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人可溶性增殖诱导配体促HeLa细胞增殖作用的研究: 2007年; 目的观察人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation-induced ligand,sAPRIL)是否具有促进宫颈癌细胞株HeLa增殖的作用及其机制。方法用Brdu法检测sAPRIL蛋白对人宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,进而用RT-PCR法检测HeLa细胞APRIL受体的表达情况。结果原核表达的sAPRIL蛋白能促进HeLa细胞增殖。HeLa细胞表达APRIL的受体HSPG1、HSPG2,而不表达BCMA、TACI及HSPG4。结论sAPRIL有明确的促HeLa细胞增殖作用。由于HeLa细胞有APRIL受体HSPG1、HSPG2的表达,我们初步推测该作用可能是通过HSPG1及HSPG2起作用的。; 郑英如李力刘宝英李媛李蓉芬郭建新; 关键词：增殖诱导配体受体宫颈癌细胞增殖

人可溶性APRIL突变体的原核表达与纯化: 2007年; 目的制备人可溶性增殖诱导配体(soluble a proliferation inducing ligand,sAPRIL)的两种突变体,为寻找APRIL的竞争抑制剂创造条件。方法采用一步反向PCR法,以人APRIL第186位甘氨酸(186G)和187位谷氨酰胺(187Q)残基为突变位点,构建如下两个突变体DNA,即sAPRIL突变体-1(mutant sAPRIL-1,msAPRIL-1)DNA(186G被赖氨酸残基K置换,187Q缺失)和msAPRIL-2 DNA(186G187Q置换为186K187G);测序后将两突变体DNA分别亚克隆于原核表达载体pQE-80L,继而在大肠杆菌DH5α中表达相应突变体蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,经Ni2+-NTA和Sephadex G-75柱层析纯化相应突变体蛋白。结果一步反向PCR结合DNA测序,得到了与上述设计一致的两个sAPRIL突变体DNA。将两突变体DNA分别亚克隆于pQE-80L后,在大肠杆菌DH5α中成功表达了相应突变体蛋白。经Ni2+-NTA柱层析成功地纯化了两突变体蛋白,经Sephadex G-75柱层析成功获得了两突变体蛋白的三聚体分子。结论成功制备了sAPRIL的两种突变体蛋白,为寻找基于sA-PRIL突变体的抗肿瘤分子奠定了基础。; 郑英如李力李媛张立龚薇刘宝英; 关键词：增殖诱导配体突变体原核表达肿瘤

人可溶性TALL-2突变体的原核表达及纯化被引量：1: 2006年; 目的制备人可溶性(solubleTNFandapoptosisligand-relatedleukocyte-expressedligand2,sTALL-2)的3种突变体,为寻找sTALL-2的竞争抑性制剂创造条件。方法采用一步反向PCR,将编码sTALL-2第187位谷氨酰胺(Gln)的核苷酸序列分别置换为丝氨酸(Ser)、天冬氨酸(Asp)、精氨酸(Arg)的编码序列,测序正确后,亚克隆到原核表达载体pQE-80L;经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblotting鉴定表达产物,Ni2+-NTA柱层析纯化目和蛋白,进而经Sepha-dexG-75柱层析,获得同源三聚体分子。结果经一步反向PCR扩增后均得到441bp的DNA片段,测序分析表明分别为sTALL-2第187位谷氨酰胺残基置换为Ser、Asp、Arg的序列,3种突变体蛋白在大肠杆DH5α中获得成功表达,并得以有效纯化。结论成功制备了sTALL-2的3种突变体蛋白,为进一步探讨sTALL-2结构与功能的关系及寻找基于sTALL-2突变体的抗肿瘤分子奠定了基础。; 刘宝英郑英如何凤田李蓉芬龚薇黄刚; 关键词：突变体原核表达蛋白纯化

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刘宝英