akt蛋白的表达水平下降,Akt下游蛋白p-m Tor、p-p70S6K表达减少。结论:重楼单体pp-10通过抑制BGC-823细胞增殖,诱导细胞凋亡和自噬,与下调P13K/Akt信号通路有关。
- 王娟娟张鹏黄志宏陈家劲李强王国才李药兰蒋建伟
- 关键词：重楼胃癌BGC-823细胞
- 木犀草素对胃癌细胞MGC803增殖的抑制作用及其机制被引量：12
- 2016年
- 目的研究木犀草素对胃癌细胞MGC803的增殖抑制作用及其机制。方法通过MTT法、克隆形成抑制实验观察木犀草素对胃癌细胞MGC803的增殖抑制作用,碘化丙啶(PI)单染色法检测细胞周期,AnnexinⅤ-PI双染法测定细胞凋亡,蛋白质印迹法检测Bcl-2家族蛋白、Caspase蛋白、周期及自噬相关蛋白的表达情况。结果 MTT法检测发现,木犀草素作用于MGC803细胞24、48和72h后,IC50分别为127.37、76.12、16.84μmol/L;木犀草素能抑制胃癌细胞MGC803的克隆形成。PI单染色法发现随着木犀草素浓度的增大,发生G2期阻滞的细胞比例增加。蛋白质印迹法的检测结果表明,随着木犀草素浓度的增加,CDK4、CDK6、CyclinE2表达减少,CyclinD1、CyclinD3和p-Wee1表达基本不变,CyclinA、CyclinB、Myt1、p-cdc2(Tyr15)表达增高。AnnexinⅤ-PI双染法发现随木犀草素浓度增加,细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均增加。蛋白质印迹法的检测结果表明,Mcl-1、Bcl-xL、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白表达随木犀草素浓度增加而减少,Bcl-2蛋白表达量变化不大,Bax蛋白表达量增加,因而引起Bcl-2/Bax、Mcl-1/Bax和Bcl-xL/Bax的比例下降;同时可见到Caspase-3和PARP出现了切割的条带;P62表达下降,Beclin-1、LC3Ⅱ表达增加。结论木犀草素使胃癌细胞MGC803发生G2期阻滞,诱导细胞自噬的发生并抑制细胞的生长,还通过线粒体途径诱导胃癌细胞MGC803凋亡。
- 张相强张鹏黄茂葵李振华代立婷刘纪明蒋建伟王跃春
- 关键词：木犀草素胃肿瘤细胞周期自噬
- 原花青素联合Apollon siRNA抑制肝癌HepG_2细胞增殖及凋亡被引量：6
- 2013年
- 目的研究原花青素联合凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族成员Apollon小干扰RNA(small interfer-ence RNA,siRNA)对人肝癌(HepG2)细胞增殖、凋亡的影响。方法设计并合成Apollon siRNA的序列,将一定浓度的人工合成的Apollon siRNA经脂质体包裹转染肝癌(HepG2)细胞,运用实时荧光定量RT-PCR检测Apollon mRNA的表达水平,蛋白质免疫印记技术检测Apollon的蛋白表达水平,并筛选出Apollon siRNA的有效序列,并进一步联合不同浓度的原花青素作用于肝癌(HepG2)细胞48 h后,采用WST-8法检测单用Apollon siRNA、单用原花青素、及Apollon siRNA联合原花青素对肝癌细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞早期凋亡率;Hoechst 33258染色观察HepG2细胞凋亡形态。结果设计的三对Apollon siRNA序列,筛选出其中有一对(NO.2)能明显下调Apollon mRNA与蛋白的表达水平,Apollon siRNA联合原花青素作用于HepG2细胞48 h后,单用原花青素的IC50为25.24 mg.L-1;Apollon siRNA与原花青素联合使用,原花青素的IC50为9.99 mg.L-1,增敏倍数为2.53,表现为协同作用。流式细胞术检测结果显示:Apollon siRNA联合原花青素能促进HepG2细胞凋亡,其早期凋亡率达25.2%;经荧光显微镜观察,Apollon siRNA组可见核高强度荧光的细胞,并见凋亡小体。结论 Apollon siRNA可增强肝癌细胞对原花青素的敏感性,作用机制可能为共同促进肝癌细胞早期凋亡有关,为临床上肝癌的治疗提供理论基础。
- 何金花黎毓光张鹏王莉韩泽平黄国贤蒋建伟
- 关键词：APOLLON原花青素肝癌
