杨苹
- 作品数：13 被引量：16H指数：3
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- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 表达β-Gal-3基因的转基因紫花苜蓿及抑菌活性研究
- 王会岩付连军刘秀明马丽华杨晶金立波王艳芳付宏岐官莉莉姚娜薛萍刘敏朱海林杨苹
- 已获得植物偏好密码子的防御素基因1个,它的全长为240bp;成功构建含有防御素基因的植物表达载体p1390R-Gal-3;采用冻融法将质粒p1390R-Gal-3转入EHA105中,通过农杆菌介导法转化至紫花苜蓿.在苜蓿...
- 关键词：
- 关键词：紫花苜蓿基因表达
- 姜黄素及姜黄素衍生物A在大鼠血浆中含量的测定
- 2012年
- 目的:建立大鼠血浆中姜黄素及姜黄素衍生物A的高效液相色谱(HPLC)测定方法,研究其在大鼠体内的药物动力学,为姜黄素的临床应用提供参考。方法:将姜黄素及姜黄素衍生物A分别灌胃给药,采用HPLC测定其在大鼠血浆中的血药浓度,色谱柱为Hypersil ODS2C18(5μm×4.6mm×200mm);柱温:30℃;姜黄素流动相,乙腈-水-乙酸(体积比45∶55∶1),姜黄素检测波长为420nm;姜黄素衍生物A流动相,乙腈-水-乙酸(体积比70∶30∶1);体积流量为1.0mL.min-1;姜黄素衍生物A检测波长为361nm。结果:姜黄素及姜黄素衍生物A在0.25～100.00 mg.L-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,姜黄素回归方程为Y=105.90X-22.70,r=0.999 6;姜黄素衍生物A回归方程为Y=71.20X+24.62,r=0.999 4。两者日内、日间精密度RSD均小于4%,平均回收率均大于96%;大鼠灌胃给药后的药动学行为符合单室模型,姜黄素衍生物A的清除率比姜黄素显著降低,约是姜黄素清除率的3.57倍,曲线下面积是姜黄素的4.09倍,半衰期t1/2约为姜黄素的2.79倍。结论:HPLC测定姜黄素及姜黄素衍生物A在大鼠体内血药浓度的方法准确、简单可行、重复性好,为提高姜黄素在体内的稳定性,延长其在体内半衰期提供了依据。
- 杨苹隋思博王艳芳杨晶张敏李校堃郑琳
- 关键词：姜黄素姜黄素衍生物药物动力学高效液相色谱法
- 人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化被引量：6
- 2010年
- 目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接后转化至BL21(Rosetta)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经Ni-NTA、分子筛等进行纯化,获得的蛋白纯度在95%以上。结果:经酶切和基因测序证实获得的FGF21基因序列与GenBank(登录号NM019113)报道的完全一致,构建的pET20b-SUMO-FGF21表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达FGF21蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量为19401,与理论预期值相符。Western blotting分析该表达产物与人FGF21多克隆抗体具有特异性结合能力,经SUMO酶酶切后获得纯度大于95%以上的纯蛋白。结论:成功构建表达人FGF21融合蛋白的基因工程菌,经IPTG诱导、Ni-NTA、分子筛等进行纯化后获得了FGF21纯蛋白。
- 王会岩田海山赵宏鑫张耀方万晓姗邵明龙杨苹肖业臣李校堃
- 关键词：成纤维细胞生长因子21
- 重组人成纤维细胞生长因子-21的表达及纯化工艺的优化被引量：2
- 2009年
- 目的优化重组人成纤维细胞生长因子-21(SUMO-rhFGF-21)融合表达工程菌的表达条件及目的蛋白纯化工艺。方法对工程菌的诱导温度、时间及诱导剂浓度进行优化,并进行罐发酵,对菌体裂解液进行离子交换层析、Ni离子亲和层析及分子筛层析等。纯化产物经SDS-PAGE和HPLC鉴定纯度。结果在诱导温度为37℃,诱导时间为4h,IPTG浓度为0.5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高,达20.5%;罐发酵收菌量可达66g/L,目的蛋白的表达量达20.2%;纯化后的rhFGF-21纯度达96%以上。结论优化了rhFGF-21的表达条件及纯化工艺,为rhFGF-21用于新药开发奠定了基础。
- 赵宏鑫邵明龙杨苹张耀方万晓姗孔祥鑫王会岩李校堃
- 关键词：SUMO纯化
- 姜黄素单羰基类似物的体外稳定性研究被引量：3
- 2012年
- 目的研究光照、温度、pH值及不同生物介质对姜黄素及合成化合物溶液稳定性的影响。方法将配制的姜黄素及合成化合物的溶液放置在不同条件下,采用高效液相色谱法测定其浓度变化,建立其降解速率方程。结果姜黄素及合成化合物在光照度为4 500lx,温度为40℃及pH为酸性条件下最为稳定,其稳定性依次为:A类≥B类≥姜黄素。结论合成的姜黄素单羰基类似物的体外稳定性优于先导物姜黄素。
- 杨苹隋思博张敏梁广梁方李校堃
- 关键词：姜黄素稳定性高效液相色谱法
- 成纤维细胞生长因子-21对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型脂代谢的影响被引量：3
- 2012年
- 目的:探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)对体外诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型脂代谢的影响及其可能的作用机制。方法:采用MTT法筛选医用脂肪乳注射液使用浓度和FGF-21作用浓度,将体外诱导的NAFLD细胞分为对照组、模型组、脱离脂肪乳组和FGF-21治疗组,光学显微镜观察油红O染色情况,全自动生化仪检测NAFLD细胞内甘油三酯(TG)水平,免疫细胞化学方法观察细胞内肉毒碱脂酰转移酶-1(CPT-1)、过氧化氢酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)的表达。结果:MTT法筛选出0.1%医用脂肪乳注射液作为建立体外诱导NAFLD细胞模型的最佳诱导浓度,与正常肝细胞株HL7702比较,模型组油红O染色后细胞浆内有大量被染成橘红色的脂滴,细胞内TG水平显著升高(P<0.01),CPT-1蛋白表达减弱,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达增加。MTT法筛选出0.5mg.L-1FGF-21作为观察该药物对NAFLD细胞模型影响的作用浓度,与模型组比较,FGF-21处理组细胞内TG水平显著降低(P<0.01),CPT-1蛋白表达增加,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减弱。结论:FGF-21处理能减轻NAFLD细胞中TG蓄积,并使HL7702细胞CPT-1蛋白表达增加,而PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减少。
- 刘敏孔祥鑫杨苹陈玉斌李校堃王会岩
- 关键词：非酒精性脂肪肝病
- 姜黄素单羰基类似物的研究进展被引量：2
- 2011年
- 目的总结近几年来姜黄素单羰基类似物在合成、稳定性及药理活性方面的研究进展。方法通过检索查找相关文献。结果合成的姜黄素单羰基类似物不仅稳定性有所提高,且其药理活性也有所提高。结论姜黄素单羰基类似物具有进一步的研究价值和良好的应用前景。
- 隋思博刘一凡耿伟张敏李校堃杨苹
- FGF21[Tyr^(20)]突变体的克隆、表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:将成纤维细胞生长因子21(FGF21)第20位氨基酸进行突变后,在大肠杆菌中表达,并进行纯化和生物活性检测。方法:以野生型的FGF21为模板,将FGF21第20位氨基酸Tyr进行PCR定点突变成Phe后与小分子泛素样修饰物(SUMO)融合,克隆至pET22b表达载体中,构建重组原核表达质粒pET22b-SUMO-FGF21[Tyr20],克隆至BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blotting法进行鉴定,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,SUMO蛋白酶将SUMO切除,SephadexG-50除盐。结果:通过PCR定点突变,成功地将FGF21第20位氨基酸进行了突变,重组质粒pET22b-SUMO-FGF21[Tyr20]经PCR和双酶切鉴定后测序与预期结果相符。经SDS-PAGE电泳分析,蛋白为可溶性,纯化后成功获得FGF21[Tyr20]突变体蛋白,Western blotting分析显示FGF21[Tyr20]突变体蛋白与FGF21抗体有特异性反应。结论:成功构建并高效可溶性表达SUMO-FGF21[Tyr20]的突变体基因,获得FGF21[Tyr20]蛋白。
- 张耀方万晓珊赵宏鑫邵明龙杨苹孔祥鑫刘敏李校堃王会岩
- 关键词：原核表达纯化
- 人成纤维细胞生长因子21基因的克隆及在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的:以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115和SMD1168为宿主菌表达人源成纤维细胞生长因子21(hFGF21),为开发治疗糖尿病药物提供一定的实验基础。方法:根据毕赤酵母基因偏爱密码子和hFGF21氨基酸序列,设计多条寡核苷酸引物。利用融合PCR方法获得人工合成的成纤维细胞生长因子21(FGF21)基因,定向克隆到质粒pPIC9K中,电转化Pichia pastorisGS115和SMD1168。MD、MM平板筛选表型Mut+,YPD/G418平板进一步筛选高拷贝转化子。甲醇诱导表达,硫酸铵沉淀、分子筛、离子交换方法纯化目的蛋白。结果:PCR扩增出约569bp的特异性片段,测序分析正确;诱导表达上清经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:FGF21在宿主菌GS115中不表达,而在SMD1168表达上清中出现相对分子质量为20000的特异性条带,且与抗FGF21抗体产生特异性反应,阴性对照在该处无特异性带,证明hFGF21蛋白在SMD1168菌株中成功分泌表达。结论:成功克隆FGF21基因,并在Picha pastorisSMD1168中获得表达。
- 邵明龙赵宏鑫杨苹万晓珊孔祥鑫王会岩李校堃
- 关键词：毕赤酵母PPIC9K基因克隆
- 姜黄素及其单羰基类似物的稳定性及其药理活性研究
- [目的] 1.研究不同条件下的光照、温度、pH值及生物介质对姜黄素及化合物溶液稳定性的影响。 2.建立大鼠血浆中姜黄素及化合物A的高效液相色谱测定方法,研究其在大鼠体内的药动学过程 3.研究化合物的药理...
- 杨苹
- 关键词：姜黄素稳定性药理活性
- 文献传递
