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王璇: 作品数：13 被引量：86H指数：3; 供职机构：西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>; 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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大鼠TLR2胞外段(405T-573Q)多克隆抗体的制备及活性鉴定: 2015年; 目的制备大鼠Toll样受体2胞外段(TLR2ex,405T-573Q)的多克隆抗体并鉴定其活性。方法用反转录PCR从大鼠肝细胞中扩增长507个碱基的TLR2部分胞外段,并构建重组表达载体p ET28a-TLR2ex。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达TLR2ex-6×His融合蛋白,该蛋白经亲和层析纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。ELISA鉴定抗血清的效价,Western blot法检测抗血清的特异性。结果成功构建了原核表达载体p ET28a-TLR2ex,并成功表达纯化了TLR2ex-6×His融合蛋白,将该蛋白免疫BALB/c小鼠后获得抗血清;Western blot法结果显示该血清可以特异性地检出E3大鼠脾组织TLR2蛋白,ELISA测定该多克隆抗体的效价可以达到1∶76 800。结论成功制备了大鼠TLR2胞外段(405T-573Q)的多克隆抗体。; 刘莉蓝茜李靖伊静王璇李玥张富军吕社民李冬民; 关键词：TOLL样受体2 胞外段多克隆抗体

利用TRIzol 试剂和液氮提取大鼠胰腺高质量总RNA被引量：10: 2009年; 目的建立胰腺高质量总RNA快速、经济、稳定的提取方法。方法应用TRIzol试剂和液氮提取大鼠胰腺总RNA,通过总RNA含量和A260/280比值的测定及10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳评估总RNA的质量,并用RT-PCR检测大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶和β-actin的表达。结果利用TRIzol和液氮提取的大鼠胰腺总RNA量可达到3～6μg/mg胰腺组织,A260/280比值在1.75～1.89之间。在10 g/L非变性琼脂糖凝胶电泳时,均可见28S及18S条带,并且在28S、18S条带间可见明显的云雾状阴影。大鼠胰岛素1、胰高血糖素、胰α-淀粉酶、β-actin RT-PCR产物电泳结果显示均有清晰的条带。结论应用TRIzol试剂和液氮成功地提取了大鼠胰腺高质量的总RNA,后者可用于RT-PCR研究。; 李冬民任吴超王璇王飞苗高玉韩燕宁启兰宋天保吕社民; 关键词：大鼠胰腺总RNA提取液氮

氢过氧化物及谷胱甘肽过氧化物酶在肿瘤发生过程中的作用被引量：3: 2015年; 癌症细胞能产生高量的活性氧(ROS)且逃避凋亡,氢过氧化物在较低水平时能支持癌症细胞增殖、侵袭、迁移和血管生成,但在较高的水平时诱导细胞凋亡。谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidases,GPxs)通过调节氢过氧化物水平从而实现致癌和抗癌双重效果、使其在肿瘤发生过程中的作用变得更为复杂;不同亚型的GPxs在肿瘤发生过程的作用也不尽相同。; 王璇张鹏李冬民; 关键词：氢过氧化物谷胱甘肽过氧化物酶细胞凋亡

组蛋白去乙酰化酶3真核表达载体的构建和鉴定: 2011年; 目的利用pEGFP-N1真核表达载体构建组蛋白去乙酰化酶3真核表达载体pEGFP-Hdac3,并鉴定其在大鼠肝癌细胞系CBRH-7919中的表达。方法利用大鼠肝脏cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)获取目的基因Hdac3;用HindⅢ、BamH I双酶切真核表达载体pEGFP-N1和目的基因Hdac3,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒。利用测序正确的重组体转染CBRH-7919细胞,检测Hdac3和PPAR-γ的mRNA表达。结果利用基因克隆技术获得组蛋白去乙酰化酶3的真核表达载体pEGFP-Hdac3重组质粒。PCR,双酶切,DNA测序证实目的基因H-dac3已成功插入pEGFP载体中。用重组质粒转染大鼠肝癌细胞系CBRH-7919后Hdac3 mRNA表达显著升高、而PPAR-γmRNA表达明显降低。结论本研究成功构建了蛋白去乙酰化酶3的真核表达载体pEGFP-Hdac3。; 王璇任娟张伯翔于涛蓝茜李玥吕社民李冬民; 关键词：组蛋白脱乙酰基酶类

用高脂饮食诱导E3大鼠构建的新型非酒精性脂肪肝炎模型: 目的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是严重危害人类健康的最主要慢性肝病,然而目前还没有理想的动物模型来研究其分子发病机制。本研究的目的就是利用高脂饮食诱导近交系DA.1U和E3雄性大鼠、建立能模拟人类不良生活方式引起NAS...; 李冬民王璇蓝茜李玥任娟吕社民; 关键词：高脂饮食非酒精性脂肪肝炎; 文献传递

2型糖尿病并发周围血管病变的临床流行病学分析被引量：69: 2013年; 目的通过对比分析2型糖尿病并发周围血管病变(DPVD)及未发生周围血管病变(非DPVD)病例的临床流行病学资料,明确2型糖尿患者伴发DPVD的相关危险因素,为其早期诊治和预防提供依据。方法收集157例40～70岁临床已诊断2型糖尿病患者的临床流行病学资料,依据周围血管病的诊断标准将其分为DPVD组和非DPVD组;以生化分析仪测定两组患者的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和超敏C反应蛋白(hsCRP);用多因素Logistic回归分析相关危险因素。结果与未发生周围血管病变病例相比,DPVD组患者病程较长,且高血压、周围神经病变及糖尿病眼病的并发率较高,生化分析显示DPVD组患者血清中hsCRP、TC/HDL-C水平升高,而HDL-C降低;经多因素Logistic回归分析发现,病程、hsCRP、HDL-C、TC/HDL-C为DPVD的独立危险因素。结论病程、血压增高、周围神经病、眼病、HDL-C减低及hsCRP增高与2型糖尿病患者并发周围血管病变相关,并且病程、HDL-C、hsCRP、TC/HDL-C是周围血管病变的独立危险因素。; 杨维娜王璇蓝茜李玥任娟何岚吕社民李冬民; 关键词：2型糖尿病周围血管病变

含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区报告基因载体的构建和鉴定: 2014年; 目的利用pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector(简称为pmirGLO报告基因载体)构建并鉴定含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区报告基因载体(pmir-Insr-3′UTR及pmirmutant-Insr-3′UTR)。方法以大鼠肝脏cDNA为模板,PCR获取目的片段(即含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区);用PmeI、XbaI双酶切pmirGLO报告基因载体和含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR区,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒。结果 PCR和双酶切证实pmir-Insr-3′UTR及pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中均插入目的片段;DNA测序结果进一步证实pmir-Insr-3UTR重组载体中成功插入了胰岛素受体mRNA 3′UTR区,pmir-mutant-Insr-3′UTR重组载体中成功插入了在miR-497结合位点含有3个突变碱基的胰岛素受体mRNA 3′UTR片段。结论成功构建了含miR-497野生及突变结合位点的胰岛素受体mRNA 3′UTR报告基因载体pmir-Insr-3′UTR及pmir-mutant-Insr-3′UTR。; 王美晨王璇蓝茜李玥刘莉伊静李靖宋刘梅马莎蕊宁启兰李冬民; 关键词：胰岛素受体

谷胱甘肽过氧化物酶2、硒及莱菔硫烷在小鼠结肠癌中的相互作用被引量：1: 2014年; 慢性炎性和硒元素的缺乏被认为是结肠癌发病的危险因素。其中硒元素可能通过特异性硒蛋白介导发挥保护作用。通过给予野生型和GPx2基因敲除鼠不同硒含量的饮食,研究在不同硒水平以及防癌药物莱菔硫烷SFN的干预下GPx2基因敲除鼠和野生鼠对结肠癌的易感性。最终证实,尽管GPx2虽然促进肿瘤的生长,抑制炎性介导的肿瘤的发生,但是硒抑制肿瘤的保护作用不完全依赖GPx2的表达。同样的,SFN发挥保护作用需要硒的参与而不是GPx2。; 王璇王君锋李冬民; 关键词：硒莱菔硫烷结肠癌

大鼠肝脏干细胞的胰十二指肠同源盒基因表达系的构建与初步鉴定: 2009年; 目的建立大鼠肝脏干细胞的Pdx-1基因表达系。方法逆行穿刺SD大鼠乳鼠肝脏门静脉,经胶原酶Ⅳ消化并分离肝脏干细胞;免疫组织化学鉴定大鼠肝脏干细胞标志物细胞角蛋白18/19、甲胎蛋白的表达;构建pEGFP-Pdx-1表达载体并酶切鉴定,用脂质体2000介导表达载体转染大鼠肝脏干细胞后,荧光显微镜观察GFP表达,免疫组织化学鉴定Pdx-1的表达。结果肝脏门静脉逆行穿刺分离培养大鼠肝脏干细胞具有分裂增殖能力、角蛋白18/19、甲胎蛋白表达阳性;pEGFP-Pdx-1表达载体转染后的肝脏干细胞可表达绿色荧光蛋白报告基因和Pdx-1蛋白。结论成功建立了大鼠肝脏干细胞Pdx-1表达系。; 任吴超李冬民王璇高玉韩燕宁启兰张富军宋天保吕社民; 关键词：肝脏干细胞

miR-144负性调节大鼠巨噬细胞TOLL样受体2的表达被引量：3: 2015年; 目的明确TOLL样受体2(TLR2)与micro RNA144(mi R-144)作用之间的关系。方法利用不同浓度的mi R-144的模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)瞬时转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,RT-q PCR检测mi R-144和TLR2及其下游分子TNF-α的表达。利用大鼠肝脏c DNA为模板,PCR获取目的片段(即含mi R-144野生及突变结合位点的TLR2 m RNA的3'UTR区);用SacⅠ、XbaⅠ双酶切pmir GLO报告基因载体和含mi R-144野生及突变结合位点的TLR2 m RNA的3'UTR区,构建携带上述片段的双荧光素酶报告基因,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒,即pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR;并用mi R-144的mimics与双荧光素酶报告基因共转染明确mi R-144与TLR2 m RNA的3'UTR区的靶向关系。结果瞬时转染100 nmol/L mi R-144 mimics后,NR8383细胞中mi R-144表达显著升高,而TLR2及其下游分子TNF-α表达显著下降;而100 nmol/L mi R-144 inhibitor作用则相反。PCR和双酶切DNA测序结果证实pmir-TLR2-3'UTR及pmir-mutant-TLR2-3'UTR重组载体构建成功;用100 nmol/L mi R-144 mimics与空载体及上述两个构建体分别共转染HEK 293T细胞后,pmir-TLR2-3'UTR转染组相对荧光素酶活性显著降低。结论 mi R-144通过靶向结合TLR2 m RNA的3'UTR区负性调节TLR2及其下游促炎因子的表达。; 王璇蓝茜刘莉伊静李靖李玥王美晨李嘉熙宋刘梅李冬民; 关键词：TOLL样受体2 巨噬细胞

王璇

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